培养破囊壶菌目微生物的方法技术

本发明专利技术大体上涉及微生物细胞培养领域。发明专利技术了一种破囊壶菌目微生物的细胞培养基及破囊壶菌目微生物的培养方法，特别地用于生产ω－３脂肪酸。此外，发明专利技术了使用酒石酸铵作为氮源来培养破囊壶菌目微生物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术大体上涉及微生物细胞培养领域。专利技术了 一种破囊壶菌 (Thraustochytriales)目微生物的细胞培养基及破囊壶菌目微生物的培养方法，特别地 用于生产ω-3脂肪酸。此外，专利技术了使用酒石酸铵作为氮源来培养破囊壶菌目微生物 (Thraustochytriidea)0
技术介绍
本专利技术披露了通过改进细胞培养基提高在破囊壶菌目微生物生物量中的PUFA总 量的方法，特别是提高ω-3 二十二碳六烯酸(DHA)总量的方法。当特殊的盐，尤其是酒石 酸铵，存在于细胞培养基中时，生物量中的DHA量提高。由于不仅提高了 DHA总量，而且提 高了脂质总量，简化了这些产物的生产过程，从而获得更高的DHA收率。目前，有多种不同的培养破囊壶菌目海洋微生物(尤其是属于Ulkenia种的微生 物)的细胞培养基。EP 0935667记载了在含有磷酸氢二钾、硫酸铵、硫酸钠和不同氯化物的 培养基中培养Ulkenia细胞。US2007/0141686A1记载了培养破囊壶菌的方法，其中细胞培 养基是使用碳酸钙PH稳定的。US2007/0054384A1记载了不添加钠盐和盐酸盐的低盐培养 基中培养破囊壶菌的方法。US6，410，281B1记载了使用含非含氯钠盐(特别是硫酸钠)的 细胞培养基培养破囊壶菌的方法。已知，属于破囊壶菌(Thraustochytriidea)目和(尤其是)属于Ulkenia属的微 生物用来生产含ω-3 二十二碳六烯酸(亦已知为DHA)和/或ω-3 二十二碳五烯酸(亦 已知为DPA)的脂质。不同的多不饱和脂肪酸(PUFA)和(尤其是)ω-3脂肪酸是已知的人体营养和有 益的食品添加剂的主要成分。例如，已知，PUFA能降低血清中甘油三脂浓度，由此作为降脂 剂使用。DHA和DPA均是用做食品添加剂的多不饱和脂肪酸。目前通过培养Ulkenia来生产DHA和/或DPA的方法会引起令人不满意的脂质产 率，尤其是较低的DHA和/或DPA的产率或包括复杂的生产步骤。仍存在改善培养破囊壶 菌目微生物的方法需求。
技术实现思路
因此，本专利技术的一个目的就是专利技术一种新的简单且经济的培养破囊壶菌目微生物 的方法，以提高PUFA的产量。本专利技术的一个目的是避免现有技术的缺点。本专利技术的另一个目的是专利技术一种不同 的提高PUFA产率的方法，尤其是在破囊壶菌细胞培养中提高DHA和/或DPA的产率的方法。 本专利技术的另一个目的是专利技术一种不同的生产高纯度PUFA (尤其是DHA和/或DPA)的方法。根据本专利技术的主张的主题，将解决上述这些目的和其他的目的(其未予以明确地 叙述，但通过本说明书的上下文也披露给本领域技术人员)。3通过提供主张的方法、细胞培养基、使用硫酸铵和制品，本专利技术解决了本专利技术提到 的技术问题。本专利技术解决了本专利技术提到的技术问题，特别是通过提供一种培养破囊壶菌目微生 物的方法解决了技术问题，该方法包括步骤a)转移微生物至细胞培养基中；b)在细胞培 养基中培养微生物，其中细胞培养基不包含硫酸铵。在一种优选的本专利技术的实施方式中，细胞培养基包含至少一种不是硫酸铵的铵 盐。在一种优选的本专利技术的实施方式中，细胞培养基包含酒石酸铵。在一种优选的本专利技术 的实施方式中，细胞培养基包含酒石酸铵而不包含硫酸铵。此外，通过提供一种(该方法包括步骤a)转移微 生物至细胞培养基中；b)在细胞培养基中培养微生物，其中细胞培养基不包含硫酸铵但包 含酒石酸铵)，本专利技术解决了本专利技术提到的技术问题。此外，通过提供一种(该方法包括步骤a)转移微 生物至细胞培养基中；b)在细胞培养基中培养微生物，其中细胞培养基包含酒石酸铵)，本 专利技术解决了本专利技术提到的技术问题。