【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于动物饲料的酶团粒专利
本专利技术涉及酶团粒(enzyme granules),尤其是用于动物詞料的酶团粒。本专利技术还涉及所述团粒的制造。专利技术背景在动物饲料的相关
中， 一 个公知的事实是饲料的制粒 (pelleting)是必需的，因为将饲料制粒能增加尤其是伺料的淀粉部分的可消 化性。此外，已知将动物饲料制粒能减少粉尘问题。在制备飼料丸粒(pellets)的过程中，人们认为有必要对碎饲料(mash feed) 进行蒸汽处理以杀灭可能存在的致病^1生物并部分地糊化淀粉以改善丸粒 的物理性质，由此70-12(TC左右的蒸汽处理是适当的。饲料丸粒中存在的 活性化合物(如酶)在高的温度和湿度下不是非常稳定，因此，必须使用大大 过量的酶，或者将不含酶的饲料组分制粒并加以蒸汽处理，然后将含酶的 浆液或溶液包覆到经蒸汽处理的团粒上。然而，这种包覆过程繁瑣费事 (cumbersome),而且往往不适用于祠料粉碎机(feed mill)设备。WO 92/12645中记载了 一项获得改进的饲料用酶团粒的尝试。WO 92/12645描述了 T团粒(T-granules)，其包覆有脂肪(fat)或蜡(wax)。将所述T 团粒与饲料组分混合，蒸汽处理，随后制粒。通过这项专利技术，有可能对包 含酶的颗粒进行热处理，而避免在热处理后进行费事的酶包覆。蜡包覆的T 颗粒的应用是本领域的一项显著进步，因为有可能在蒸汽制粒(steam pelleting)过程中维持可接受的酶活性。WO 2006034710描述了另一项改善 酶团粒的制粒稳定性的尝试，其中发现用盐包层(salt...
【技术保护点】
一种适用于饲料的团粒，包含酶和铜离子供体，其中所述团粒的粒度为５０－２０００μｍ。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】DK 2006-8-7 PA200601037书中使用的单数一个、一种和该，，包含复数的指称，除非上下文明显地另有所指。例如，术语团粒可能包括多个团粒。团粒当述及本发明的团粒时，它可以是单个团粒或数个团粒。特别良好地适于蒸汽制粒，并且作为蒸汽处理的制粒饲料组合物的一部分的本发明的团粒，包括含酶区域(enzyme comprising region),其中存在 铜离子供体以使酶稳定化。在本发明的具体实施方案中，所述酶和铜离子 供体存在于均匀的基质中。包含酶和铜离子供体的所述基质可以包含其它辅助组分。发现本发明的团粒的合适粒度为0-2000 50-2000 |am，如50-800 pm, 或75-700 pm，更具体为100-1000 (im。本发明的团粒在一个具体的实施方案 中可具有700 iam以下的粒度。在本发明的另一个具体的实施方案中，成品 团粒的粒度是100-800)im。在本发明的更具体的实施方案中，成品团粒的粒 度是300-600 pm。在本发明的最具体的实施方案中，成品团粒的粒度是 450-550 pm。在本发明的另 一个具体的实施方案中，成品团粒的粒度在400 pm以下。在本发明的另一个最具体的实施方案中，本发明的团粒的粒度在 250jam以上，350lim以下。在本发明的具体实施方案中，本发明的团粒的粒度为210-3卯iam。含酵基质(enzyme comprising matrix)所述团粒的含酶基质或区域可以是团粒的核心，围绕核心的层，或者， 如果整个团粒的结构是均匀的话，可以是团粒本身。酶层和核心之间可以 存在有层，或者酶层可以紧邻着核心。核心可以是惰性的颗粒(particle)。含酶区域可以是包含酶和铜离子供体的均匀掺混物(blend)，或者是其 上施加有含酶及铜离子供体的基质层的惰性颗粒。由包含酶和铜离子供体均匀掺混物构成，或者由其上施加有含酶及铜 离子供体的基质层的惰性颗粒构成的核心颗粒，在一个实施方案中具有 20-800 iim的粒度。在本发明的一个更具体的实施方案中，核心粒度为50-500 jam。在本发明的一个进而更具体的实施方案中，核心粒度为100-300 pm。 在本发明的一个最具体的实施方案中，核心粒度为150-250 pm。在本发明的 另一个具体的实施方案中，核心粒度为400-500 pm。所述含酶核心颗粒在一个具体实施方案中具有20-800 iam的粒度。在本 发明的更具体的实施方案中，核心粒度为50-500 )Lim。在本发明的一个进而 更具体的实施方案中，核心粒度为100-300 pm。在本发明的一个最具体的实 施方案中核心粒度为150-250 fim。在本发明的另一个具体的实施方案中，核心粒度为400-500 |im。惰性颗粒(inert particles):惰性颗粒，诸如安慰剂颗粒(placebo particles)、载体颗粒(carrier particles)、无;舌'l生牙亥(inactive nuclei)、无;舌'I生茅贞冲立(inactive particles)、丸才亥心 用糖丸颗粒(non-pareil particles)、非活性颗粒或种子(non active particles or seeds),是不含酶或者仅含少量酶的颗粒，在其上可以用含有所述酶的包覆 混合物形成层。