猪ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＩＣＡＭ－３和ＬＳＥＣｔｉｎ及其用途制造技术

本发明专利技术涉及编码新型猪ＤＣ－ＳＩＧＮ和ＬＳＥＣｔｉｎ蛋白的独特、完整基因组序列（包括ｐＤＣ－ＳＩＧＮ基因和ｐＬＳＥＣｔｉｎ的全长ｃＤＮＡ和基因的新型核苷酸序列）的克隆、鉴定和表征。本发明专利技术还提供了编码从猪的单核细胞来源的树突细胞新发现的猪ＩＣＡＭ－３同种型的核酸分子及其用途。具体来说，本发明专利技术涉及分离的核酸分子，所述核酸分子包括编码猪ＤＣ－ＳＩＧＮ、猪ＩＣＡＭ－３、猪ＬＳＥＣｔｉｎ中的一种或多种的核苷酸序列、所述核苷酸序列的补体或所述核苷酸序列的功能限定部分或连接到蛋白的蛋白融合产物，所述蛋白可能来源于猪或人。本申请中还描述了分离和克隆所述新型猪基因的方法及将所述新核苷酸序列用于繁殖病毒特别是包膜病毒的改进方法的方法。本发明专利技术还包括可稳定地表达所述猪蛋白的新转染细胞或细胞系、新抗体等。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及来源于各种猪单核细胞来源的树突和肝细胞的新型猪DC-SIGN和猪 LSECtin基因、cDNA、猪DC-SIGN和猪LSECtin蛋白、稳定表达所述新型蛋白的转染细胞或细 胞系、融合产物、抗体、分离和克隆所述猪基因的方法及所述猪蛋白用于繁殖病毒的用途。 本专利技术还提供了编码从猪单核细胞来源的树突细胞新发现的猪ICAM-3同种型的核苷酸序 列。相关技术描述本说明书中引用的所有专利和公开物的全部内容通过引用结合于本文中。树突细胞(DC)是遍布外周免疫系统的专门性抗原呈递细胞(APC)。侵入性外源抗 原引发未成熟DC从血液向组织迁移，它们在所述组织处检测并捕获所述抗原(K. Palucka 禾口 J· Banchereau，〃Dendritic cell -.a link between innate andadaptive immunity ( M 突细胞天然免疫和获得性免疫之间的连接)，“J. Clin. Immunol. 19 :12-25 (1999))。激 活的DC通过MHC分子将捕获的蛋白加工成免疫原性肽(称为MHC分子或主要组织相容性 复合体的一组膜糖蛋白)并呈递给T细胞。通过DC识别侵入性病原体受到模式识别受 体(PRR)包括 iToll 样受体(TLR)和凝集素介导(S. Thoma-Uszynski 等人，"Induction of directantimicrobial activity through mammalian toll-like receptors (通过口甫季L动 物的toll样受体诱导直接抗微生物活性)，“Science 291 :1544-1547(2001) ；W. I. Weis 等人，“The C-type lectin superfamily in the immune system(免疫系统中的 C-型 凝集素超家族)，“Immunol. Rev. 163 19-34 (1998))。在DC表面表达的凝集素是钙依赖 性C-型凝集素受体(CLR)家族中的成员并在抗原捕获和DC内在化中起关键作用(Weis等 人，1998，出处同上)。CLR也在其它APC，包括巨噬细胞上表达。CLR家族包括通过以钙依赖性方式结合到糖蛋白配体上的多糖链上进行蛋白-糖 相互作用的大量蛋白。许多CLR属于在APC表面表达的PRR，它们能识别外源病原体，在宿 主免疫应答中起关键作用。II型CLR根据它们位于细胞胞质内的NH2末端结构域-胞质尾 区(CT)分类。其它II型CLR结构域包括在CT后的跨膜结构域(TMD)、在暴露于细胞外的 羧基末端处单糖识别结构域(CRD)和在TMD和CRD之间的颈结构域。II型CLR的人凝集素基因簇，位于人染色体19pl3. 3处的⑶23/LSECtin/DC-SIGN/L-SIGN,越来越引起了 人们的关注。人 DC-SIGN、hL-SIGN 和 hLSECtin,它 们具有类似的基因组结构(W.Liu等人，“Characterization of a novel C-type lectin-like gene, LSECtin :demonstrationof carbohydrate binding and expression in sinusoidal endothelial cells of liverand lymph node ( 一禾中新型 C 型 基因LSECtin的表征糖结合的展示及在肝和淋巴结的窦状内皮细胞内的表达)，“J. Biol. Chem. 279 18748-58 (2004))，是能介导病原体识别的重要C-型凝集素。