嵌合水痘带状疱疹病毒病毒样颗粒制造技术

本发明专利技术公开了新的嵌合水痘带状疱疹病毒（ＶＺＶ）病毒样颗粒（ＶＬＰ），其包含嵌合ＶＺＶ糖蛋白。本发明专利技术还公开了嵌合ＶＺＶ－ＶＬＰ的疫苗配制剂和在受试者中诱导免疫应答的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合水痘带状疱疹病毒病毒样颗粒相关申请本申请要求2007年9月9日提交的美国申请60/970，592,2008年5月20日提交的美国申请61/071，835、和2007年7月19日提交的美国申请60/950，707的优先权，本文 出于所有目的通过提及而收录所有申请。对电子形式提交的文本文件的描述本文通过提及而完整收录与本文一起以电子形式提交的文本文件的内容计算机可阅读形式拷贝的序列列表(文件名N0VV 035 02W0SeqList_ST25. txt，2008年7月21日 记录的数据，文件大小37千字节)。
技术介绍
水痘带状疱疹病毒(VZV)(也称为人疱疹病毒3(HHV_3))是病毒疱疹病毒科(Herpesviridae)白勺 α(alphaherpesvirus subfamily)白勺。VZV i—禾中 有包膜病毒，具有约125，000个核苷酸的线性双链DNA基因组。它的基因组被二十面体核 壳体装入。位于核壳体和病毒包膜间间隔的间层是由病毒编码的蛋白质和酶构成的结构。 病毒包膜是从宿主细胞膜获得的，并且含有病毒编码的糖蛋白。人疱疹病毒中最小的VZV基因组编码至少70个可读框，其中8个编码推定的 糖蛋白(gE、gl、gB、gH、gK、gL、gC、和gM)，它们在病毒复制周期的不同步骤中发挥功能。 糖蛋白E(gE，也称为ORF 68)对于病毒复制是必要的(Mallory等(1997) J. Virol. 71 8279-8288 ；Mo等(2002) Virology 304 176-186)，并且是受感染细胞以及成熟病毒体中存 在的最丰富的糖蛋白(Grose, 2002, The predominant varicella-zoster virus gE and gl glycoproteincomplex,In Structure-function relationships of human pathogenic viruses, Holzenburg 禾口 Bogner (编)，Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York, NY)。糖蛋白I (gl，也称为ORF 67)在受感染的细胞中与gE形成复合物，这便于两种糖蛋 白质的胞吞，并将它们引导至反式高尔基体(trans-Golgi)，在那里获得最终的病毒包膜 (Olson 和 Grose (1998) J.Virol. 72 1542-1551)。糖蛋白 B(gB，也称为 ORF 31)(认为其在 病毒进入中发挥作用)结合中和性抗体，并且是第二普遍的糖蛋白(综述于Arvin(1996) Clin. Microbiol. Rev. 9 361-381) 0认为糖蛋白H(gH)具有便于病毒的细胞间传播的 融合功能。针对gE、gB、和gH的抗体在天然感染后和疫苗接种后是普遍的，并且已经显 示了在体外中和病毒感染性(Keller 等(1984) J. Virol. 52 293-297 ；Arvin 等(1986) J. Immunol. 137 1346-1351 ；Vafai 等(1988)J.Virol. 62 :2544_2551 ；Forghani 等(1990) J.Clin. Microbiol. 28 :2500_2506)。用VZV的初次感染引起禽痘(水痘)，其特征在于主要在面部和躯干上发生的极端 传染性的皮疹。初始感染后，病毒DNA可以整合入宿主神经元细胞的基因组中，并保持潜伏 达数年。病毒可以再活化，并在成人中引起疾病带状疱疹(shingles，herpes zoster) 0带 状疱疹产生的皮疹不同于初次感染过程中产生的。