它们可以与有机或无机材料如无机盐、糖、糖醇、小有机 分子如有机酸或盐、淀粉、粉(flour)、经处理的粉、纤维素、多糖、矿物质 如粘土或硅酸盐、或上述两种或更多种物质的组合一起配制。在本发明的具体实施方案中，要包覆的颗粒是无活性颗粒。在本发明 的更具体的实施方案中，核心颗粒的材料选自下组无机盐、粉、糖醇、 小有机分子、淀粉、纤维素和矿物质。惰性颗粒可以用多种造粒(granulation)工艺来制备，其包括结晶、沉 淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣(fluid bed coating)、流化床团聚(fluid bed agglomeration) 、 S走4争雾4匕(rotary atomization)、才斧出(extrusion)、 喷射造 粒(prilling)、 滚圆(spheronization)、粉碎方法(size reduction methods)、 转鼓 造粒(drum granulation)、 和/或高剪切造粒(high shear granulation)。酶本发明的语境中的酶可以是任何酶或者不同酶的组合，其适于给予动 物，意思是食用该酶将以某种方式对动物带来营养上的好处。因此，当提 及酶时， 一般应理解其包括一种酶或多种酶的组合。在具体的实施方案中，其不被解释为包括具有医学/药学意义上的治疗功能的酶。伺料酶应当为詞料/食品级，从而意味着它们不得对动物有害，并且飼料 /食品级意味着它应该符合食品级酶的推荐纯度规格。在具体的实施方案中，这意味着所述酶符合联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合专家委 员会(Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives, JECFA)和美国食品 化学法典(Food Chemical Codex, FCC)给出的食品级酶的推荐纯度规格。在一个具体的实施方案中，所述酶应包含少于每克30个大肠杆菌类细菌(coliform bacteria),并且包含少于50000/g的活菌lt(viable count)。本发明的团粒以干重为基础包含约0.0005至约20%的团粒酶组分。例 如，在本发明的实施方案中酶的重量百分比在团粒中占至少0.0005到约715%、至少0.001到约15%、至少0.01到约10%、至少0.1到约10%、至少 1.0到约10%、至少1.0到约8%、至少1.0到约5%、以及至少2.0到至少 5%。每吨饲料25到400克稳定酶团粒的典型剂量将递送约0.0001至约80 g 的活性酶蛋白每吨饲料，酶团粒的剂量可高达每吨5000克每吨饲料。应该理解，酶变体(例如，通过重组技术制备的)包含在术语酶的意 义中。这样的酶变体的例子在例如EP 251,446 (Genencor)、 WO 91/00345 (Novo Nordisk)、 EP 525,610 (Solvay)和WO 94/02618 (Gist-Brocades NV)中公开。可以根据NC-IUBMB, 1992的酶命名法手册(handbook Enzyme Nomenclature)对酶加以分类，另参见互联网上的ENZYME站点 http:〃www.expasy.ch/enzyme/。 ENZYME是一个酶命名相关信息库。它主要Press, Inc., 1992，它还对每一类已被表征并已获得EC (酶学委员会)编号的 酶进行了描述(Bairoch A. The ENZYME database, 2000, Nucleic Acids Res 28:304-305)。这种IUB-MB酶命名法基于它们的底物特异性，有时基于它 们的分子机制；这样的分类并不反映这些酶的结构特征。几年前，已提出另一种基于氨基酸序列相似性将某些糖苷水解酶，例 如内切葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶和a-半 乳糖苷酶分为家族的分类法。它们目前分为90个不同的家族参见 CAZy(ModO)因特网站点(Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) Carbohydrate-Active Enzymes月艮务器,在URL:http: / /afmb. cnr s -mr s. fr/ cazy/CAZY/index.html (相应的文章Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) Carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach.在Recent Advances in Carbohydrate Bioengineering中,H.J. Gilbert: G. Davies， B. Henrissat和B. Svensson编，The Royal Society of Chemistry, Cambridge, pp. 3-12; Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) The modular structure of cellulases and other carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach. 