本发明专利技术提供一种可提高在生物体内的稳定性的代谢综合症的治疗或预防剂、检查方法、检查药、以及代谢综合症的治疗药的候选化合物的筛选方法。该代谢综合症的治疗或预防剂含有作为有效成分的编码受体活性修饰蛋白（ＲＡＭＰ）２的以下（ａ）到（ｄ）中任意一个所述的ＤＮＡ、或者该ＤＮＡ编码的多肽：（ａ）具有序列号１所述的碱基序列的ＤＮＡ；（ｂ）具有能够在严紧条件下与序列号１所述的碱基序列杂交的碱基序列的ＤＮＡ；（ｃ）具有编码在序列号２所述的氨基酸序列中将一个或多个氨基酸取代、缺失和／或插入后的氨基酸序列的碱基序列的ＤＮＡ；（ｄ）由与序列号１所述的碱基序列具有９０％以上的相同性的碱基序列构成的ＤＮＡ。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种代谢综合症的治疗或预防剂、检查方法、检查药、以及代谢综合症 的治疗药的候选化合物的筛选方法。
技术介绍
近年来，代谢综合症的患者以发达国家为中心急速增加。所谓的代谢综合症，是指 内脏脂肪型肥胖(内脏肥胖、腹部肥胖)与高血糖、高血压以及高血脂中的两种以上并发的 复合生活习惯病。由于相关的复合症状，代谢综合症是促进心脏病、脑卒中等的进程以及老 年人的健康寿命和Q0L显著恶化的最大原因。在这样的背景下，为了维持全社会的活力以 及减少医疗成本，代谢综合症的征服和抑制成为大的社会需求。作为联系代谢综合症与动脉硬化、血管并发病、器官功能障碍发病之间的重要的 分子基础，脂肪因子(adipokine)等具有多样的生理活性的体液因子引起了人们的关注。 体液因子也在脂肪组织以外的各种外周器官中产生，一方面，这些外周器官通过体液因子 密切配合以维持生物体内的动态平衡，另一方面，体液因子的平衡的破坏也是动脉硬化和 器官功能障碍发病的原因之一。作为体液因子家族之一，本专利技术人关注了肾上腺髓质素 (AM)及其受体活性调节蛋白(RAMP)系统。肾上腺髓质素(AM)是在以血管为代表的全身组织产生的肽。已经明确了除了血 管扩张作用以外，AM还具有体液量调节作用、激素分泌调节作用、抗氧化作用、抗炎作用等 多样的生理活性。至此，本专利技术人报道确认了 AM敲除小鼠的杂合子血压上升，对心血管系 统施加损伤时的心肥大、纤维化、肾功能低下、动脉硬化恶化，与此相对，确认了 AM过量表 达的小鼠血压反而降低，显示出了对器官损伤和动脉硬化的抵抗力，因此，AM具有器官保护 作用、抗动脉硬化作用。(参照非专利文献1-3)。另外，AM敲除小鼠的纯合子由于血管发育不充分，在胎生中期因为弥漫性出血和 浮肿而死亡，据此，本专利技术人首次明确了 AM是血管成熟、血管结构的稳定化所必需的物质 (参照非专利文献4)。而且，最近报道了血中AM浓度伴随着肥胖而上升，与身体质量指数 相关，以及AM也在脂肪组织中表达，该表达在肥胖状态下亢进(参照非专利文献5、6)。另 一方面，观察到AM敲除小鼠随着年龄的增长，伴随着肥胖、耐糖量异常、以及生物体内氧化 应激亢进，器官损害也进展，暗示了 AM与代谢综合症之间的关联性。非专利文献1 :Shindo T et al. Circulation. 2000非专利文献2:Imai Y. Shindo T et al. ATVB. 2002非专利文献3 :Niu P, Shindo T et al. Circulation. 2004非专利文献4 :Shindo T et al. Circulation. 2001非专利文献 5:Kato J et al. Hypertens Res. 2002非专利文献 6:Numbu T et al. Regul Pept. 2005。
技术实现思路