在一种上述方法的特别地优选的实施方式中，预知后续步骤d)以从培养基或微 生物中收获，尤其是分离多不饱和脂肪酸，特别是DHA和/或DPA。此外，通过提供一种生产至少一种多不饱和脂肪酸的方法(该方法包括步骤a) 转移破囊壶菌目微生物至细胞培养基中；b)在细胞培养基中培养微生物；和c)从微生物和 /或细胞培养物中收获所述的多不饱和脂肪酸，其中细胞培养基包含酒石酸铵)，本专利技术解 决了本专利技术提到的技术问题。在本专利技术的一种实施方式中，多不饱和脂肪酸是从微生物和/或细胞培养物中以 包含各种脂质的油的形式收获的。根据本专利技术，脂肪酸是一种脂肪族的一元羧酸。脂质是包含连同有关的磷脂、醇、 乙醇、烃、酮和有关化合物的脂肪酸甘油酯脂类的脂肪或油。根据本专利技术，多不饱和脂肪酸(PUFA)为链长大于C12的包含至少2个双键的多不 饱和的长链脂肪酸。可以根据本专利技术的方法生产的PUFA优选为n-3脂肪酸和n-6脂肪酸， 更优选n-3脂肪酸。从本专利技术的意义上说，n-3脂肪酸(ω-3脂肪酸)为链长大于C12的包含至少2个 双键的多不饱和脂肪酸。在本专利技术的一种优选的实施方式中，在进一步步骤d)中从其他脂质中分离出至 少一种多不饱和脂肪酸(PUFA)。在本专利技术的一种优选的实施方式中，至少一种多不饱和脂肪酸(PUFA)为高纯度 的 PUFA。在本专利技术的一种优选的实施方式中，多不饱和脂肪酸包含ω-3-二十二碳六烯酸 (DHA)和/或ω-3-二十二碳五烯酸(DPA)。在本专利技术的一种优选的实施方式中，多不饱和 脂肪酸包含ω-3-二十二碳六烯酸(DHA)。在本专利技术的一种优选的实施方式中，多不饱和脂 肪酸包含ω-3-二十二碳五烯酸(DPA)。在本专利技术的一种优选的实施方式中，多不饱和脂肪 酸包含ω-3-二十二碳六烯酸(DHA)和ω-3-二十二碳五烯酸(DPA)。在本专利技术的一种优 选的实施方式中，多不饱和脂肪酸为ω-3-二十二碳六烯酸(DHA)和/或ω-3-二十二碳4五烯酸(DPA)。在本专利技术的一种优选的实施方式中，多不饱和脂肪酸为ω-3-二十二碳六烯 酸(DHA)和ω-3-二十二碳五烯酸(DPA)。在本专利技术的一种优选的实施方式中，多不饱和脂 肪酸为ω-3-二十二碳六烯酸(DHA)。在本专利技术的一种优选的实施方式中，多不饱和脂肪酸 为ω-3-二十二碳五烯酸(DPA)。本专利技术提供意外的启示为在培养基中使用酒石酸铵以培养破囊壶菌目海洋生物 来生产PUFA，其出乎意料地显著增加了 DHA量。使用其他氮源，如氯化铵，能增加如脂质含 量的量，但另一方面降低了总生产率，进而降低了总生物量的量，这样没有经济上的利益。 鉴于此，意外地获得高DHA和总脂质的量的同时，总生物量仍在常规的范围之内。不期望本 专利技术的在破囊壶菌目微生物中生产PUFA的方法能增加DHA的总含量。在本专利技术的一种优选的实施方式中，破囊壶菌目微生物包含至少28 % (重量)，更 优选大于28% (重量)，仍更优选大于30% (重量)，最优选大于31% (重量)ω-3-二十二 碳六烯酸(DHA)(基于微生物的总干重)。在本专利技术的一种优选的实施方式中，在步骤c)中 破囊壶菌目微生物包含至少28% (重量)ω-3-二十二碳六烯酸(DHA)(基于微生物的总 干重)。在本专利技术的一种优选的实施方式中，在步骤c)中破囊壶菌目微生物包含大于28% (重量)ω-3-二十二碳六烯酸(DHA)(基于微生物的总干重)。在本专利技术的一种优选的实施 方式中，在步骤c)中破囊壶菌目微生物包含大于30% (重量)ω-3-二十二碳六烯酸(DHA) (基于微本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种培养破囊壶菌目微生物的方法，其包括步骤　　ａ）转移微生物至细胞培养基中，和　　ｂ）在细胞培养基中培养微生物，　　其中，细胞培养基包含酒石酸铵。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：马库斯卢伊，
申请(专利权)人：隆萨股份公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]