高效表达类胰岛素生长因子ＩＧＦ－１的乳腺特异性表达载体制造技术

本发明专利技术公开了高效表达类胰岛素生长因子ＩＧＦ－１的乳腺特异性表达载体，属于生物工程技术领域。ＩＧＦ－１的ｃＤＮＡ序列见ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１。将本发明专利技术构建的乳腺特异性表达载体ｐＩＮ在体外采用脂质体法转染到人乳腺癌细胞Ｂｃａｐ－３７，转染后提取细胞上清蛋白和细胞蛋白；采用ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ和放免方法检测细胞上清蛋白和细胞蛋白中ＩＧＦ－１含量。结果显示与未转染乳腺特异性表达载体ｐＩＮ的对照组相比，转染乳腺特异性表达载体ｐＩＮ组中，ＩＧＦ－１表达量显著提高。表明ｐＩＮ载体可已在乳腺细胞上成功表达ＩＧＦ－１，为下一步生产转ＩＧＦ－１基因奶山羊奠定坚实的基础。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种高效表达类胰岛素生长因子ＩＧＦ－１的乳腺特异性表达载体，其ｉｇｆ－１基因具有如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示的序列，其构建方法包括：１）萨能奶山羊类胰岛素生长因子基因ｉｇｆ－１的克隆参照ＮＣＢＩ上ｇｅｎｅｂａｎｋ登录号：Ｄ１１３７８的山羊ＩＧＦ－１ｍＲＮＡ全序列引物设计如下：上游引物：５’－ＡＣＡＧＧＴＡＣＣＡＴＧＧＧＡＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴ－３’下游引物：５’－ＣＧＣＡＡＧＣＴＴＣＴＡＣＡＴＴＣＴＧＴＡＧＴＴＣＴＴＧＴ－３’以萨能奶山羊肝脏组织提取的总ＲＮＡ为模板，经Ｍ－ＭＬＶ反转录酶合成ｃＤＮＡ第一链后进行ＰＣＲ扩增；反应条件为：９４℃预变性５ｍｉｎ；９４℃变性３０ｓ，５７℃复性３０...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨倩，林建，庾庆华，张强，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]