在Genetics, Biochemistry and Ecology of Cellulose Degradation中.，K. Ohmiya, K. Hayashi, K. Sakka, Y. Kobayashi, S. Karita和T. Kimura编,Uni Publishers Co., Tokyo, pp. 15-23)。可掺入本发明的团粒中的酶类包括氧化还原酶(EC l.-.-.-)、转移酶(EC 2,,.-)、水解酶(EC 3.-,.-)、裂合酶(EC4.-.-.-)、异构酶(EC5.-.-，-)和连接酶(EC86.-,.-)。本发明上下文中优选的氧化还原酶是过氧化物酶(EC 1.11.1)、漆酶(EC 1.10.3.2)和葡糖氧化酶(EC 1.1.3.4)]。商业上可得到的氧化还原酶(EC 的实例是Gluzyme (该酶可从Novozyme A/S获得)。更多的氧化还原酶可 从其它供应商获得。优选的转移酶是以下任何亚类的转移酶a转移一碳基团的转移酶(EC2.1);b转移醛或酮残基的转移酶(EC2.2);酰基转移酶(EC2.3); c糖基转移酶(EC2.4);d转移脂族烃基(alkyl)或芳基，不包括甲基的转移酶(EC2.5);和 e转移含氮基团的转移酶(EC2.6)。本发明上下文中最优选的转移酶类型是转谷氨酰胺酶(蛋白质-谷氨酰 胺Y-谷氨酰基转移酶；EC 2.3.2.13)。合适的谷氨酰胺转移酶的其它例子在WO96/06931 (Novo Nordisk A/S)中描述。本发明上下文中优选的水解酶是羧酸酯水解酶(EC 3丄1.-)如脂肪酶 (EC 3.1.1.3);肌醇六磷酸酶(phytase) (EC 3丄3.-)，例如3-肌醇六磷酸酶(EC 3.1.3.8)和6-肌醇六磷酸酶(EC 3.1.3.26);糖苷酶(EC3.2，它落入本文糖酶 表示的组中)，如a-淀粉酶(EC 3.2.1.1);肽酶(EC3.4,也称作蛋白酶)；以及 其它羰基水解酶。商业上可得到的肌醇六磷酸酶的例子包括Bio-Feed Phytase (Novozymes)、 Ronozyme P (DSM Nutritional Products) 、 NatuphosTM (BASF)、 FinaserM(ABEnzymes)以及PhyzymeTM产品系列(Danisco)。其它优 选的肌醇六磷酸酶包括WO 98/28408、 WO 00/43503和WO 03/066847中描 述的那些。在本上下文中，术语糖酶不仅用来表示能够打断糖链(例如淀粉或纤 维素)，特别是五元或六元环结构的糖链的酶(即糖苷酶，EC 3.2)，还表示能 够使糖异构化的酶，例如将六元环结构如D-葡萄糖异构化为五元环结构如 D-果糖。相关的糖酶包括下列物质(圆括号内为EC号)a-淀粉酶(EC 3.2丄1)、卩-淀粉酶(EC 3.2丄2)、葡聚糖1,4-a-糖苷酶(EC 3.2丄3)、内-l,4-卩-葡聚糖酶(纤维素酶，EC3.2丄4)、内-1,3(4)-卩-葡聚糖酶(￡0 3.2丄6)、内-1,4-[(3]-木聚糖酶(EC3.2丄8)、葡聚糖酶(EC 3.2丄11)、几丁质酶9(EC 3.2.1.14)、多聚半乳糖醛酸酶(EC 3.2.1.15)、溶菌酶(EC 3.2.1,17)、 (3-糖 苷酶(EC3.2丄21)、 a-半乳糖苷酶(EC3.2丄22)、 (3-半乳糖普酶(EC 3.2.1.23)、 淀粉-l，6-糖苦酶(EC3.2丄33)、木聚糖1,4-卩-木糖苷酶(EC3.2丄37)、葡聚糖 内-l,3-卩-D-糖苷酶(EC 3.2.1.39)、 a-糊精内-1，6-01-糖苷酶(￡03.2.1.41)、蔗糖a-糖苷酶(EC 3.2.1.48)、葡聚糖内-l,3-a-糖苦酶(EC 3.2.1.59)、葡聚糖1,4-卩-糖 脊酶(EC 3.2丄74)、葡聚糖内-l，6-卩-糖苷酶(EC 3.2.1.75)、半乳聚糖酶(EC 3.2丄89)、阿拉伯聚糖内-l,5-a-L-阿拉伯糖苷酶(EC 3,2丄99)、乳糖酶(EC 3.2.1.108)、壳聚糖酶(chitosanases) (EC 3.2.1.132)和木糖异构酶(EC 5.3.1.5)。在本上下文中肌醇六磷酸酶是催化肌醇六磷酸盐(myo-inositol hexakisphosphate (肌醇六磷酸盐))的水解成(l)肌醇(myo-inositol)和/或(2)它 的单、二、三、四和/或五磷酸盐以及(3)无机磷酸。已知有三种不同类型的肌醇六磷酸酶所谓的3-肌醇六磷酸酶(别名1-肌醇六磷酸酶；肌醇六磷酸盐3-磷酸水解酶，EC 3.1.3.8),所谓的4-肌醇六 磷酸酶(别名6-肌醇六磷酸酶，基于1L编号系统而不是1D编号的名称，EC 3.1.3.26),以及所谓的5-肌醇六磷酸酶(EC 3.1.3.72)。就本发明而言，将全 部三种包括在肌醇六磷酸酶的定义中。就本发明而言，肌醇六磷酸酶的活性可以且优选以FYT为单位来确定， 一个FYT是在下列条件下每分钟释放1微摩尔无机正磷酸的酶量pH5.5; 温度37。C;底物浓度为0.0050 mo1/1的肌醇六磷酸钠(C6H6024P6Na,2)。