本发明专利技术公开了人ＵＴＰ１４ａ蛋白表达抑制剂在制备细胞增殖抑制剂中的应用。ｐ５３蛋白通过激活或抑制下游基因的表达，引起细胞周期停滞、ＤＮＡ的损伤后修复和细胞凋亡等。本发明专利技术发现人ＵＴＰ１４ａ蛋白的表达下调可引起ｐ５３蛋白水平的升高，即人ＵＴＰ１４ａ蛋白表达抑制剂可以促进细胞中ｐ５３蛋白水平升高，从而抑制细胞增殖。本发明专利技术有助于对于细胞增殖和凋亡的研究，对抗癌药物的开发具有深远影响。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及人UTP14a蛋白表达抑制剂在制备细胞增殖抑制剂中的应用。
技术介绍
核仁(nucleolus)是一个高度致密、动态的亚细胞结构。核仁的主要功能是为核 糖体生物发生提供场所，核糖体生物发生包括三个重要的步骤1)核糖体RNA转录；2) 核糖体RNA的加工；3)核糖体大、小亚基的组装。哺乳动物细胞中，47S的rRNA前 体在核仁由RNA polymerase I转录生成。47S的rRNA前体含有三个转录区以及四个转 录间隔区。三个转录区包括18S、5.8S、28S rRNA序列。四个转录间隔区包括5，外 部转录间隔区(5，external transcribe spacer, 5' ETS)，位于 I8S rRNA 序列的上游；两 个内部转录间隔区(internal transcribe spacer，ITS1，ITS2)，分别位于5.8S rRNA序列的 两侧；以及较短的3’外部转录间隔序列(3，external transcribe spacer, 3，ETS)位于 28S rRNA的下游。47S rRNA前体在核酸内切酶作用下经过剪切加工生成成熟的18S、 5.8S和28S rRNA。5S rRNA由RNA polymerase III转录，在核浆转录完成后被转运至核 仁。在真核生物中18S rRNA和34种核糖体小亚基蛋白组装成40S小亚基，28SrRNA、 5S rRNA、5.8S rRNA和49种核糖体大亚基蛋白组成60S大亚基。rRNA的加工过程包括rRNA的修饰与剪切。rRNA的修饰与剪切主要由小核仁 核糖核蛋白体颗粒(small nucleolar ribonucleoprotein particals, snoRNPs)来完成。snoRNPs 由小核仁RNA (small nucleolar RNA, snoRNA)和相关蛋白结合而成，通过其snoRNA与 核糖体RNA前体碱基配对介导核糖体RNA前体的修饰和剪切。在18S rRNA的剪切加工过程中U3 snoRNA起重要作用。U3 snoRNA在真核细 胞中普遍存在，生化与基因分析显示U3 snoRNA主要通过与核糖体RNA前体通过碱基 配对来介导核糖体RNA前体的剪切。U3 snoRNA和40余种蛋白组成核糖核蛋白体复合 物(U3snoRNPs，U3 snoRNA particle)发挥剪切加工作用。在酵母中U3 otoRNPs所含的 40余种蛋白包括四种与U3 snoRNA结合的核心蛋白fibrillarin，Nop58p, Nop56p, Snul3p(在哺乳动物中是15.5kDa蛋白)；六种与U3 snoRNA特异结合的蛋白Sofl， MpplO, Imp3, Imp4, Dhrl, Rrp9 ；五种核糖体蛋白 Rps4，Rps6, Rps7, Rpsl4 和 Rps28 ；还包括参与18S rRNA加工的蛋白Rrp5和一些与U3 snoRNA结合的蛋白。这些与 U3 snoRNA结合的蛋白命名为UTP (U three protein)。 目前在酵母中发现的有Utpl_17， 18，20-22。小亚基加工体(small subunit processome，SSU)是 U3 snoRNP 中的一组蛋 白，它们是与U3 snoRNA结合的核仁蛋白，参与18S rRNA加工。