应用家蚕生物反应器制备人ＤＮＡ聚合酶δ的方法技术

本发明专利技术涉用应用家蚕生物反应器制备人ＤＮＡ聚合酶δ的方法。具体是将人ＤＮＡ聚合酶δ的４个亚基分别构建到供体质粒上；在经过改造的大肠杆菌ＤＨ１０Ｂａｃ／ＢｍＮＰＶ中和家蚕ＢｍＮＰＶ杆状病毒ＤＮＡ中Ｔｎ７转座子上发生转座，筛选出带有正确亚基的克隆，随后在家蚕ＢｍＮ细胞中制备该４种亚基不同装配组合的重组病毒；感染宿主家蚕，在家蚕体内进行多亚基蛋白复合物的表达和装配；收集感染后的幼虫体液或整体匀浆，经分离纯化后获得目的产物。通过本发明专利技术可以高效、低成本、大规模地制备高比活、正确装配的ＤＮＡ聚合酶多亚基蛋白复合物；能够被广泛地应用于某些重要疾病、特别是癌症疾病研究领域涉及ＤＮＡ复制和损伤修复之基础研究。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
应用家蚕生物反应器制备人ＤＮＡ聚合酶δ的方法，包括：将组成人ＤＮＡ聚合酶δ的４个亚基ｐ１２５、ｐ６８、ｐ５０和ｐ１２的基因分别构建到杆状病毒供体质粒ｐＦａｓｔＢａｃ上，分别得到重组质粒ｐＦａｓｔＢａｃ－ｐ１２５、ｐＦａｓｔＢａｃ－ｐ６８、ｐＦａｓｔＢａｃ－ｐ５０和ｐＦａｓｔＢａｃ－ｐ１２，在经过改造的大肠杆菌ＤＨ１０Ｂａｃ／ＢｍＮＰＶ中和家蚕ＢｍＮＰＶ杆状病毒ＤＮＡ于　Ｔｎ７转座子上发生转座，通过蓝白斑筛选出带有正确亚基的克隆，随后在家蚕ＢｍＮ细胞中制备该４种亚基不同装配组合的重组病毒，用获得的重组病毒感染宿主昆虫家蚕，在宿主昆虫家蚕体内表达并包装成多亚基蛋白复合物的人ＤＮＡ聚合酶δ经分离纯化后获得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周亚竟，陈慧卿，姚勤，刘晓勇，李国辉，麦维军，陈克平，陈焰，李骁，王玉珏，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]