痘病毒溶瘤载体制造技术

本发明专利技术涉及包含Ｉ４Ｌ和／或Ｆ４Ｌ基因缺损的痘病毒，涉及包含该痘病毒的组合物，以及将该组合物和痘病毒用于治疗目的、更具体地用于治疗癌症的方法和用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
溶瘤病毒是一类用于治疗癌症，具有肿瘤依赖性自我永续独特性质的新型治疗 因子(HERMISTON. A demand for next-generation oncolyticadenoviruses. Current opinion in molecular therapeutics. 2006，8 卷，4 号，322-30 页.)。溶瘤病毒能够 在恶性细胞中选择性复制，并因此提供可能远远超过癌症常规治疗的效力和特异性的水 平(FISHER. Striking out atdisseminated metastases the systemic delivery of oncolytic viruses. Current opinion in molecular therapeutics. 2006,8 卷，4 号， 301-13页.)。使用这些病毒的好处是，当他们复制时，他们溶解其宿主细胞。癌细胞是多种 病毒的理想寄主，因为它们的抗病毒的干扰素途径灭活或者具有突变的肿瘤抑制基因，这 能使病毒复制不受阻碍地继续下去(CHERNAJ0VSKY，等Fighting cancer with oncolytic viruses. British medical journal. 2006，332 卷，7534 号，170-2 页·)。一些病毒天然地可以在肿瘤细胞中选择性地复制，但也可以通过修饰天然存 在的病毒而获得溶瘤病毒。为了这一目的，目前使用的修饰病毒的主要策略包括主要 病毒基因中的功能性缺失；控制这些病毒基因的表达的肿瘤或组织特异性启动子；向 性修饰将腺病毒重定向至癌细胞表面。在不久的将来，溶瘤腺病毒需要被优化，以充分 发挥其作为重要的抗癌工具的潜力，并且从而改善恶性神经胶质瘤病人的预后(JIANG， 等 Oncolyticadenoviruses as antiglioma agents.Expert review of anticancer therapy. 2006,6 卷，5 号，697-708 页·)。例如，腺病毒0NYX-015，被选择性的修饰从而在具有p53突变的细胞中复制并杀 死细胞，其正由Onyx Pharmaceuticals开发，用于各种实体瘤，包括头部和颈部、胃肠和胰 腺肿瘤的潜在治疗。它是一个重组腺病毒，它在ElB座位载有功能缺失性突变，其产物是结 合于P53肿瘤抑制蛋白并使其灭活的55kDa的蛋白质。因此，认为0NYX-015腺病毒应使 正常细胞不受影响。P53肿瘤抑制基因突变是癌症遗传异常中最常见的类型，存在于一半 以上的所有主要癌症类型中。因此，这些细胞对能很容易的复制并导致细胞死亡的病毒敏 感。0NYX-015正处于用于治疗复发性头部和颈部癌症的III期临床试验，结直肠、卵巢、胰 腺和口腔肿瘤的II期临床试验，以及消化疾病、食道和肝脏肿瘤的I期临床试验(C0HEN，等 ONYX-015. Onyx Pharmaceuticals. Current opinion in investigational drugs. 2001, 2 卷，12 号，1770-5 页.)。天然的溶瘤病毒是具有复制能力的病毒，其具有选择性感染并杀死肿瘤细胞的先 天能力。尽管50年前被用于使用活病毒治疗癌症的最初尝试，但对天然溶瘤病毒作为癌 症疗法的关注已经滞后于支持改造的腺病毒和疱疹病毒作为癌症疗法。然而，最近已经对 这些天然存在的物质的高效能和选择性重新关注了(ROBERTS，等Naturally oncolytic viruses. Currentopinion in molecular therapeutics. 2006，8 卷，4 号，314—21 页·)。在天然溶瘤病毒中，痘苗病毒(痘病毒科)具有很多用于溶瘤病毒疗法的理想病 毒主链所必需的关键属性。这些包括生命周期短、和快速的细胞间播散、裂解能力强、巨 大的克隆能力和明确的分子生物学。此外，尽管它们能够在人类细胞中复制，但并不考虑为天然的健康问题，且它们特别好地得到表征，在消灭天花的战争中已经被递送给数百万 人。使用疫苗株或基因修饰的牛痘株的早期临床结果已经证明了抗癌效果(THORNE，等 Vaccinia virus and oncolytic virotherapy of cancer. Current opinion inmolecular therapeutics. 2005，7 卷，4 号，359—65 页·)。相比之下，痘病毒粘液瘤病毒是一种新型的溶瘤候选者，其没有直接用于人类的 历史，因为它对兔类(兔子)有特殊的和绝对的宿主种类向性。