迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条及快速检测方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条，其是胶体金免疫层析检测试纸条，胶体金免疫层析检测试纸条的结合垫上吸附有迟钝爱德华氏菌胶体金标记抗体，胶体金免疫层析检测试纸条的分析膜上具有检测线和质控线，检测线上包被有迟钝爱德华氏菌抗体，质控线上包被有与迟钝爱德华氏菌抗体免疫原相同的第二抗体。还提供了一种迟钝爱德华氏菌快速检测方法，及上述的迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条在检测迟钝爱德华氏菌中的应用。本发明专利技术的迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条可以简便、快速、敏感、准确检测迟钝爱德华氏菌，能够在早期控制迟钝爱德华氏菌病的蔓延，在水产养殖迟钝爱德华氏菌病害控制中具有重要的意义，适于大规模推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测试纸条
，具体涉及迟钝爱德华氏菌检测试纸条技术领 域，特别涉及一种迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条及快速检测方法与应用。
技术介绍
迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是目前在水产养殖业中具有极大危害的 革兰氏阴性病原菌，能够感染包括海水鱼和淡水鱼在内的多种鱼类。它在世界不少国家和 地区都引起了不同程度的鱼类灾害，近年来给我国水产养殖业造成了极大的危害。建立迟钝爱德华氏菌快速、简单、准确的检测方法，对水产养殖迟钝爱德华氏菌病 害控制具有重要的意义。目前传统的检测方法，是对病原微生物富集，根据菌落形态特征和 生理生化特征或结合16S rDNA测序来判定病原种类。此外，免疫学检验技术被广泛的应用 到病原微生物的检测中。包括细菌凝集实验、免疫扩散实验、免疫荧光技术、免疫印迹技术、 酶联免疫吸附技术(ELISA)等。有人报道了以聚合酶链反应(PCR)或环介导等温扩增技术 (LAMP)对迟钝爱德华氏菌特异性基因进行检测。部分研究工作者采用免疫学检验方法对迟 钝爱德华氏菌进行检测，包括荧光抗体技术、应用抗迟钝爱德华氏菌的单克隆抗体建立的 免疫组化检验方法、(间接)酶联免疫吸附法(ELISA)等。Swain等人将斑点酶联免疫吸附 法(Dot-ELISA)用于迟钝爱德华氏菌的检测中。传统的细菌学生理生化鉴定方法费时繁琐，而一般的免疫酶试验、免疫荧光法及 ELISA等方法虽然可以用于迟钝爱德华氏菌的检测，但其操作程序较复杂、检测相对费时费 力。PCR技术简便、快速、敏感性高，但对仪器设备及实验技能均要求较高，在水产养殖的基 层单位难以大面积推广。20世纪90年代初，胶体金免疫层析技术(GICA)逐渐发展起来。该方法是一种 以胶体金为标记物的快速免疫结合分析技术，具有特异性强、灵敏度高、简便快速、肉眼判 读、稳定性高等优点。相比较传统的几种迟钝爱德华氏菌的检测方式，胶体金免疫技术在检 测时间以及操作简便性上占了极大的优势，本专利技术将这项技术运用于迟钝爱德华氏菌的检 测，建立简便、快速、敏感、准确检测迟钝爱德华氏菌的方法，就能够在早期控制迟钝爱德华 氏菌病的蔓延，在水产养殖迟钝爱德华氏菌病害控制中具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服了上述现有技术中的缺点，提供一种迟钝爱德华氏菌快速检 测试纸条及快速检测方法与应用，该迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条可以简便、快速、敏 感、准确检测迟钝爱德华氏菌，能够在早期控制迟钝爱德华氏菌病的蔓延，在水产养殖迟钝 爱德华氏菌病害控制中具有重要的意义，适于大规模推广应用。为了实现上述目的，在本专利技术的第一方面，提供了 一种迟钝爱德华氏菌快速检测 试纸条，其特点是，所述迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条是胶体金免疫层析检测试纸条，所 述胶体金免疫层析检测试纸条的结合垫上吸附有迟钝爱德华氏菌胶体金标记抗体，所述胶体金免疫层析检测试纸条的分析膜上具有检测线和质控线，所述检测线上包被有迟钝爱德 华氏菌抗体，所述质控线上包被有与所述迟钝爱德华氏菌抗体免疫原相同的第二抗体。较佳地，所述迟钝爱德华氏菌抗体是迟钝爱德华氏菌EIB202为免疫原获得的抗 体。较佳地，所述第二抗体是羊抗兔抗体或羊抗鼠抗体。其中，迟钝爱德华氏菌抗体的浓度可以为4. 77mg/ml, Iml胶体金标记的迟钝爱德 华氏菌抗体的量为6 25 μ g，最佳标记量为18 μ g，最佳标记PH为8. 0。较佳地，所述分析膜是硝酸纤维素膜。