棉酚共结晶的生产方法技术

本发明专利技术涉及生产棉酚乙酸共结晶和（－）－棉酚乙酸共结晶的方法。本发明专利技术还涉及包括棉酚乙酸共结晶和（－）－棉酚乙酸共结晶的药物组合物以及棉酚乙酸共结晶和（－）－棉酚乙酸共结晶在诱导细胞中的细胞凋亡和使细胞对诱导细胞凋亡性细胞死亡敏化中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
侵害性癌细胞表型为导致胞内信号传导途径失调的各 种遗传和外遗传改变的结果(Ponder， Nature 411:336 (2001))。然而， 所有癌细胞的共同性在于其不能执行细胞凋亡性程序，并且因正常细 胞凋亡结构缺陷而导致的缺乏适当细胞的凋亡是癌症的特点(Lowe et al., Carcinogenesis 21:485 (2000))。大部分目前的癌症疗法，包括化疗 剂，放射和免疫疗法通过间接诱导癌细胞中的细胞凋亡起作用。癌细 胞因正常细胞凋亡结构中的缺陷而导致无法执行细胞凋亡程序的能力 由此通常与抗化疗，放射或免疫疗法诱导的细胞凋亡相关。不同来源 的人癌因细胞凋亡缺陷而导致的对目前治疗方案的原发性或获得性抗 性是目前癌症疗法的主要问题(Lowe et al.， Carcinogenesis 21:485 (2000); Nicholson, Nature 407:810 (2000))。因此，对设计和研发用于 改善癌症患者存活率和生活质量的新分子靶标特异性抗癌疗法的最新 和未来的尝试包括使癌细胞抗性凋亡特异性靶向的策略。在这方面， 在直接抑制癌细胞中细胞凋亡中起关键作用的靶向决定性负调节物代7表了新抗癌设计的赋有高度希望的治疗策略。 本专利技术提供了由含(+)-和(-)-棉酚混合物的棉酚乙酸原 料生产棉酚乙酸共结晶的方法，该方法包括从含(+)-和(-)-棉酚混合物 的棉酚乙酸原料在丙酮和乙酸中的重结晶混合物中使棉酚乙酸共结晶 重结晶。曰曰曰。 本专利技术进一步提供了由(-)-棉酚丙酮共结晶生产(-)-棉 酚乙酸共结晶的方法，该方法包括用乙酸替代所述(-)-棉酚丙酮共结晶 中的丙酮而形成(-)-棉酚乙酸共结晶。10020! 本专利技术还提供了通过本专利技术方法生产的(-)-棉酚乙酸共结晶。|()()211 本专利技术还提供了通过本专利技术方法生产的(-)-棉盼丙酮共结晶。!0022j 本专利技术进一步提供了降低棉酚乙酸共结晶或(-)-棉酚 乙酸共结晶中杂质水平的方法，该方法包括将所述的共结晶溶于丙酮 并且除去乙酸。 本专利技术进一步提供了制备药物组合物的方法，该方法 包括混合在诱导细胞中细胞凋亡或使细胞对细胞凋亡诱导物敏化方面 为治疗有效量的棉酚乙酸共结晶或(-)-棉酚乙酸共结晶与药学上可接 受的载体。|00251 本专利技术进一步提供了包括棉酚乙酸共结晶或(-)-棉酚 乙酸共结晶和将该组合物对动物给药的说明书的试剂盒。这些试剂盒 可以^壬选包含其它治疗剂，例如抗癌药。12专利技术详述 术语"棉酚乙酸共结晶"意指棉酚乙酸共结晶，其包 括约1:1摩尔比的任意比例的(+)-和(-)-棉酚混合物和乙酸，含有低于135%的杂质。o)约为-300°至约 -390°,约-375°至约-390°或约-385°至约-390。(例如，参见Dowd ， Chirality, 15:486 (2003); Ciesielska et al., Chem. Phys. Lett. 353:69 (2992); Freedman et al" Chirality, 15:196 (2003);和Zhou et al" Kexue Tongbao， 28:1574 (1983))。100321 本专利技术的 一个方面涉及由含(+)-和(-)-棉酚混合物的棉 酚乙酸原料生产棉酚乙酸共结晶的方法，该方法包括使棉酚乙酸共结 晶从溶于溶剂的棉酚乙酸晶体溶液中重结晶。在一个实施方案中，使 棉酚乙酸共结晶从棉酚乙酸在丙酮和乙酸混合物中的溶液中重结晶。 