人 CD23(FCER2)是低亲和力的IgE受体，其在细胞-细胞粘附、B细胞存活和抗原呈递中起 重要作用。树突细胞特异性细胞间粘附分子-3(" ICAM-3")结合非整合素(人⑶209， 也称为‘‘DC-SIGN”，一种44kDa的II型跨膜蛋白)，一种CLR,被确定为介导DC和T细胞 相互作用的 ICAM-3 结合蛋白(T. B. Geijtenbeek 等人，“Identificationof DC-SIGN, a novel dendritic cell-specific ICAM-3receptor that supportsprimary immune responses (DC-SIGN- 一种支持初次免疫应答的新型树突细胞特异性ICAM-3受体的鉴 定)，“Cell 100 :575-5850000))和介导HIV-I传播到反式易感细胞的HIV-lgpl20 受体(Τ· B. Geijtenbeek 等人，“DC-SIGN，a dendriticcell-specific HlV-l-binding protein that enhances trans-infection of Tcells (DC-SIGN, 一 种增强 T 细胞转 染的树突细胞特异性HIV-I结合蛋白)，“CelllOO :587-597(2000)).此外，发现 DC-SIGN与ICAM-2结合蛋白相互作用，调节趋化因子诱导的跨越休止和激活内皮的DC 运输 T. B. Geijtenbeek 等人，“DC-SIGN-ICAM_2interaction mediates dendritic celltrafficking(DC-SIGN-ICAM-2 相互作用介导树突细胞运输)，“Nat. Immunol. 1 353-357(2000)) ο 第 二种人 DC-SIGN (hDC-SIGN)同源体 hL_SIGN(CD209L)或 DC-SIGNR 随后得以确认并显示出具有与hDC-SIGN类似的作用，但病原体识别性能稍微不同 (A. A. Bashirova等人，“A dendritic eel 1-specificintercellular adhesion molecule 3-grabbing nonintegrin(DC-SIGN)-relatedprotein is highly expressed on human liver sinusoidal endothelial cells andpromotes HIV-Iinfection(树突细胞特异性细 胞间粘附分子-3结合非整合素(DC-SIGN)相关蛋白在人肝窦状内皮细胞上高度表达且促 进 HIV-I 感染)，“J. Exp. Med. 193 :671-678 (2001)) 人DC-SIGN在体外主要在单核细胞来源的人DC上表达，在体内主要在正常人淋巴 结、真皮、粘膜和脾内的未成熟和成熟DC和肺泡内巨噬细胞上表达(T. B. Geijtenbeek等 人’ “Identification of DC-SIGN,a novel dendriticcell-specific ICAM_3receptor that supports primary immune responses (DC-SIGN- —iSiS^ WflMW 突细胞特异性 ICAM-3 受体的鉴定)，“Cell 100 :575-585 (20本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的核酸分子，所述核酸分子包括编码选自ｐＤＣ－ＳＩＧＮ、ｐＩＣＡＭ－３和ｐＬＳＥＣｔｉｎ的一种或多种蛋白的核苷酸序列、所述核苷酸序列中至少一个的补体和所述核苷酸序列中至少一个的功能性限定部分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄耀伟，孟祥金，
申请(专利权)人：弗吉尼亚科技知识产权有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]