较佳地，所述胶体金免疫层析检测试纸条还包括支撑板、样品垫和吸水垫，所述样 品垫、所述结合垫、所述分析膜和所述吸水垫设置在所述支撑板上并依次相互部分重叠。以 样品垫为起始端，吸水垫为末端，支撑板位于底层，其上自起始端至末端依次为样品垫、结 合垫、分析膜和吸水垫，相邻两部分交界处部分重叠。分析膜上包被有迟钝爱德华氏菌抗体 的检测线靠近起始端，包被有第二抗体的质控线靠近末端。更佳地，所述支撑板为PVC板，所述样品垫为玻璃纤维素膜、聚酯膜或滤纸纤维， 所述吸水垫为滤纸纤维。在本专利技术的第二方面，提供了一种迟钝爱德华氏菌快速检测方法，其特点是，采用 上述的迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条进行检测。具体操作为在检测时，将采集的样品滴加至样品垫，样品在毛细作用下自起始端 向末端层析流动。若检测线和质控线都显色，结果为阳性，若检测线不显色而质控线显色则 为阴性，若检测线与质控线都不显色或检测线显色而质控线不显色，则检测结果无效。在本专利技术的第三方面，提供了上述的迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条在检测迟钝 爱德华氏菌中的应用。应用时，将采集的样品用样品稀释液进行适当的稀释，然后将稀释的样品滴加至 检测试纸条的样品垫，样品在毛细作用下自起始端向末端流动，3 10分钟判断结果。本专利技术的有益效果在于本专利技术的迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条是胶体金免疫 层析检测试纸条，所述胶体金免疫层析检测试纸条的结合垫上吸附有迟钝爱德华氏菌胶体 金标记抗体，所述胶体金免疫层析检测试纸条的分析膜上具有检测线和质控线，所述检测 线上包被有迟钝爱德华氏菌抗体，所述质控线上包被有与所述迟钝爱德华氏菌抗体免疫原 相同的第二抗体，从而可以简便、快速、敏感、准确检测迟钝爱德华氏菌，能够在早期控制迟 钝爱德华氏菌病的蔓延，在水产养殖迟钝爱德华氏菌病害控制中具有重要的意义，适于大 规模推广应用。采用上述的迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条检测迟钝爱德华氏菌，与传统的检测 方法相比，具有如下优点a.操作简单，不需特殊设备，不需专业技术人员操作；b.方便快捷，只需3 10分钟即可得出结果，可迅速采取应对措施；c.经济实惠，可用于对大量样品进行筛选。本专利技术的迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条的所有这些性能特征都为其商品化提 供了现实的开发和应用前景。附图说明图1是本专利技术的迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条的一具体实施例的主视示意图。图2是图1所示的具体实施例的侧视示意图。图3是采用图1所示的具体实施例进行检测的阳性检测结果示意图，T、C线同时 显色。图4是采用图1所示的具体实施例进行检测的阴性检测结果示意图，仅C线显色。图5是采用图1所示的具体实施例进行检测的无效检测结果示意图，C线不显色。图6是采用图1所示的具体实施例进行特异性检测的结果示意图。图7是采用图1所示的具体实施例进行灵敏度检测的结果示意图。图8是采用图1所示的具体实施例进行模拟现场检测的结果示意图。其中，1为支撑板，2为样品垫，3为金标垫，4为分析膜(T 包被有迟钝爱德华氏菌 多克隆抗体的检测线，C 包被有羊抗兔IgG的质控线)，5为吸水垫。具体实施方式为了能够更清楚地理解本专利技术的
技术实现思路
，特举以下实施例详细说明。实施例1 多克隆抗体的制备1)用TSB培养基将迟钝爱德华氏菌EIB202 (CCTCC-M 208068)培养至对数期后期， 取菌液于4°C,4000r · mirT1离心5min，用0. 05mol · Γ1的PBS缓冲液(ρΗ 7. 4)洗涤三次 后，PBS缓冲液重悬，加入0. 4%的甲醛灭活48h ；2)将灭活菌液与等量完全弗氏佐剂充分乳化后，经背部皮内多点注射成年新西兰 雌兔，抗原剂量2 X IO7CFU/只；幻2周后将灭活菌液与等量不完全弗氏佐剂充分乳化，经背部皮内多点注射免本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条，其特征在于，所述迟钝爱德华氏菌快速检测试纸条是胶体金免疫层析检测试纸条，所述胶体金免疫层析检测试纸条的结合垫上吸附有迟钝爱德华氏菌胶体金标记抗体，所述胶体金免疫层析检测试纸条的分析膜上具有检测线和质控线，所述检测线上包被有迟钝爱德华氏菌抗体，所述质控线上包被有与所述迟钝爱德华氏菌抗体免疫原相同的第二抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖婧凡，张元兴，刘和松，王启要，刘琴，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]