最近已证明粘液瘤病毒也 能够选择性的感染并杀死人类肿瘤细胞，该特有的向性联系在大多数人类癌症中所见的失 调的细胞内信号途径。这篇综述概述了关于粘液瘤病毒对人类癌细胞向性的现有知识，以 及展示其在癌症的动物模型中感染和清除肿瘤能力的临床前期数据(STANFORD，等Myxoma virus and oncolytic virotherapy :a new biologic weapon in thewar against cancer. Expert opinion on biological therapy. 2007,7 卷，9 号，1415-25 页·)。技术问题注射达到抗肿瘤效果所需的高剂量的痘病毒引发了毒性的问题。不利的 事件大 多不严重，通常与痘苗病毒有关的不良反应是自限性的，包括发烧、头痛、疲劳、肌痛、寒战、 局部皮肤反应、非特异性疹、多形性红斑、淋巴结病、和种痘位置疼痛。其他反应可能需要 另外的治疗方法(例如，首要的治疗VIG，第二线治疗西多福韦)。不良反应可能需要进一 步的评估或治疗，包括非故意接种、全身性牛痘(GV)、牛痘性湿疹(EV)、进行性牛痘(PV)、 种痘后的中枢神经系统疾病、和胎儿牛痘(C0N0，等Smallpox vaccination and adverse reactions. Guidance for clinicians. MMWR. Recommendations and reports-Morbidity and mortality weeklyreport. Recommendations and reports/Centers for Disease Control. 2003，52 卷，RR-4 号，1-28 页.)。因此，需要更安全的、具有与对于其天然相应物一样好的溶瘤活性的痘病毒。
技术介绍
1994 年 11 月 15 日的美国 5364773 (VIR0GENETICS 公司(TR0Y，纽约))描述了 改造的重组痘病毒，更特别是有灭活的非必要的病毒编码遗传功能的痘苗病毒，使重组痘 病毒具有减弱的毒力和增强的安全性。特别地，通过缺失编码毒力因子的开放阅读框，或 通过编码毒力因子的开放阅读框的插入失活，灭活遗传功能。更特别的是，这项专利描述 了痘苗病毒，其中J2R、B13R+B14R、A26L、A56R、C7L-K1L和I4L的开放阅读框已被灭活。 这种病毒(NYVAC)可以被改造为用于外源核酸的载体，并用作疫苗诱导本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含缺损Ｉ４Ｌ和／或Ｆ４Ｌ基因的痘病毒，条件是所述痘病毒非ＮＹＶＡＣ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP 2007-11-19 07301557.0包含缺损I4L和/或F4L基因的痘病毒，条件是所述痘病毒非NYVAC。2.权利要求1的痘病毒，其中所述痘病毒还包含缺损J2R基因。3.权利要求1或2所述的痘病毒，其中所述痘病毒还包含缺损F2L基因。4.根据权利要求1至3任一项所述的痘病毒，其中所述痘病毒属于脊椎动物痘病毒亚科。5.根据权利要求4所述的痘病毒，其中所述痘病毒属于痘苗病毒种。6.根据权利要求5所述的痘病毒，其中所述痘病毒是痘苗病毒Copenhagen株。7.根据权利要求1至6中任一所述的痘病毒，其中所述痘病毒还包含目的核酸。8.根据权利要求7所述的痘病毒，其中所述目的核酸包含编码治疗性分子的至少一种 目的序列。9.根据权利要求8所述的痘病毒，其中所述目的核酸包含自杀基因。10.根据权利要求9所述的痘病毒，其中所述自杀基因编码的蛋白质至少具有胞嘧啶 脱氨酶活性。11.根据权利要求10所述的痘病毒，其中所述自杀基因是FCY1、FCA1或CodA或其类 似物。12.根据权利要求10所述的痘病毒，其中所述至少具有胞嘧啶脱氨酶活性的蛋白质是 在序列编号SEQ ID NO 2中描述的rcUl-8多肽及其类似物。13.根据权利要求9所述的痘病毒，其中所述自杀基因编码的蛋白质具有至少一种胞 嘧啶脱氨酶和一种尿嘧啶磷酸核糖转移酶活性。14.根据权利要求13所述的痘病毒，其中所述自杀基因编码的多肽包含基本上如序列 编号 SEQ ID NO :3(coda:聊)、SEQID NO :1 (FCU1)中所描述的氨基酸序列或 FCY1: :FUR1 的氨基酸序列。15.根据权利要求1至14中任一所述的痘病毒，其中所述痘病毒还包含核酸序列，所述 核酸序列包含编码透性酶的基因。16.根据权利要求15所述的痘病毒，其中透性酶是酿酒酵母的嘌呤或胞嘧啶透性酶。17.根据权利要求16所述的痘病毒，其中透性酶选自于F...

【专利技术属性】
技术研发人员：P厄博斯，J弗洛派，
申请(专利权)人：特朗斯吉有限公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]