合 适的肌醇六磷酸酶测定法在WO 00/20569的实施例1中描述。FTU用于测 定饲料和预混合物中的肌醇六磷酸酶活性。肌醇六磷酸酶的优选实例是微生物肌醇六磷酸酶，如真菌或细菌肌醇 六磷酸酶，例如源自下列的肌醇六磷酸酶i.子嚢菌纲(Ascomycetes)，如EP 684313或US 6139卯2公开的那些子 嚢菌；泡盛曲霉(Aspergillus awamori) PHYA (SWISSPROT P34753, Gene 133:55-62 (1993));黑曲霉(Aspergillus niger)(无花果曲霉(Aspergillus ficuum)) PHYA (SWISSPROT P34752, Gene 127:87-94 (1993)， EP 420358);泡盛曲霉 PHYB (SWISSPROT P34755, Gene 133:55-62 (1993));黑曲霉PHYB (SWISSPROT P34754, Biochem. Biophys. Res. Commun. 195:53-57(1993));构 巢翘孢霉(Emericella nidulans) PHYB (SWISSPROT 000093， Biochim. Biophys. Acta 1353:217-223 (1997》；ii. 嗜热霉属(Thermomyces)或腐质霉属(Humicola),如公开于WO 97/35017的细毛嗜热霉(Thermomyces lanuginosus)肌醇六磷酸酶；iii. 担子菌纲(Basidiomycetes)，例如隔孑包伏革菌属(Peniophora) (WO 98/28408和WO 98/28409);iv. 其它真菌肌醇六磷酸酶，如公开于JP 11000164 (青霉属(Penicillium) 肌醇六磷酸酶)或W098/13480 (亚克红曲霉(Monascus anka)肌醇六磷酸酶) 中的那些；v. 芽孢杆菌属(Bacillus),例如枯草芽孢杆菌(Bacillus sub仙s) PHYC (SWISSPROTO31097, Appl. Environ. Microbiol. 64:2079-2085 (1998));芽孢杆菌 属菌种(Bacillus sp). PHYT (SWISSPROT 066037， FEMS Microbiol. Lett. 162:185-191 (1998);枯草芽孢杆菌PHYT—(SWISSPROT P42094, J. Bacteriol. 177:6263-6275 (1995)); AU 724094或WO 97/33976中公开的肌醇六磷酸酶；vi. 大肠杆菌(Escherichia coli) (US 6110719);vii. 柠檬酸杆菌属(Citrobacter)，如弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter. freundii) (公开于WO 2006/038062、 WO 2006/038128，或具有UniProt Q676V7的序ADU50737)和WO 2006/037328)、和无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)或Citrobacter gillenii (公开于WO 2006/037327);viii. 其它细菌肌醇六磷酸酶，如来自布丘氏菌属(Buttiauxella)的肌醇六 磷酸酶(公开于WO 2006/043178);ix. 酵母月几醇六磷酸酶，例如来自西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)(例如US 5830732中公开的)；以及x. 具有与(i)-(ix)的任一肌醇六磷酸酶的成熟氨基酸序列有至少75%同 一性的氨基酸序列的肌醇六磷酸酶；xi. 包含一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入的(i)-(ix)的肌醇六磷酸 酶的变体；xii. (i)-(ix)的等位变体；xiii. (i)-(ix)的保留肌醇六磷酸酶活性的片段；或xiv. 基于(i)-(ix)设计的并具有肌醇六磷酸酶活性的合成多肽。 优选的肌醇六磷酸酶变体的例子公开于例如WO 99/49022、 WO99/48380、 WO 00/43503、 EP 0897010、 EP 0897985、 WO 2003/66847，以及11上文提及的WO 2006/038063、 WO 2006/038128和WO 2006/43178中)。商业上可得到的蛋白酶(肽酶)的例子包括KannaseTM、 EverlaseTM、 EsperaseTM、 AlcalaseTM、 NeutraseTM、 DurazymTM、 SavinaseTM、 OvozymeTM、 PyraseTM、 Pancreatic Trypsin NOVO (PTN)、 Bio-Feed Pro和Clear-Lens Pro (均可获自Novozymes A/S, Bagsvaerd, Denmark)。其它优选的蛋白酶包才舌 WO 01/58275和WO 01/58276中描述的那些。