一种洋葱组织培养的方法技术

本发明专利技术是一种洋葱组织培养的方法，其特征在于：将收获的新鲜洋葱球冷藏，然后剥除外皮至直径为２－３ｃｍ，然后对它进行消毒处理；然后在无菌条件下将消毒处理后的洋葱球切除成外植体，然后将外植体接种到洋葱增殖培养基Ｉ或ＩＩ中；经过培养，获得已长出若干个侧芽的无菌材料；其后每２０－３０天就可扩繁一次；将扩繁得到的洋葱单株壮苗转入生根培养基中进行培养，得成活洋葱苗；本发明专利技术对洋葱品种进行组织培养时，采用区别的培养基，其中利用花宝的加入来提高其增殖率；在扩繁过程中，使用含适当添加多效唑的培养基，可将增殖率提高３－５％，使用含适当添加间苯三酚的培养基，可一定程度减少或缓解组培苗玻璃化现象及组织材料老化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物的培养方法，特别是一种洋葱组织培养方法。
技术介绍
洋葱产业是一个效益显著的产业，目前洋葱已成为了我国最主要的出口创汇蔬菜 之一，许多农民通过洋葱实现了脱贫致富。而为了适应国内外市场需求，洋葱优良品种的需 求也日益增加。由于洋葱传入我国只有百年历史，我国洋葱品种资源少，单是品种引进、常 规品种选育，就要大量进口种子，成本很大；为了加速杂交品种的选育，需要得到洋葱的不 育系和保持系。不管是洋葱优异种质的保存还是杂交育种中不育系和保持系的建立，都可 以采用洋葱组织培养来实现。但是，洋葱品种繁多，不同品种的洋葱对不同成分的培养基， 增殖效果差异很大，直接影响扩繁效果；而且，在培养过程中经常会出现玻璃化及组织材料 老化现象，极大地限制了培养效果。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种可以提高洋葱增殖 率，缓解或减少组培苗玻璃化现象及组织材料老化的洋葱组织培养的方法。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是一种洋葱 组织培养的方法，其特点是，其步骤如下(1)将收获的新鲜洋葱球置于4-5°C环境中冷藏3-4周；(2)将冷藏后的洋葱球剥除外皮至直径为2-3cm，然后对它进行消毒处理，消毒后用无 菌水冲洗干净；(3)在无菌条件下将消毒处理后的洋葱球切除至鳞茎盘为l_2mm厚、贴近鳞茎盘的鳞 茎的长、宽各为4-5mm、高为0. 5-lmm的外植体，再用刀片在鳞茎上表面做“井”字形划痕，然 后将外植体接种到洋葱增殖培养基I或II中；(4)经过20-30天的培养，获得已长出若干个侧芽的无菌材料；然后按下述方法对无菌 材料进行扩繁将无菌材料置于消毒好的培养皿中，再将侧芽从鳞茎上切下或掰下并转到 洋葱增殖培养基III或IV中培养20-30天，获得已长出丛生芽的无菌材料，其后每20-30 天就可扩繁一次；当扩繁过程中出现玻璃化现象时，则使用增殖培养基V或VI进行培养； 扩繁过程中，含多效唑的增殖培养基不连续使用，含间苯三酚的增殖培养基不连续使用；例 如上一次扩繁使用了增殖培养基III，接下来的扩繁就不使用增殖培养基III，也不使用 增殖培养基IV (因为都含有多效唑)，可以使用一次增殖培养基V或者VI，之间则一般插入 使用增殖培养基I或II 2-4次；(5)将扩繁得到的洋葱单株壮苗转入生根培养基中进行培养，培养温度为20-25°C， 培养至洋葱生根后，打开培养器皿的封口，再继续培养1-2天后将洋葱苗从培养器皿中取 出，洗净根部附着的培养基，移入装有沙土的盆中，于自然光照条件下，白天22-25°C、夜间 11-15°C的条件下培养20-30天，得成活洋葱苗；所述的洋葱增殖培养基I是由以下重量配比的原料组成单位mg/l，花宝 3000-4000; 6-BA (6-苄氨基嘌呤)4-7; NAA (α-萘乙酸)0. 