但是，AM由于血中半衰期短，因此用作慢性疾病代谢综合症的治疗药存在很多制 约。鉴于以上事实，本专利技术的目的是提供一种能够提高在物体内的稳定性的代谢综合 症的治疗或预防剂。另外，本专利技术的目的还在于提供一种代谢综合症的检查方法和检查药、 以及代谢综合症的治疗药的候选化合物的筛选方法。本专利技术人在深入研究的过程中，关注了 AM的受体系统。AM受体本体是属于G蛋白 偶联型受体B族的称作CRLR(降钙素受体样受体)的七次跨膜型受体。CRLR与一次跨膜型 蛋白RAMP(受体活性修饰蛋白)1、2、3亚型异构体(寸〗y 7 ★ — A )中的任意一者 结合，形成异二聚体。本专利技术人通过适当改变结合在CRLR上的RAMP的亚型异构体，发现可以控制AM受 体和配体的亲和性，从而完成本专利技术。具体地本专利技术提供了以下内容。(1)、一种代谢综合症的治疗或预防剂，其中，该代谢综合症的治疗或预防剂含有 作为有效成分的编码受体活性修饰蛋白(RAMP)2的以下(a)到(d)中任意一个所述的DNA、 或者该DNA编码的多肽，(a)具有序列号1所述的碱基序列的DNA ；(b)具有能够在严紧条件下与序列号1所述的碱基序列杂交的碱基序列的DNA ；(c)具有编码在序列号2所述的氨基酸序列中将一个或多个氨基酸取代、缺失和/ 或插入后的氨基酸序列的碱基序列的DNA ；(d)由与序列号1所述的碱基序列具有90%以上的相同性的碱基序列构成的DNA。(2)、一种代谢综合症的检查方法，其中，该方法包括从受试者的细胞中提取DNA的提取步骤；扩增步骤，以提取的所述DNA为模板，使用能够特异性扩增由序列号3所述的碱基 序列构成的DNA或其表达控制区域的DNA的一部分或全部的引物进行聚合酶链反应；对扩增的DNA的碱基序列进行测序的测序步骤；比较测序后的碱基序列和序列号3所述的碱基序列的比较步骤。(3)、一种代谢综合症的检查药，其中，所述检查药的有效成分是能够特异性扩增 由序列号3所述的碱基序列构成的DNA或其表达控制区域的一部分或全部的引物、或者与 由序列号2所述的氨基酸序列构成的多肽特异性结合的抗体或抗体片段。(4)、一种代谢综合症的治疗药的候选化合物的筛选方法，其中，该方法包括使序列号2所述的氨基酸序列、或者具有在序列号2所述的氨基酸序列中将一个 或多个氨基酸取代、缺失和/或插入后的氨基酸序列的多肽与被检测物接触的步骤；检测所述多肽和所述被检测物的结合的步骤。(5)、一种代谢综合症的治疗药的候选化合物的筛选方法，其中，该方法包括对内源性RAMP2基因变异或敲除的动物给与被检测物的步骤；检测代谢综合症的症状改善的步骤。(6)、一种代谢综合症的治疗药的候选化合物的筛选方法，其中，该方法包括使表达具有序列号1所述的碱基序列的DNA、具有能够在严紧条件下与序列号1所 述的碱基序列杂交的碱基序列的DNA、或者由与序列号1所述的碱基序列具有90%以上的相同性的碱基序列构成的DNA的细胞与被检测物接触的步骤；检测所述DNA的表达量的变化的步骤。(7)、一种代谢综合症的治疗药的候选化合物的筛选方法，其中，该方法包括使表达具有序列号1所述的碱基序列的DNA、具有能够在严紧条件下与序列号1所 述的碱基序列杂交的碱基序列的DNA、或者由与序列号1所述的碱基序列具有90%以上的 相同性的碱基序列构成的DNA的细胞与被检测物接触的步骤；检测从所述DNA合成的蛋白质的细胞内局部存在的变化的步骤。(8)、一种代谢综合症的治疗药的候选化合物的筛选方法，其中，该方法包括使序列号6所述的氨基酸序列、或者具有在序列号6所述的氨基酸序列中将一个 或多个氨基酸取代、缺失和/或插入后的氨基酸序列的多肽、可分解该多肽的酶、以及被检 测物共存的步骤；测量在规定时间后的所述多肽的残留量的步骤；比较残留量的测量值与在不存在所述被检测物下测量的残留量的步骤。