其它商业上可得到的蛋白酶包括RonozymeTM Pro 、 Maxatase 、 MaxacalTM、 MaxapemTM、 OpticleanTM、 PropeaseTM、 Purafect丁M和Purafect OxTM (可由Genencor International Inc.、 Gist-Brocades、 BASF或DSM Nutritional Products得到)。商业上可得到的脂肪酶的例子包括LipexTM、 LipoprimeTM、 LipopanTM、 LipolaseTM、 Lipolase Ultra 、 Lipozyme 、 Palatase 、 ResinaseTM 、 NovozymTM 435和Lecitase (均可由Novozymes A/S得到)。其它商业上可得到的脂肪酶包括LumafastTM (来自Genencor International Inc.的f1多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)月旨肪酶)； Lipomax (来自Gist- Brocades/Genencor Int. Inc.的类产碱假单胞菌(Ps. Pseudoalcaiigenes)月旨肪酶)；和来自Solvay enzymes的芽孢杆菌属菌种月旨肪 酶。从其它供应商可获得更多的脂肪酶。商业上可得到的糖酶的例子包括Alpha-GalTM、 Bio-FeedTM Alpha、 Bio-Feed Beta、 Bio-FeedTM Plus、 Bio-Feed Wheat 、 Bio-FeedTM Z、 NovozymeTM 188， CarezymeTM、 CelluclastTM 、 CellusoftTM、 CelluzymeTM、 Ceremyl 、 CitrozymTM 、 Denimax 、 DezymeTM 、 Dextrozyme 、 DuramylTM 、 EnergexTM、 FinizymTM、 FungamylTM、 GamanaseTM、 GlucanexTM、 LactozymTM、 LiquezymeTM 、 MaltogenaseTM 、 NatalaseTM 、 PentopanTM 、 PectinexTM 、 Promozyme 、Pulpzyme 、NovamylTM 、Termamyl 、 AMGTM (Amyloglucosidase Novo)、 Maltogenase 、 SweetzymeTM,。 AquazymTM(均可 由Novozymes A/S得到)。更多的糖酶可获得自其它供应商，如Roxazyme 和RonozymeTM产品系列(DSM Nutritional Products), AvizymeTM 、 PorzymeTM 和GrindazymeTM产品系列(Danisco, Finnfeeds)，以及Natugrain (BASF)、 PurastarTM,p PurastarTM OxAm (Genencor)。其它商业上可得到的酶类包括MannawayTM、 PectawayTM、 StainzymeTM12和RenozymeTM。在本发明的具体实施方案中，所述饲料酶选自下组内切葡聚糖酶、内 -1,3(4)-(3-葡聚糖酶、蛋白酶、肌醇六磷酸酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡 聚糖酶和ot-半乳糖苷酶，参考WO 2003/062409，该文献在此通过引用并入。特别合适的饲料酶类包括淀粉酶，磷酸酶，如肌醇六磷酸酶，和/或 酸性磷酸酶；糖酶，如淀粉分解酶和/或植物细胞壁降解酶，包括纤维素酶， 如P-葡聚糖酶和/或半纤维素酶，如木聚糖酶或半乳聚糖酶；蛋白酶或肽酶， 例如溶菌酶；半乳糖苷酶、果胶酶、酯酶，脂肪酶，特别是磷脂酶如哺乳 动物胰磷脂酶A2和葡萄糖氧化酶。特别地，饲料酶具有中性和/或酸性最 适pH。在本发明的具体实施方案中，所述饲料酶选自下组淀粉酶、磷酸 酶、肌醇六磷酸酶、纤维素酶、(3-葡聚糖酶、半纤维素酶、蛋白酶、肽酶、 半乳糖普酶、果胶酶、酯酶、脂肪酶和葡萄糖氧化酶。在本发明的具体实施方案中，所述酶选自下组淀粉酶、蛋白酶、卩-葡聚糖酶、肌醇六磷酸酶、木聚糖酶、磷脂酶和葡糖氧化酶。上面的酶列表仅是举例，没有排他的意思。任何酶都可以用于本发明 的持久性团粒中，包括细菌、真菌、酵母、植物、昆虫和动物来源的野生 型、重组体和变体酶，和酸性、中性或44性的酶。铜离子供体铜离子供体可以是任何能够提供铜离子的化合物。铜离子供体优选是 水溶性的。铜离子供体可以是有机或者是无机的，并可以选自但不限于由 下述铜盐氯化物、溴化物、碘化物、硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、 硫代硫酸盐、磷酸盐、磷酸二氢盐、磷酸氢盐、次磷酸盐、焦磷酸二氢盐、 四硼酸盐、硼酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、硅酸盐(metasilicate)、柠檬酸盐、 苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、曱硫氨酸盐(methionate)、琥珀酸盐、乳 酸盐、曱酸盐、乙酸盐、丁酸盐、丙酸盐、苯曱酸盐、酒石酸盐、抗坏血 酸盐、葡糖酸盐，以及铜螯合物如氨基酸螯合物所构成的组。