1-0. 6 ；蔗糖30000 ；琼脂 8000 ；其余为纯净水；ρΗ为5. 8 ； 所述的洋葱增殖培养基III除含有洋葱增殖培养基I中所述的重量配比的全部原料 夕卜，还含有重量配比为0. 2-0. 5的多效唑；其ρΗ为5.8 ；所述的洋葱增殖培养基V除含有洋葱增殖培养基I中所述的重量配比的全部原料外， 还含有重量配比为0. 2-0. 5的间苯三酚；其ρΗ为5. 8 ；所述的洋葱增殖培养基II是由以下重量配比的原料组成单位mg/l， NH4NO31600-1700 ；KNO31800-1900 ；KH2PO3170-180 ；CaCl2 · 2H20 400-450 ；MgSO4 · 7H20 350-380 ；FeSO4 · 7H20 26-28 ；Na2-EDTA35-40 ；MnSO4 · 4H20 20-25 ；ZnSO4 · 7H207-10 ；H3BO35-7 ；KI0. 5-1 ；Na2MO4 · 2H20 0. 2-0. 3 ；CuSO4 · 5H20 0. 02-0. 03 ；CoCl2 · 6H20 0. 02-0. 03 ；肌醇88-100 ；甘氨酸2-5 ；盐酸硫胺素 0. 3-0. 5 ；盐酸吡哆素 0. 3-0. 5 ；烟酸0. 3-0. 5 ；6-BA4-7 ；NAA0. 1-0.6 ；蔗糖30000 ；琼脂8000 ；其余为纯净水；ρΗ为5. 8 ；所述的洋葱增殖培养基IV除含有洋葱增殖培养基II中所述的重量配比的全部原料 夕卜，还含有重量配比为0. 2-0. 5的多效唑；其ρΗ为5.8 ；所述的洋葱增殖培养基VI除含有洋葱增殖培养基II中所述的重量配比的全部原料 夕卜，还含有重量配比为0. 2-0. 5的间苯三酚；其ρΗ为5. 8 ；洋葱生根培养基是由以下重量配比的原料组成单位mg/l， NH4NO3800-850 ；KNO3900-950 ；KH2PO385-90 ； CaCl2 · 2H20200-225 ；MgSO4 · 7H20 175-190 ； FeSO4 · 7H2026-28 ；Na2-EDTA35-40 ； MnSO4 · 4H2020-25 ；ZnSO4 · 7H20 7-10 ；H3BO35-7 ；KI0. 5-1 ；Na2MO4 · 2H200. 2-0. 3 ；CuSO4 · 5H20 0. 02-0. 03 ； CoCl2 · 6H20 0. 02-0. 03 ； 肌醇88-100 ； 甘氨酸2-5 ；盐酸硫胺素 0. 3-0. 5 ； 盐酸吡哆素0. 3-0. 5 ；烟酸0. 3-0. 5 ；IBA1-2 ；NAA0.01-0.06 ； 蔴糖30000 ；琼脂8000; 其余为纯净水；ρΗ 5.8。 本专利技术所述的洋葱组织培养的方法，其特征在于步骤(2)所述的消毒采用下述方法在无菌条件下取洋葱球用75%以上的酒精摇晃浸泡30-60秒，再用质量百分比为 0. 1%的升汞溶液摇晃浸泡10-15分钟。步骤(2)所述的消毒还可以采用组织培养中的可适 用于对洋葱消毒的常规方法。本专利技术所述的花宝(Hyponex)是指花宝3号，花宝3号的主要成份比例氮、磷、钾 三要素含量分别为10 30 20 ;N，P，K分别指的是NO3硝态氮，PO3氧化磷，KO3氧化钾。 花宝3号是由美国花宝公司生产，原装进口产品，由上海信然生物技术有限公司销售，公司 地址上海市莘浜路35弄1号501室。—般离体器官培养主要通过愈伤组织形成及芽体诱导形成过程来完成主要的植 株构建，本专利技术方法利用洋葱的胚细胞形成通过形成胚性细胞来达到植株再生过程，该方 法具有成芽性好植株健壮。在继代生长过程，将间苯三酚作为前体物添加通过代谢过程生 成根皮苷，具有延缓组织老化的倾向和玻璃化的问题，其作用在于对细胞的代谢调节作用 防止植株老化。