(9)、一种代谢综合症的治疗药的候选化合物的筛选方法，其中，该方法包括使表达具有序列号1所述的碱基序列的DNA、具有能够在严紧条件下与序列号1所 述的碱基序列杂交的碱基序列的DNA、或者由与序列号1所述的碱基序列具有90%以上的 相同性的碱基序列构成的DNA、并且表达具有序列号4所述的碱基序列的DNA、具有能够在 严紧条件下与序列号4所述的碱基序列杂交的碱基序列的DNA、或者由与序列号4所述的碱 基序列具本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种代谢综合症的治疗或预防剂，其中，该代谢综合症的治疗或预防剂含有作为有效成分的编码受体活性修饰蛋白（ＲＡＭＰ）２的以下（ａ）到（ｄ）中任一个所述的ＤＮＡ、或者该ＤＮＡ编码的多肽，（ａ）具有序列号１所述的碱基序列的ＤＮＡ；（ｂ）具有能够在严紧条件下与序列号１所述的碱基序列杂交的碱基序列的ＤＮＡ；（ｃ）具有编码在序列号２所述的氨基酸序列中将一个或多个氨基酸取代、缺失和／或插入后的氨基酸序列的碱基序列的ＤＮＡ；（ｄ）由与序列号１所述的碱基序列具有９０％以上的相同性的碱基序列构成的ＤＮＡ。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】JP 2007-11-26 2007-305122一种代谢综合症的治疗或预防剂，其中，该代谢综合症的治疗或预防剂含有作为有效成分的编码受体活性修饰蛋白(RAMP)2的以下(a)到(d)中任一个所述的DNA、或者该DNA编码的多肽，(a)具有序列号1所述的碱基序列的DNA；(b)具有能够在严紧条件下与序列号1所述的碱基序列杂交的碱基序列的DNA；(c)具有编码在序列号2所述的氨基酸序列中将一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入后的氨基酸序列的碱基序列的DNA；(d)由与序列号1所述的碱基序列具有90％以上的相同性的碱基序列构成的DNA。2.一种代谢综合症的检查方法，包括 从受试者的细胞中提取DNA的提取步骤；扩增步骤，以提取的所述DNA为模板，使用能够特异性扩增由序列号3所述的碱基序列 构成的DNA或其表达控制区域的DNA的一部分或全部的引物进行聚合酶链反应； 对扩增的DNA的碱基序列进行测序的测序步骤； 比较经测序的碱基序列和序列号3所述的碱基序列的比较步骤。3.一种代谢综合症的检查药，所述检查药的有效成分是能够特异性扩增由序列号3所 述的碱基序列构成的DNA或其表达控制区域的一部分或全部的引物、或者与由序列号2所 述的氨基酸序列构成的多肽特异性结合的抗体或抗体片段。4.一种代谢综合症的治疗药的候选化合物的筛选方法，包括使序列号2所述的氨基酸序列、或者具有在序列号2所述的氨基酸序列中将一个或多 个氨基酸取代、缺失和/或插入后的氨基酸序列的多肽与被检测物接触的步骤； 检测所述多肽和所述被检测物的结合的步骤。5.一种代谢综合症的治疗药的候选化合物的筛选方法，包括 对内源性RAMP2基因变异或敲除的动物给与被检测物的步骤； 检测代谢综合症的症状改善的步骤。6.一种代谢综合症的治疗药...
【专利技术属性】
技术研发人员：新藤隆行，
申请(专利权)人：独立行政法人科学技术振兴机构，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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