多肽，抗体可变结构域＆拮抗剂制造技术

本发明专利技术涉及能抵抗蛋白酶降解的抗－ＩＬ－１Ｒ１多肽和抗体单可变结构域（ｄＡｂ），以及含有这些的拮抗剂。所述多肽、ｄＡｂ和拮抗剂可作为当施用于患者时可能遭遇蛋白酶的治疗剂和／或预防剂，例如用于肺部给药、口服给药，递送至患者的肺和递送至患者的ＧＩ道，以及用于治疗炎性疾病，如关节炎或ＣＯＰＤ。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多肽，抗体可变结构域&拮抗剂本专利技术涉及蛋白酶抗性多肽，免疫球蛋白(抗体)单可变结构域和包含这些的抗 白细胞介素I型受体(IL-IRl)拮抗剂。本专利技术进一步涉及包含所述抗-IL-IRl配体的用 途，制剂，组合物和装置。
技术介绍
多肽和肽在许多应 用中成为越来越重要的试剂，包括工业应用和作为医学、治疗 和诊断试剂的用途。然而，在某些生理状态例如炎症性状态(例如，C0PD)和癌症中，组织、 器官或动物(例如，在肺部、肿瘤内或邻近于肿瘤)中存在的蛋白酶的数量可能增加。这种 蛋白酶的增加会导致内源蛋白质以及被施用来治疗疾病的治疗肽、多肽和蛋白质加速的降 解和失活。因此，对体内使用(例如，用于治疗、诊断或预防疾病)具有潜力的某些药剂仅 仅具有有限的功效，因为它们被蛋白酶快速降解和灭活。蛋白酶抗性多肽提供了几种优点。例如，蛋白酶抗性多肽在体内能比蛋白酶敏感 性试剂保持更长时间的活性，因此，能将功能保持足以产生生物效应的时间段。对于选择对 蛋白酶降解有抗性并且还具有期望的生物活性的多肽的改进方法存在着需求。IL-IRl某些结合白细胞介素II型受体(IL-IRl)并中和其活性的某些试剂已经被证明对 于某些炎性状况是有效的治疗药物，例如中等至严重的活跃类风湿性关节炎。然而，其他结 合IL-IRl的试剂例如抗-IL-IRl抗体AMG 108 (Amgen)已经无法满足临床研究中的主要终 末点(primary endpoint)。期望的是提供结合并拮抗IL-IRl的试剂，其有效治疗肺炎或呼 吸性疾病例如慢性阻塞性肺病(COPD)。存在对拮抗ILl-Rl的改进药物以及用于给药这些药物以治疗肺炎和肺病的方法 的需要。专利技术概述在一个方面中，本专利技术提供了含有与D0M4-130-201的氨基酸序列为至少98%同 一性或与D0M4-130-202的氨基酸序列(显示于图4中)为至少97%同一性的氨基酸序列的 多肽。在一个实施方案中，同一性百分比为至少97. 5，98，98. 5或99%。在一个实施方案中， 多肽是D0M4-130-201或D0M4-130-202。本专利技术进一步提供了(基本上)纯的D0M4-130-201 或 D0M4-130-202 单体。在一个实施方案中，D0M4-130-201 或 D0M4-130-202 为至少 98、99、 99. 5%纯或100%纯的单体。在一个方面中，本专利技术提供了一种多肽，其包含蛋白酶抗性氨基酸序列，所述蛋白 酶抗性氨基酸序列与D0M4-130-201或D0M4-130-202的氨基酸序列为至少90%同一性。 在这些方面的一个实施方案中，同一性百分比为至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98 或99%。在一个实施方案中，所述多肽是D0M4-130-201或D0M4-130-202。在一个方面中，本专利技术提供了由与D0M4-130-201或D0M4-130-202的核苷酸序列 的核苷酸序列(显示于附图说明图19)为至少80%同一性的氨基酸序列编码的多肽。在一个实施方 式中，同一性百分比是至少 70，80，85，90，91，92，93，94，95，96，97，98 或 99%。在一个方面中，本专利技术提供了由与D0M4-130-201或D0M4-130-202的核苷酸序列(显示于图19)为至少57%同一性的核苷酸序列编码的多肽，并且其中该多肽包含 与D0M4-130-201的氨基酸序列为至少98 %同一性或与D0M4-130-202的氨基酸序列为 至少97%同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，核苷酸序列的同一性百分比为至少 60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98 或 99%。