通过非连续性的添加激素和间苯三酚来达到满足新生组织连续传代，消除激素记 忆效应有利于降低弱苗产生率提高有效成苗率。同时这种途径有利于提高洋葱组培中的诱 导率和一般文献比较，该培养基较文献常用MS培养基具有更好的诱导率和传代性。是一种 新的洋葱组培育种的培养基和培养方法。与现有技术相比，本专利技术对洋葱品种进行组织培养时，采用区别的培养基，其中利 用花宝的加入来提高其增殖率；在扩繁过程中，使用含适当添加本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种洋葱组织培养的方法，其特征在于，其步骤如下：（１）将收获的新鲜洋葱球置于４－５℃环境中冷藏３－４周；（２）将冷藏后的洋葱球剥除外皮至直径为２－３ｃｍ，然后对它进行消毒处理，消毒后用无菌水冲洗干净；（３）在无菌条件下将消毒处理后的洋葱球切除至鳞茎盘为１－２ｍｍ厚、贴近鳞茎盘的鳞茎的长、宽各为４－５ｍｍ、高为０．５－１ｍｍ的外植体，再用刀片在鳞茎上表面做“井”字形划痕，然后将外植体接种到洋葱增殖培养基Ⅰ或Ⅱ中；（４）经过２０－３０天的培养，获得已长出若干个侧芽的无菌材料；然后按下述方法对无菌材料进行扩繁：将无菌材料置于消毒好的培养皿中，再将侧芽从鳞茎上切下或掰下并转到洋葱增殖培养基Ⅲ或Ⅳ中培养２０－３０天，获得已长出丛生芽的无菌材料，其后每２０－３０天就可扩繁一次；当扩繁过程中出现玻璃化现象时，则使用增殖培养基Ⅴ或Ⅵ进行培养；扩繁过程中，含多效唑的增殖培养基不连续使用，含间苯三酚的增殖培养基不连续使用；（５）将扩繁得到的洋葱单株壮苗转入生根培养基中进行培养，培养温度为２０－２５℃，培养至洋葱生根后，打开培养器皿的封口，再继续培养１－２天后将洋葱苗从培养器皿中取出，洗净根部附着的培养基，移入装有沙土的盆中，于自然光照条件下，白天２２－２５℃、夜间１１－１５℃的条件下培养２０－３０天，得成活洋葱苗；所述的洋葱增殖培养基Ⅰ是由以下重量配比的原料组成：单位：ｍｇ／ｌ，　花宝　３０００－４０００；　６－ＢＡ　４－７；ＮＡＡ　０．１－０．６；　蔗糖　３００００；琼脂　８０００；　其余为纯净水；ｐＨ为５．８；所述的洋葱增殖培养基Ⅲ除含有洋葱增殖培养基Ⅰ中所述的重量配比的全部原料外，还含有重量配比为０．２－０．５的多效唑；其ｐＨ为５．８；所述的洋葱增殖培养基Ⅴ除含有洋葱增殖培养基Ⅰ中所述的重量配比的全部原料外，还含有重量配比为０．２－０．５的间苯三酚；其ｐＨ为５．８；所述的洋葱增殖培养基Ⅱ是由以下重量配比的原料组成：单位：ｍｇ／ｌ，ＮＨ↓［４］ＮＯ↓［３］　１６００－１７００；　ＫＮＯ↓［３］　１８００－１９００；ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［３］　１７０－１８０；　ＣａＣｌ↓［２］.２Ｈ↓［２］Ｏ　４００－４５０；ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ　３５０－３８０；　ＦｅＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ　２６－２８；Ｎａ↓［２］－ＥＤＴＡ　３５－４０；　ＭｎＳＯ↓［４］.４Ｈ↓［２］Ｏ　２０－２５；ＺｎＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ　７－１０；　Ｈ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈振泰，杨海峰，潘美红，缪美华，薛萍，乔延军，孙桂乐，周翔，
申请(专利权)人：连云港市农业科学院，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]