酶促还原烯衍生物的方法技术

公开了通过在还原酶的存在下还原通式（１）的化合物，从通式（１）的不饱和烯衍生物酶促制备通式（２）的化合物的方法，所还原酶包含多肽序列ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１、２或３的至少一种序列，或具有与ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１、２或３有至少８０％同一性的功能上等同的多肽序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及用于酶促还原通式(1)的烯衍生物的方法。专利技术目的本专利技术目的是提供用于从通式(1)的不饱和烯衍生物，尤其以高化学产率和极好的立体选择性酶促制备通式(2)的化合物的方法。专利技术概述通过使用还原酶YqjM、OPR1、OPR3及其功能等同物还原通式(1)的烯衍生物来解决上述目的。专利技术详述本专利技术涉及通过在还原酶的存在下还原通式(1)的化合物，从通式(1)的不饱和烯衍生物酶促制备通式(2)的化合物的方法，其中A是硝基(-NO2)、酮基(-CRO)、醛基(-CHO)、羧基(-COOR)，R＝H或任选取代的C1-C6-烷基，R1、R2和R3相互独立地是H、C1-C6-烷基、C2-C6-烯基、羧基，或任选取代的碳环或杂环的芳族或非芳族基团，或者R1连接到R3上，以成为4-8元环的一部分，或者R1连接到R上，以成为4-8元环的一部分，条件是R1、R2和R3不相同，所述还原酶(i)包-->含多肽序列SEQ ID NO：1、2或3中的至少一种或(ii)具有与SEQ IDNO：1、2或3有至少80％同一性的功能上等同的多肽序列。原则上，本专利技术的方法可使用纯化或浓缩的酶本身和天然或重组表达该酶的微生物，或使用来自其的细胞匀浆来进行。除非另有说明，-C1-C6-烷基具体指甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或己基，及对应的单分支或多分支类似物，如异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基或<br>新戊基；尤其优选C1-C4-烷基；-C2-C6-烯基具体指具有2至6个碳原子的上述烷基的单不饱和类似物，尤其优选对应的C2-C4-烯基，-羧基具体指COOH基，-碳环和杂环的芳基或非芳基环具体指具有3至12个碳原子，并且适当时具有1至4个杂原子，如N、S和O，尤其是N或O的任选稠环。可提及的实例是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基，其单不饱和类似物或多不饱和类似物，如环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环己二烯基，环庚二烯基；苯基和萘基；和具有选自O、N和S的1至4个杂原子的5元至7元饱和或不饱和杂环基，其中所述杂环可任选地稠合到其它杂环或碳环上。应特别提及衍生自吡咯烷、四氢呋喃、哌啶、吗啉、吡咯、呋喃、噻吩、吡唑、咪唑、噁唑、噻唑、吡啶、吡喃、嘧啶、哒嗪、吡嗪、苯并呋喃、吲哚及喹啉的杂环基。所述环状基及上述烷基和烯基可任选地被取代一次或更多次，例如1、2或3次。应提及的合适取代基的实例：卤素，特别是F、Cl、Br；-OH、-SH、-NO2、-NH3、-SO3H、C1-C4-烷基和C2-C4-烯基、C1-C4-烷氧基；和羟基-C1-C4-烷基；其中所述烷基和烯基如上文定义，并且所述烷氧基来自上文定义的对应烷基。R1和R3基彼此之间也可直接连接，以与待还原双键一起形成4-8元环，优选5-或6-元环，例如环戊烯或环己烯结构，其也可任选地被例如烷基，优选甲基取代。-->R1和R基彼此之间也可直接连接，以与待还原双键一起形成4-8元环，优选5-或6-元环，例如环戊烯或环己烯结构，其也可任选地被例如烷基，优选甲基取代。上述4-8元环可以是碳环(即仅是碳原子形成环)和杂环(即杂原子，如O；S；N存在于该环中)。如需要，这些碳环或杂环也仍可被取代，即氢原子被杂原子置换。例如，认为N-苯基琥珀酰亚胺(参阅下文的底物3)是这种取代的杂环，其为R1和R形成环的结果。本专利技术特别有益的实施方案包含将以下底物(通式1的化合物)酶促还原成通式(2)的对应化合物：-->底物1底物2底物3底物4底物5底物6底物7-->表1                              OPR1            OPR3 wt         YqjM底                    ％     辅因子                   E.e.％    ％    E.e.％    ％    E.e.％物1    NADH             ＞99    (R)97     69    (S)82     94    (S)921    NADPH            ＞99    (R)96     72    (S)87     85    (S)701    NAD+-FDH         ＞90    (R)95     40    (S)75     50    (S)851    NADP+-G6PDH      90      (R)98     75    (S)93     47    (S)842    NADH             ＞99    (S)＞95   90    (S)＞95   70    (S)＞952    NADPH            ＞99    (S)＞95   90    (S)＞95   73    (S)＞952    NAD+-FDH                    主要产物：香茅醇(饱和醇)2    NAD+-GDH         20      (S)＞95   90    (S)＞95   3     (S)＞952    NADP+-G6PDH      15      (S)＞95   95    (S)＞95   57    (S)＞953    NADH             58      (S)61     27    (S)45     50    (S)553    NADPH            45      (S)64     19    (S)45     100   (S)663    NAD+-FDH         88      (R)1      65    (R)1      100   (R)23    NADP+-G6PDH      14      (S)61     10    (S)58     72    (S)944    NADH             n.c.     -        1    (S)＞99    0.5   (S)594    NADPH            n.c.     -        2    (S)＞99    n.c.   -4    NAD+-FDH         -        -        5    (S)＞99    1     (S)644    NADP+-G6PDH      -        -        1   本文档来自技高网...