在一个实施方案中，氨基酸 序列的同一性百分比为至少94，95，96，97，98或99%或100%。例如，核苷酸序列可以是 D0M4-130-201或D0M4-130-202核苷酸序列(显示于图19)的密码子优化形式。序列的密 码子优化是本领域已知的。在一个实施方案中，对于在细菌(例如，大肠杆菌(E.coli)或 假单胞菌属(Pseudomonas)，例如，荧光假单胞菌(P fluorescens))、哺乳动物(例如，CHO) 或酵母宿主细胞(例如，毕赤酵母属(Picchia)或酵母属(Saccharomyces)，例如，巴斯德毕 赤酵母(P.pastoris)或酿酒酵母(S. cerevisiae))中的表达，将核苷酸序列优化。 在一个方面中，本专利技术提供了含有本专利技术多肽的融合蛋白。在一个方面中，本专利技术提供了抗-白细胞介素-II型受体(IL-IRl)免疫球蛋白单 可变结构域，其包含与D0M4-130-201的氨基酸序列为至少98%同一性或与D0M4-130-202 的氨基酸序列(显示于图4)为至少97%同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，同一性 百分比为至少97. 5，98，98. 5或99%。在一个实施方案中，免疫球蛋白单可变结构域包含选自22S，49S，83S和94Y的 —^vMSSIj Ji Φ lie ^ISig Kabat( "Sequencesof Proteins of ImmunologicalInterest，，(免疫学重要性蛋白的序列)，US Department of Health and Human Services (美国卫生和人类服务部)，1991)。在一个实施方案中，免疫球蛋白单可变结构域包含22S，49S，83S和94Y，其中编号 是根据Kabat。在一个方面中，本专利技术提供了抗-白细胞介素-1 I型受体(IL-IRl)免疫球蛋白 单可变结构域，其包含与D0M4-130-201或D0M4-130-202的氨基酸序列相同的氨基酸序列。在一个方面中，本专利技术提供了由与D0M4-130-201或D0M4-130-202的核苷酸序 列(显示于图19)为至少80%同一性的核苷酸序列编码的抗-白细胞介素-II型受体 (IL-IRl)免疫球蛋白单可变结构域。在一个实施方案中，同一性百分比为至少70、80、85、 90、91、92、93、94、95、96、97、98 或 99%。在一个方面中，本专利技术提供了由与D0M4-130-201或D0M4-130-202的核苷酸序 列(显示于图19)为至少57%同一性的核苷酸序列编码的抗-白细胞介素-II型受体 (IL-IRl)免疫球蛋白单可变结构域，并且其中可变结构域包含与D0M4-130-201的氨基酸 序列为至少98%同一性或与D0M4-130-202的氨基酸序列为至少97%同一性的氨基酸序 列。在一个实施方案中，核苷酸序列的同一性百分比为至少60、65、70、75、80、85、90、91、92、 93、94、95、96、97、98或99%。在一个实施方案中，氨基酸序列的同一性百分比为至少94， 95，96，97，98 或 99%或 100%。例如，核苷酸序列可以是 D0M4-130-201 或 D0M4-130-202 的 核苷酸序列(显示于图19)的密码子优化形式。序列的密码子优化是本领域已知的。在一 个实施方案中，对于在细菌(例如，大肠杆菌或假单胞菌属，例如，荧光假单胞菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗－白细胞介素－１Ｉ型受体（ＩＬ－１Ｒ１）免疫球蛋白单可变结构域，其含有与ＤＯＭ４－１３０－２０２的氨基酸序列（显示于图４中）为至少９７％同一性的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L耶斯珀斯，M普佩卡，I汤林森，C埃内弗，
申请(专利权)人：杜门蒂斯有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]