皮疹与严重的疼痛有关，并且可以导致 更严重的疾患，诸如疱疹后神经痛(post-herpetic neuralgia)。水痘疫苗(Varivax)是公众可获得的，并且已经在数个国家(包括美国)被添加至推荐的儿童疫苗接种日程表。更浓的水痘疫苗(Zostavax)配制剂已得到食品药品管理 局(Food and Drug Administration)批准用于在人群的老年成员中预防带状疱疹。虽然 已经证明了水痘疫苗是安全的，但是有一些如下的证据，即由疫苗赋予的对VAV感染的免 疫随时间而减弱(Chaves等(2007) N. Engl. J. Med. 356 :1121_1129)。因此，经过疫苗接种的 个体仍会对带状疱疹，即由VZV引起的更为严重的疾患易感。另外，疫苗是由活的减毒病毒 制成的，这产生从疫苗接种形成禽痘或带状疱疹的个体的可能性。实际上，已经有数例报告 的似乎由疫苗中使用的毒株所引起的带状疱疹病例(Matsubara等(1995). Acta Paediatr Jpn 37 648-50 ；Hammerschlag 等(1989). J Infect Dis. 160 :535_7)。疫苗中存在的活的 减毒病毒还限制了疫苗在无免疫应答的个体中的应用。 病毒样颗粒(virus like particle ；VLP)在结构上类似于成熟的病毒体，但是缺 乏病毒基因组而使其不可能发生病毒复制。VLP含有类似完整病毒的抗原性蛋白质，诸如壳 体和病毒包膜蛋白，并且也可以进行构建以在其表面上表达外来结构蛋白。因此，VLP可以 作为免疫原性组合物(例如疫苗)安全施用。此外，因为VLP类似天然病毒，而且是多价颗 粒结构，所以VLP可以比可溶性抗原更有效地诱导中和性抗体。先前已经从不同疱疹病毒科成员生成了表达糖蛋白或间层蛋白的VLP。由有包膜 的间层蛋白构成的轻颗粒(L颗粒)已经获自用单纯疱疹病毒1型(HSV-I)、马疱疹病毒 1 型(EHV-I)、或假狂犬病病毒感染的细胞(McLauchlan 和 Rixon (1992) J. Gen. Virol. 73 269-276 ；美国专利号5，384，122)。可以通过在存在病毒DNA复制抑制剂的情况中用HSV-I 感染细胞来生成不同类型的VLP，其称作病毒DNA复制前包膜颗粒(PREP)。PREP在结构上 类似L颗粒，但是含有不同的蛋白质组成(Dargan等(1995) J. Virol. 69 =4924-4932 ；美国 专利号5，994，116)。已经通过使用由酵母Ty反转录转座子编码的蛋白pi进行的技术来 生成表达来自VZV的gE蛋白的片段的杂合VLP (Garcia-Valcarcel等(1997) Vaccine 15 709-719 ；Welsh 等(1999) J. Med. Virol. 59 :78_83 ；美国专利号 6，060，064)。本专利技术描述了 新的嵌合VLP，其包含至少一种VZV蛋白，但是不包含酵母Ty蛋白。专利技术概述本专利技术包含一种纯化的嵌合VLP，其包含病毒核心蛋白和至少一种水痘带状疱疹 病毒(VZV)蛋白，其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白，而且不包含VZV核酸。在一个实施方 案中，所述VZV蛋白是嵌合的，并且包含VZV蛋白的胞外域和异源蛋白的跨膜和/或胞质结 构域。在另一个实施方案中，所述异源蛋白与所述病毒核心蛋白结合。在另一个实施方案 中，所述VZV蛋白选自下组gE本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种嵌合ＶＬＰ，其包含病毒核心蛋白和至少一种水痘带状疱疹病毒（ＶＺＶ）蛋白，其中ＶＬＰ不包含酵母Ｔｙ蛋白，而且不包含ＶＺＶ核酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：盖尔史密斯，彼得普什科，
申请(专利权)人：诺瓦瓦克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]