在本发明的具体实施方案中，所述铜离子供体选自下组Cu-乙酸盐xl H20、 CuC03、 Cu(OH)2 x 1 H20、 CuCl2x2H20、 Cu(C5H10NO2S)2 (曱硫氨酸 铜(cupricmethionate))、 CuO、 CuS04x5H20、 CuS04xlH20、氨基酸的铜螯 合物、Cu(C6H13N202)2S04、 Cu-硫酸盐-赖氨酸和铜曱硫氨酸螯合物。13在本发明的具体实施方案中，所述铜离子供体选自下组氯化铜、溴 化铜、硪化铜、辟u酸铜、亚好b酸铜、酸式亚-克酸铜、好b代;克酸铜、磷酸铜、 磷酸二氢铜、磷酸氬铜、次磷酸铜、焦磷酸二氢铜、四硼酸铜、硼酸铜、 碳酸铜、碳酸氩铜、硅酸铜、柠檬酸铜、苹果酸铜、马来酸铜、丙二酸铜、 曱硫氨酸铜、琥珀酸铜、乳酸铜、曱酸铜、乙酸铜、丁酸铜、丙酸铜、苯 曱酸铜、酒石酸铜、抗坏血酸铜、葡糖酸铜、铜螯合物如氨基酸螯合物、Cu-乙酸盐x 1 H20、 CuC03、 Cu(OH)2 x 1 H20、 CuCl2 x 2 H20 、 Cu(C5H10NO2S)2 (曱硫氨酸铜)、CuO、 CuS04x5H20、 CuS04 x 1 H20、氨 基酸的铜螯合物、Cu(C6H13N202)2S04、 Cu-硫酸盐-赖氨酸、铜曱硫氨酸螯 合物和它们的组合。选择所述化合物的条件是如果提到的任何化合物不 利于健康或者在其它方面对动物不良，则应该淘汰它们。在本发明的更具体的实施方案中，所述铜盐是五水硫酸铜。铜离子供体可以以溶液、分散体、乳液的形式或以干燥状态添加。在 一个实施方案中，铜离子供体作为粉末添加。在本发明的具体实施方案中， 铜离子供体以溶液的形式添加。在具体实施方案中，所述溶液是水溶液。 在一个实施方案中，所述铜离子供体作为液体添加。我们令人惊讶地发现，铜离子供体可以相对于酶以一定比例添加。如 果铜离子的量过低，酶的制粒稳定性不会显著改善。如果铜离子的量过高， 我们发现酶本身的稳定性降低，这是最不希望的。因此，相比于存在的酶 量，铜离子的量不能太高。下文描述的量以每个酶蛋白分子的铜离子计。铜离子的量是以所添加 的含铜化合物的总量为基础计算的。因此，铜量是假设团粒中存在的所有 铜都处于离子形式而算得的理论量。这意味着实际上团粒中的铜不一定是 离子形式。在本发明的具体实施方案中，铜离子量是1-600个012+/酶蛋白分子。 在更具体的实施方案中，Cu的量为1-400个Cu/酶蛋白分子。在本发明 的还更具体的实施方案中，012+的量为1-200个012+/酶蛋白分子。在本发明的最具体的实施方案中，以1-100个Cu^/酶蛋白分子的Cu2+量添加^i酸铜。在本发明的具体实施方案中，铜离子量为1-600个Cu/肌醇六磷酸酶 蛋白分子。在更具体的实施方案中，Cu的量为1-400个012+〃几醇六磷酸酶蛋白分子。在本发明的还更具体的实施方案中，012+的量为1-200个012+/ 肌醇六磷酸酶蛋白分子。在本发明的最具体的实施方案中，以1-100个012+/肌醇六磷酸酶蛋白 分子的Cu量添加硫酸铜。在本发明的具体实施方案中，所述铜离子供体选自下组氯化铜、溴 化铜、碘化铜、硫酸铜、亚硫酸铜、酸式亚硫酸铜、硫代硫酸铜、磷酸铜、 磷酸二氢铜、磷酸氬铜、次磷酸铜、焦磷酸二氢铜、四硼酸铜、硼酸铜、 碳酸铜、碳酸氢铜、硅酸铜、柠檬酸铜、苹果酸铜、马来酸铜、丙二酸铜、 曱硫氨酸铜、琥珀酸铜、乳酸铜、曱酸铜、乙酸铜、丁酸铜、丙酸铜、苯 甲酸铜、酒石酸铜、抗坏血酸铜、葡糖酸铜、铜螯合物如氨基酸螯合物、 Cu-乙酸盐x 1 H20 、 CuC03 、 Cu(OH)2 x 1 H20 、 CuCl2 x 2 H20 、 Cu(C5H10NO2S)2 (曱硫氨酸铜)、CuO、 CuS04 x 5 H20、 CuS04 x 1 H20、氨 基酸的铜螯合物、Cu(C6H13N202)2S04、 Cu-硫酸盐-赖氨酸、铜曱硫氨酸螯 合物和它们的组合，其中添加的铜离子的量为1-400个Cu/酶蛋白分子， 如1-200个Ci^/酶蛋白分子，甚至1-100个012+/酶蛋白分子。附加的造粒剂所述颗粒可包含附加的材料，如粘合剂、填充剂、纤维材料、稳定剂、 增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体(light spheres)、增塑剂、盐、润滑剂 和香料。本发明的粘合剂可以是合成聚合物、包括脂肪的蜡、发酵液、糖、盐 或多肽。合成聚合物合成聚合物意指通过合成手段聚合形成骨架的聚合物。醇(PVA)、聚乙酸乙烯酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚 磺酸酯、聚羧酸酯，以及它们的共聚物，尤其是水溶性聚合物或共聚物。在本发明的具体实施方案中，合成聚合物是乙烯基聚合物。蜡在本发明上下文中蜡应当理解为具有25-150°C、特别是30-100。C、 更特别是35-85。C、最特别是40-75。C的熔点的聚合材料。在室温25。C，蜡 优选以固态存在。优选的是，所述下限在蜡开始熔解的温度与团粒或包含团粒的组合物的通常贮藏温度20-30°C之间设定合理的距离。