五味子抗肿瘤活性内生真菌的分离筛选方法技术

本发明专利技术公开了五味子内生真菌的分离筛选方法，属于微生物技术领域。该方法包括：五味子组织的准备、表面消毒与无菌检测、五味子组织内生真菌的分离培养、适用发酵培养基的配制、内生真菌培养及菌株筛选等步骤。本发明专利技术为实现由微生物发酵法取代从五味子植物组织中提取抗肿瘤活性物质提供了有效的菌种分离筛选方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种五味子内生真菌的分离筛选方法，其特征是包括以下步骤：（１）五味子组织的准备：采集五味子根、茎、叶、果实；（２）五味子组织的表面消毒与无菌检测：将步骤（１）五味子组织经表面消毒后，直接种植于ＰＤＡ培养基平皿上，置２６－２８℃恒温箱培养，从中选出表面无任何菌种生长的组织；（３）五味子组织内生真菌的分离培养：将步骤（２）的无菌组织在无菌条件下切割成小片移植于ＰＤＡ培养基上，置２６－２８℃恒温箱培养，至样品周围长出菌丝时，采用尖端菌丝挑取法，挑取形态不同的菌落，经纯化后转接到ＰＤＡ斜面培养基备用；（４）内生真菌液体发酵培养基的配制：其各组分与每升所含的质量为蛋白陈０－３ｇ、玉米浆１－１０ｍＬ、麦麸１５－４０ｇ（煮３０ｍｉｎ取汁）、葡萄糖５－３０ｇ、ＭｇＳＯ↓［４］　１－３ｇ、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］１－５ｇ；（５）内生真菌发酵培养：将步骤（４）液体发酵培养基分装在三角瓶中，用接种钩挑取少许经步骤（３）分离纯化的内生真菌菌丝于培养瓶中，置２６－２８℃下摇床，２００ｒ／ｍｉｎ，振荡培养４－５天，发酵液经５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取发酵上清液；（６）有效菌株筛选：取步骤（５）各上清液用乙酸乙酯萃取，萃取物减压浓缩后用于抗肿瘤活性筛选，ＭＴＴ法检测细胞抑制率；（７）菌种的保藏：将步骤（６）筛选出的高效抗肿瘤内生菌菌株进行保藏，备用。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭文娟，王翔，张慧春，闻婷婷，李洛，
申请(专利权)人：天津工业大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]