多肽、抗体可变域和拮抗剂制造技术

本发明专利技术涉及能抵抗蛋白酶降解的抗－ＴＮＦＲ多肽和抗体单可变域（ｄＡｂ），以及含有这些的拮抗剂。多肽、ｄＡｂ和拮抗剂可作为可能在被给药于患者时遇到蛋白酶的治疗剂和／或预防剂，例如用于肺部给药、口服给药，递送至患者的肺和递送至患者的ＧＩ道，以及用于治疗癌症和炎症，如关节炎或ＣＯＰＤ。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多肽、抗体可变域和拮抗剂 本专利技术涉及蛋白酶抗性多肽、免疫球蛋白(抗体)单可变域和包含这些的抗肿瘤 坏死因子1(TNFRl，p55，CD 120a， P60， TNF受体超家族成员1A， TNFRSF1A)拮抗剂。本专利技术 进一步涉及含有该抗-TNFR1配体的用途、制剂、组合物和装置。
技术介绍
多肽和肽日益成为各种应用中的重要制剂，这些应用包括工业应用和用作医学、 治疗和诊断试剂。然而，在特定的生理学情况中，如炎症(例如，COPD)状况和癌症中，组织、 器官或动物(例如，在肺中，在肿瘤中或邻近肿瘤)中存在的蛋白酶含量将增加。这种蛋白 酶的增加会导致内源蛋白质以及给药来治疗疾病的治疗肽、多肽和蛋白质加速的降解和失 活。因此，对体内使用(例如，用于治疗、诊断或预防疾病)具有潜能的一些药剂仅仅具有 有限的功效，因为它们受到蛋白酶的快速降解和灭活。 蛋白酶抗性多肽提供了若干优势。例如，蛋白酶抗性多肽在体内能比蛋白酶敏感 性药剂保持更长时间的活性，因此，能将功能保持足以产生生物效应的时间段。对于选择能 抵抗蛋白酶降解并且还具有理想生物活性的多肽的改进方法还存在着需求。 TNFR1 TNFR1是一种跨膜受体，其含有结合配体的胞外区和缺少固有信号转导活性但能 够结合信号转导分子的胞内结构域。TNFR1与所结合的TNF的复合物含有三条TNFR1链和 三条TNF链。(Banner等人，Cell， 73 (3) 431-445 (1993).) TNF配体作为被三条TNFR1链结 合的三聚体而存在(同上)。在受体-配体复合物中，三条TNFRl链被紧密聚簇(cluster) 在一起，而这种聚簇是TNFR1介导的信号转导的先决条件。事实上，结合TNFR1的多价试 剂例如抗-TNFR1抗体能够在不存在TNF时诱导TNFR1聚簇和信号转导，并且通常被用作 TNFR1激动剂(参见例如，Belka等人，EMBO， 14(6) :1156-1165(1995) ;Mandik-Nayak等人， J. Immunol, 167 :1920-1928(2001).)。因此，结合TNFR1的多价试剂通常不是有效的TNFR 1拮抗剂，甚至即使它们阻断TNF a与TNFR1的结合时。 TNFR1的胞外区包含十三个氨基酸的氨基末端区段(SEQ IDNO :603 (人)的氨基 酸1-13;SEQ ID N0:604(小鼠)的氨基酸1-13)、结构域1 (SEQ ID N0:603(人)的氨基 酸14-53 ;SEQ ID N0:604(小鼠)的氨基酸14-53)、结构域2 (SEQ ID N0:603(人)的氨基 酸54-97 ;SEQ IDNO :604(小鼠)的氨基酸54-97)、结构域3 (8SEQ ID N0:603(人)的氨 基酸98-13 ;SEQ ID N0:604(小鼠)的氨基酸98-138)、和结构域4 (SEQ IDN0:603(人)的 氨基酸139-167 ;SEQ ID N0:604(小鼠)的氨基酸139-167)，后面是近膜区(SEQ ID NO: 603_(人)的氨基酸168-182 ;SEQ ID N0:604(小鼠)的氨基酸168-183)(参见Banner等 人，Cell 73(3)431-445(1993)和Loetscher等人，Cell 61(2)351-359(1990).)。结构域 2和3与所结合的配体(TNFP， TNF a)接触(Banner等人，Cell, 73 (3) 431-445 (1993).)。 