对于某些团粒，所述蜡的优选特征在于其应当是水溶性或水可分散的， 所述蜡应当分解和/或溶解，使掺入颗粒中的活性成分的快速释放和溶解到水溶液中。水溶性蜡的例子是聚乙二醇(PEG，s)。在水溶性蜡中，在水溶液 中可分散的为甘油三酯和油类。对于某些团粒，优选所述蜡是不溶性的。在本发明的具体实施方案中，所述蜡组合物是亲水组合物。在一个具 体的实施方案中，包含在蜡组合物中的成分的至少25%w/w，优选至少50% w/w、优选至少75。/。w/w、优选至少85。/。w/w、优选至少95。/ow/w、优选至 少99% w/w是可溶于水的。在另一个实施方案中，所述蜡组合物是亲水的，且可分散于水溶液中。在一个具体的实施方案中，所述蜡组合物包含少于75% w/w，优选少 于50% w/w、优选少于25% w/w、优选少于15% w/w、优选少于5% w/w、 优选少于1% w/w的疏水成分。在一个具体的实施方案中，所述蜡组合物包含少于75% w/w，优选少 于50% w/w、优选少于25% w/w、优选少于15% w/w、优选少于5% w/w、 优选少于1% w/w的水不溶性成分。合适的蜡是具有一种或多种上述性质的有机化合物或有机化合物的盐。本发明的蜡组合物可包含任何化学合成的蜡。其也同样可包含分离自 天然来源的蜡或其衍生物。因此，本发明的蜡组合物可包含选自下列非限 制性的蜡的列表的蜡。-聚乙二醇，PEG。可从市场上获得具有不同分子量的不同PEG蜡， 其中具有低分子量的PEG还具有低熔点。合适的PEG的例子是PEG 1500、 PEG 2000、 PEG 3000、 PEG 4000、 PEG 6000、 PEG 8000、 PEG 9000等，例 如来自BASF (Pluriol E系列)或来自Clariant或Ineos。还可以使用聚乙二醇 的书f生物。-聚丙烯(例如来自BASF的聚丙二醇PluriolP系列)或聚乙烯或它们的 混合物。还可以使用聚丙烯和聚乙烯的衍生物。-环氧乙烷、环氧丙烷的聚合物，或它们的共聚物是有用的，如用于 嵌段聚合物(block polymers)中，所述嵌段聚合物例如来自BASF的Pluronic PE 6800。乙氧基化脂肪醇的衍生物。-分离自天然来源的蜡，如巴西棕榈蜡(Camaubawax)(熔点为80-88°C)、16小烛树蜡(Candelilla wax)(熔点为68刁0。C)和蜂蜡。其它天然蜡或其衍生物是 来自动物或植物的蜡，例如海洋来源的。氢化的植物油或动物油脂。这样的蜡 的例子是氢化牛脂、氢化椋榈油、氢化棉籽和/或氢化大豆油，其中在本申请 中使用的术语氢化应理解为不饱和的碳水化合物链的饱和，例如在甘油三酯 中，其中碳=碳双键转化为碳-碳单键。氢化椋榈油是商业上可得到的，例如来 自Hobum Oele und Fette GmbH-脂肪酸醇，如来自Condea Chemie GMBH-单酸甘油酯和/或甘油二酯，如硬脂酸甘油酯，其中硬脂酸是十八酸 和十六酸的混合物，是有用的蜡。其例子是来自Danisco Ingredients, Denmark 的Dimodan PM。-脂肪酸，例如氢化的线性长链脂肪酸和脂肪酸的衍生物。-石蜡(Para伍nes),即固体烃。-微晶蜡。在进一步的实施方案中，在本发明中有用的蜡可见于C.M. McTaggart 等，Int. J. Pharm. 19， 139 (1984)或Flanders等，Drug Dev. Ind. Pharm. 13, 1001(1987)中，两者均通过引用并入本文。在本发明的具体实施方案中，本发明的蜡是两种或更多种不同的蜡的 混合物。在本发明的具体实施方案中，所述蜡选自由PEG、脂肪酸、脂肪酸醇 和甘油酯组成的组。在本发明另一个具体的实施方案中，所述蜡从合成蜡中选择。在本发 明的更具体的实施方案中，本发明的蜡是PEG。在本发明的最具体的实施 方案中，所述蜡选自下组牛脂、PEG和棕榈油。发酵液(fermentation broth)根据本发明的发酵液包含微生物细胞和/或其细胞碎片(生物质)。 在优选的实施方案中，所述发酵液包含至少10%、更优选至少50%、 还更优选至少75%，最优选至少90%或至少95%的来源于发酵的生物质。 在另一个优选的实施方案中，所述发酵液含有0-31% w/w的干物质、优选 0-20% w/w、更优选0-15% w/w,如10-15% w/w的干物质，0%的干物质#皮 排除在所述范围之外。所述生物质可占到干物质的多至90% w/w、优选多至75% w/w、更优选多至50% w/w,同时酶可占到干物质的多至50% w/w、 优选多至25% w/w、更优选多至10% w/w。多糖本发明的多糖可以是未修饰的天然存在的多糖或经修饰的天然存在的多糖。合适的多糖包括纤维素、果胶、糊精和淀粉。所述淀粉可以是可溶或 不溶于水的。在本发明的具体实施方案中，所述多糖是淀粉。在本发明的具体实施 方案中，所述多糖是不溶性淀粉。在本发明上下文中，来自多种植物来源的天然存在的淀粉是合适的(作为淀粉本身，或作为改性淀粉的起点)，有关的淀粉包括来自下述的淀粉 稻、玉米(corn)、小麦、马铃薯、燕麦、木薯(cassava)、西谷椰子(sago-palm)、 木薯(yuca)、大麦、甘薯(sweetpotato)、高粱、薯蓣(yams)、黑麦、粟/黍(milIet)、 荞麦(buckwheat)、 4f芋(arrowroot)、芋头(taro)、芋类(tannia)，并可例长口以4分 (flour)的形式存在。