【技术保护点】
从通式（１）的不饱和烯衍生物酶促制备通式（２）的化合物的方法，该方法通过在还原酶的存在下还原通式（１）的化合物完成，　＊＊＊　其中　Ａ是硝基（－ＮＯ↓［２］）、酮基（－ＣＲＯ）、醛基（－ＣＨＯ）、羧基（－ＣＯＯＲ），Ｒ＝Ｈ 或任选取代的Ｃ↓［１］－Ｃ↓［６］－烷基，Ｒ↑［１］、Ｒ↑［２］和Ｒ↑［３］相互独立地是Ｈ、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［６］－烷基、Ｃ↓［２］－Ｃ↓［６］－烯基、羧基，或任选取代的碳环或杂环的芳族或非芳族基团，或者Ｒ↑［１］连接到Ｒ↑［３］上，以成为４－８元环的一部分，或者Ｒ↑［１］连接到Ｒ上，以成为４－８元环的一部分，条件是Ｒ↑［１］、Ｒ↑［２］和Ｒ↑［３］不相同，所述还原酶　（ｉ）包含多肽序列ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１、２或３中的至少一种，或　（ｉｉ）具有与ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ Ｏ：１、２或３有至少８０％同一性的功能上等同的多肽序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP 2006-11-15 06124126.1;EP 2006-12-22 06126993.21.从通式(1)的不饱和烯衍生物酶促制备通式(2)的化合物的方法，
该方法通过在还原酶的存在下还原通式(1)的化合物完成，
其中
A是硝基(-NO2)、酮基(-CRO)、醛基(-CHO)、羧基(-COOR)，
R＝H或任选取代的C1-C6-烷基，R1、R2和R3相互独立地是H、C1-C6-
烷基、C2-C6-烯基、羧基，或任选取代的碳环或杂环的芳族或非芳族基团，
或者R1连接到R3上，以成为4-8元环的一部分，或者R1连接到R上，以
成为4-8元环的一部分，条件是R1、R2和R3不相同，所述还原酶
(i)包含多肽序列SEQ ID NO：1、2或3中的至少一种，或
(ii)具有与SEQ ID NO：1、2或3有至少80％同一性的功能上等同
的多肽序列。
...

【专利技术属性】
技术研发人员：R施蒂默尔，B豪尔，T弗里德里希，K费伯，M哈尔，
申请(专利权)人：巴斯夫欧洲公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]