在一个具体的实施方案中，使棉酚乙酸共结晶从包括6-10mL丙酮 和1 - 5mL乙酸/克包含(+)-和(-)-棉酚混合物的棉酚乙酸原料的重结晶 混合物中重结晶。在一个优选的实施方案中，使棉酚乙酸共结晶从包 括约8mL丙酮和约3mL乙酸/克包含(+)-和(-)-棉酚混合物的棉酚乙酸 原料的重结晶混合物中重结晶。将所述的重结晶混合物保持约15分钟 -约100分钟，例如约30分钟-约60分钟，以使共结晶形成。使重 结晶在环境温度，例如约15°C-约30°C,例如约22。C下进行。在重 结晶后，从重结晶混合物中收集结晶(例如通过过滤)并且用非极性溶 剂，例如戊烷，己烯，己烷，庚烷或其混合物洗涤。优选快速进行洗 涤步骤以避免将非极性溶剂掺入结晶。在一个优选的实施方案中，在2分钟以内使用庚烷洗涤。已经发现使用庚烷长时间洗涤得到庚烷共 结晶。因此，优选短洗涤时间(2分钟以内)。然后例如在真空中干燥结 晶，同时避光。可以将重结晶重复一次以上(例如2， 3, 4， 5或5次 以上)以便改善杂质分布，例如直到棉酚共结晶包括低于约5%， 4%， 3%， 2%， 1%， 0.5%或0.1%的杂质。 一旦获得所需杂质分布， 就可以在低温，例如约-20。C至约10。C，优选约-10。C至约0。C下进行 最终的重结晶。将重结晶混合物保持约15分钟-约100分钟，例如约 30-约60分钟且然后如上所述过滤，洗涂并且干燥所得结晶。 然后将粗分离物溶于包括非极性和极性的溶剂系统(例如1:1庚烷乙酸乙酯)并且通过使用含少量乙酸(以避免粘附填料) 的相同溶剂系统的硅填料。可以收集级分并且使用TLC或HPLC监 测棉酚含量。可以收集含产物的级分并且然后可以例如使用具有设定 在约30°C-约40°C的浴的旋转蒸发器蒸发至干。 作为最终步骤，可以将R-(-)-棉酚丙酮共结晶重新悬浮 于乙酸中并且保持至少约5分钟，例如约10-约20分钟并且例如通 过过滤分离结晶并且用乙酸冲洗。然后例如用真空干燥共结晶并且储 存在避光容器中(例如棕色玻璃小瓶中)。|0048j 本专利技术的另 一个方面涉及衍生含(+)-和(-)-棉酚混合物 的棉酚乙酸原料的可选择方法，以便在上述生产(-)-棉酴乙酸共结晶方 法中形成希夫碱。用三乙胺处理包括(+)-和(-)-棉酚和旋光胺(例如L-苯丙氨酸曱酯盐酸盐)在非极性溶剂(例如二氯甲烷)中的混合物的棉酚 乙酸原料的混合物并且任选在无氧气环境中混合至少2小时，例如约 5小时。可以使用HPLC或TLC方法监测反应完成。在反应完成后， 用水萃取该混合物并且分离有机相且可以例如使用具有设定在约25°C -约35°C的浴的旋转蒸发器，随后使用高度真空过夜蒸发至干。 !()()49j 在一个实施方案中，所述的(-)-棉酚乙酸共结晶具有 约95%， 99%或99.5%的纯度。0050j 在一个实施方案中，生产(-)-棉酚乙酸共结晶的方法 生产了包括低于约5%,优选低于约3%的总杂质的终产物。在另一个 实施方案中，终产物包括低于约1%的任意个别非半-脱水棉酚的杂 质，优选低于约0.25%，甚至更优选低于0.1%。在另一个实施方案 中，终产物包括低于约4%的半-脱水棉酚，优选低于约2%。在另一 个实施方案中，终产物包括低于约4%的水，优选低于约2%。在另一 个实施方案中，终产物包括低于约50ppm的重金属，优选低于约 20ppm。在另一个实施方案中，终产物包括各自低于约10，000ppm的 丙酮，乙酸乙酯，庚烷或己烷，优选低于约5，000ppm。在另一个实施19方案中，终产物包括低于约10%的(+)-棉酚，优选低于约5%。 本专利技术进一步提供了由本文档来自技高网...

【技术保护点】
由含（＋）－和（－）－棉酚混合物的棉酚乙酸原料生产棉酚乙酸共结晶的方法，该方法包括从含（＋）－和（－）－棉酚混合物的棉酚乙酸原料在丙酮和乙酸中的重结晶混合物中使棉酚乙酸共结晶重结晶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：王少萌，陈建勇，JFW基恩，郭明，
申请(专利权)人：密执安州立大学董事会，
类型：发明
国别省市：US[美国]