TNFR1的胞外区还含有一个区域，其被称为前-配体结合组装结构域(pre-ligandbinding assembly domain)或PLAD结构域(SEQ ID NO :603_(人)的氨基酸1-53 ;SEQ ID NO: 604(小鼠)的氨基酸1-53)(美国政府，WO 01/58953 ;Deng等人，Nature Medicine, doi : 10. 1038/nml304(2005))。 在体内通过一种处理将TNFR1从细胞的表面除去，该处理包括在结构域4或在近 膜区(SEQ ID NO :603的氨基酸168-182 ;SEQ ID NO :604的氨基酸168-183)中TNFR1的 蛋白质水解，以产生可溶形式的TNFR1。可溶的TNFR1保持了结合TNF a的能力，进而能够 作为TNFa活性的内源性抑制剂。 专利技术概述 在一个方面中，本专利技术提供了含有与DOM lh-131-206的氨基酸序列(显示于图3 中)为至少93%同一性的氨基酸序列的多肽。在一个实施方案中，同一性百分比为至少94、 95、96、97、98或99%。在一个实施方案中，多肽是DOM lh-131_206。本专利技术进一步提供了 (基本上)纯的DOM lh-131-206单体。在一个实施方案中，DOM lh-131-206为至少98、99、 99. 5%纯或100%纯的单体。 在一个方面中，本专利技术提供了一种多肽是由与DOM lh-131-206的核苷酸序列(显 示于附图说明图19中)为至少80%同一性的核苷酸序列编码的。在一个实施方案中，同一性百分比 为至少70、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%。 在一个方面中，本专利技术提供了由与DOM lh-131-206的核苷酸序列(显示于图19 中)为至少57X同一性的核苷酸序列编码的多肽，并且其中该多肽包含与D0M lh-131-206 的氨基酸序列(显示于图3中)为至少93%同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中， 核苷酸序列的同一性百分比为至少60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、 98或99%。在一个实施方案中，氨基酸序列的同一性百分比为至少94、95、96、97、98或 99%或100%。例如，核苷酸序列可以是DOM lh-131-206核苷酸序列(显示于图19中) 的密码子优化形式。序列的密码子优化是本领域已知的。在一个实施方案中，对于在 细菌(例如，大肠杆菌(E.coli)或假单胞菌属(Pseudomonas)，例如，荧光假单胞菌(P fluorescens))、哺乳动物(例如，CHO)或酵母宿主细胞(例如，毕赤酵母属(Picchia)或酵 母属(Saccharomyces)，例如，巴斯德毕赤酵母(P. pastoris)或酿酒酵母(S. cerevisiae)) 中的表达，将核苷酸序列优化。 在一个方面中，本专利技术提供了含有本专利技术多肽的融合蛋白。 在一个方面中，本专利技术提供了抗-TNFa I型受体(TNFR1 ;p55)免疫球蛋白单可变 域，其包含与DOM lh-131-206的氨基酸序列(显示于图3中)为至少93%同一性的氨基酸 序列。在一个实施方案中，同一性百分比为至少94、95、96、97、98或99%。 在一个方面中，本专利技术提供了抵抗蛋白酶的抗-TNFa I型受体(TNFR1 ;p55)免疫 球蛋白单可变域，其包含与DOM lh-131-206的氨基酸序列为至少90%同一性的氨基酸序 列。在这些方面的一个实施方案中，同一性百分比为至少80、85、90、9本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗－ＴＮＦαＩ型受体（ＴＮＦＲ１；ｐ５５）免疫球蛋白单可变域，其含有与ＤＯＭ１ｈ－１３１－２０６的氨基酸序列（显示于图３中）为至少９３％同一性的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L耶斯珀斯，M普佩卡，I汤林森，C埃内弗，
申请(专利权)人：杜门蒂斯有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]