突变酶制造技术

本发明专利技术涉及具有增强性能的突变酶和使用这种酶氧化有机化合物底物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有增强性能的突变酶。
技术介绍
生物酶催化剂，如P450bm_3酶，发现越来越多地用于从精细化学品、中间体、药品和 药物代谢物的合成到有机化学污染物和污物的降解的各种工业应用中。蛋白质工程，采用 定向进化(directedevolution)或定点突变，可以用于分离已知酶的变异体，这可以对它 们的催化活性产生新的契机和应用。巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium) (1)的P450BM_3属于细胞色素P450酶的超 家族(或超族，superfamily)。在各种基因序列数据库中存在超过7，700个编码P450酶的 基因。P450酶的命名法也已经系统化。酶的超家族称为CYP，之后是酶家族的编号(因此， 为CYP1、CYP51、CYP102等)，其被分成通过字母表示的子族(因此，为CYP1A、CYP101B等)， 并且每一子族成员由数字标识(因此，为CYPlAl、CYP3A4、CYP101D3等)。编码CYP酶的基 因由斜体表示，例如CYP101A1基因。P450bm_3已被标识为CYP102A1，即，它是CYP102家族的 第一成员。自此，CYP102本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种突变ＣＹＰ１０２Ａ１酶，其具有增强的单加氧酶活性和／或改变的产物选择性并且在一个或多个氨基酸残基位置３３０、１９１、４０１、４０３、３０７、３７７、４２５、２７６、１１７、１３１或２１５处包括取代。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】GB 2007-10-8 0719620.7一种突变CYP102A1酶，其具有增强的单加氧酶活性和/或改变的产物选择性并且在一个或多个氨基酸残基位置330、191、401、403、307、377、425、276、117、131或215处包括取代。2.根据权利要求1所述的酶，其与CYP102A1的氨基酸残基1-480享有至少40%同源 性，并且可选地是其突变片段。3.根据权利要求1或2所述的酶，其包括代表CYP102A1未突变片段的1、2、3、4、5或更 多段的至少15个或至少20个邻近氨基酸。4.根据权利要求1至3中任一项所述的酶，其具有i)在位置117、131、215、330、401中的一个或多个处的保守突变；和/或ii)在位置191和276中的一个或多个处的极性氨基酸；和/或iii)在位置377和403中的一个或多个处的非极性氨基酸；和/或iv)在位置425处的不带电残基，其中，可选地在侧接位置 117、131、191、215、276、307、330、377、401、403 或 425 中的一 个或多个的位置处没有突变。5.根据权利要求1至4中任一项所述的酶，其另外包括在以下位置中的一个或多个处 的取代:47、51、74、82、87、171、188、239、259、263、264、267、319、328 或 353。6.根据权利要求5所述的酶，其包括选自R47L、Y51F、A74G、A82L、F87A、F87G、F87L、 H171L、L188Q、N239H、I259V、I263A、A264G、E267V、N319Y、A328V 或 L353I 的突变。7.根据权利要求1至6中任一项所述的突变CYP102A1酶，其中，所述突变体包括一个 或多个以下突变或突变组i)A330P；ii)A191T/N239H/I259V/A276T/L353I；iii)F87A/H171L/Q307H/N319Y；iv)F87A/A330P/E377A/D425N；v)F87A/A117V/E131D/L2151；vi)I401P；vii)R47L/Y51F/I401P；viii)F87A/I401P；ix)R47L/Y51F/F87A/I401P；x)R47L/Y51F/A330P/I401P；xi)Q403P；xii)R...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕特洛克翁，史蒂芬格雷厄姆贝尔，克里斯托弗怀特豪斯，
申请(专利权)人：ISIS创新有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]