在本发明的上下文中，木薯淀粉是优选的淀粉之一；在此处要提及的 是木薯和木薯淀粉有多种同义词，包括木薯(tapioca)、树薯(manioc)、树薯 (mandioca)和木薯(manihot)。如在本发明上下文中所使用的，术语改性淀粉表示天然存在的淀粉， 其已经历某种至少部分的化学修饰、酶修饰和/或物理或物理化学修饰，并 且相对于亲本淀粉通常显示改变的特性。在本发明的具体实施方案中，所述团粒包含多糖。盐核心可包含附加的盐。所述盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚疏酸盐、 磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯化物或碳酸盐、或简单有机酸(小于10个碳原 子，例如6个或更少的碳原子)的盐，如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在 这些盐中，阳离子的例子是碱或碱土金属离子，尽管铵离子或第一过渡系 (transition series)的金属离子，如钠、钾、4美、4丐、4辛或铝。阴离子的例子 包括氯、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷 酸二氢根、磷酸氢根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、碳酸根、碳酸氢根、硅 酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、曱酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯曱酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或 葡糖酸根。特别是，可以使用硫酸、亚硫酸、磷酸、膦酸、硝酸、氯或碳 酸的碱或碱土金属盐，或简单无机酸的盐例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。具体的例子包括NaH2P04、 Na2HP04、 Na3P04、 (NH4)H2P04、 K2HP04、 KH2P04、 Na2S04、 K2S04、 KHS04、 ZnS04、 MgS04、 CuS04、 Mg(N03)2、 (NH4)2S04、硼酸钠、乙酸镁和柠檬酸钠。所述盐还可以是水合盐，即带有结晶的结合水的结晶盐水合物，如WO 99/32595中所描述的。水合盐的例子包括七水合硫酸镁(MgS04(7H20))、七 水合硫酸锌(ZnS04(7H20))、七水合磷酸氢二钠(Na2HP04(7H20))、六水合硝 酸镁(Mg(N03)2(6H20))、十水合硼酸钠、二水合柠檬酸钠和四水合乙酸镁。在本发明的具体实施方案中，所述粘合剂是多肽。所述多肽可选自明 胶、胶原、酪蛋白、壳聚糖(chitosan)、聚天冬氨酸和聚谷氨酸。在另一个 具体实施方案中，所述粘合剂是纤维素衍生物，如羟丙基纤维素、曱基纤 维素或CMC。合适的粘合剂是碳水化合物粘合剂如糊精，例如Glucidex 21D 或Avedex W80。填充剂(fillers)合适的填充剂是水溶性和/或不溶性无机盐，如磨细的碱金属硫酸盐、 碱金属碳酸盐和/或碱金属氯化物，粘土如高岭土(如SPESWHITE ,英语 称ChinaCky)、膨润土、滑石、沸石、白垩、碳酸钙和/或硅酸盐。代表性的填充剂是硫酸二钠和木质素磺酸钙(calcium-lignosulphonate)。 其它的填充剂是硅石、石膏、高岭土、滑石、硅酸铝镁和纤维素纤维。纤维材料(fibre materials)纯或不纯的纤维素以纤维状形式存在，如锯屑、纯纤维状纤维素、棉花 或其它类型的纯或不纯的纤维状纤维素。同样地，可以使用以纤维状纤维素 为基础的助滤剂。市场上有几种品牌的纤维状形式的纤维素，例如CEPOTM和ARBOCELLBC200TM。也可使用合成纤维，如EP304331 Bl中所述。 稳定剂稳定剂或保护剂如在造粒领域所通常使用的。稳定剂或保护剂可分为 几类碱性或中性材料、还原剂、抗氧化剂和/或第一过渡系金属离子的盐。 这些的每一种都可与其它相同或不同类别的保护剂 一起使用。碱性保护剂19的例子是碱金属硅酸盐、碳酸盐或碳酸氢盐。还原保护剂的例子是亚硫酸盐、硫代亚硫酸盐、硫代硫酸盐或MnS04，而抗氧化剂的例子是曱硫氨酸、 丁基化羟基曱苯(BHT)或丁基化羟基苯曱醚(butylated hydroxyanisol) (BHA)。 特别是，稳定剂可以是硫代硫酸盐，例如硫代硫酸钠或曱硫氨酸。有用的 稳定剂的其它例子是明胶、尿素、山梨糖醇、甘油、酪蛋白、聚乙烯吡咯 ...
【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克马库森，波尔E詹森，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]
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