Bernstein等制定了鉴 定SSU组分的标准(1)定位于核仁；⑵与U3 snoRNA结合；(3)参与18S rRNA的 加工。在脊椎动物，参与5.8和28S rRNA前体的剪切生成过程的是U8 snoRNPs, U8 snoRNPs由U8 snoRNA与相关蛋白结合而成。核糖体生物发生是细胞的一个重要生命过程，与细胞生长和增殖等正常生命活动的维持密切相关，因此受到严密的调控。当核糖体生物发生发生异常时，会引起p53 的改变。在正常细胞中p53以低水平无活性形式存在，p53的稳定性与活性调控的主要机 制包括调控p53的亚细胞定位、p53的降解调控和p53的翻译后修饰。在大多数应激情况 下p53主要通过翻译后修饰快速活化并维持其稳定性。蛋白酶体-泛素系统是p53主要 的降解方式。Mdm2是p53的E3泛素连接酶，介导p53泛素依赖蛋白酶体依赖的降解。 Mdm2结合p53后，促进p53蛋白在26S的蛋白酶体中降解。Mdm2也是p53下游的靶基 因产物，p53反馈调节Mdm2的转录。Mdm2结合p53的N端转录活性区后，p53的转 录活性被阻断，Mdm2的表达水平也会随之减少。p53与Mdm2的这种相互作用形成了 自身反馈环来维持Mdm2和p53的正常水平。当核糖体RNA的转录和加工受到干扰时， 核糖体蛋白如RPL11，RPL23, RPL5, RPS7等与Mdm2特异结合，使Mdm2对p53的 泛素连接酶活性受到抑制，p53的活性和稳定性增加。这一通路又被称为RP-Mdm2-p53 信号途径。在这一通路中起中心作用的是p53蛋白。在应激反应中p53蛋白稳定性增加、水平增高并通过翻译后修饰及四聚化变成 能结合DNA的活性形式，聚集于细胞核。作为一种特异的转录因子p53在细胞核中激 活p2严“⑶115’ 16和其它一些生长停滞基因产物如GADD45 (growth arrest and DNA damage induction gene 45)的转录表达，p21和GADD45能够引起细胞周期停滞并刺激DNA修 复。如果DNA损伤无法修复，由p53诱导促凋亡相关基因表达使细胞发生程序性死亡。 因此p53通过激活或抑制下游基因的表达，引起细胞周期停滞、DNA的损伤后修复和/ 或细胞凋亡等。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供人UTP14a(hUTP14a)蛋白表达抑制剂在制备细胞增殖抑制 剂中的应用。本专利技术提供了人UTP14a蛋白表达抑制剂的如下应用(1)在制备细胞增殖抑制剂中的应用；(2)在制备促进细胞中p53蛋白表达的产品中的应用；所述p53蛋白如序列表的 序列3所示；所述人UTP14a蛋白的氨基酸序列如序列表的序列1所示。所述人UTP14a蛋白表达抑制剂可为序列表的序列5所示的siRNA、序列表的序 列6所示的siRNA和序列表的序列7所示的siRNA中的至少一种。所述细胞可为U20S细胞或HeLa细胞。本专利技术还保护一种细胞增殖抑制剂，为序列表的序列5所示的siRNA、序列表的 序列6所示的siRNA和序列表的序列7所示的siRNA中的至少一种。所述细胞可为U20S细胞或HeLa细胞。本专利技术还保护一种促进细胞中p53蛋白水平升高的产品，为序列表的序列5所示 的siRNA、序列表的序列6所示的siRNA和序列表的序列7所示的siRNA中的至少一种。所述细胞可为U20S细胞或HeLa细胞。本专利技术在MCF-7细胞中干扰hUTP14a后通过流式细胞计数对细胞周期进行了分 析，结果发现hUTP14a表达减少后S期细胞减少，而G2/M的细胞数无明显变化。该结果提示hUTP14a干扰后引起的p53增多抑制了细胞周期从Gl期向S期转变。小亚基加工体(SSU)参与rRNA前体在AO，Al，A2位点的剪切最后形成18S rRNA。在剪切加工过程中，U3 sno本文档来自技高网...
【技术保护点】
人ＵＴＰ１４ａ蛋白表达抑制剂在制备细胞增殖抑制剂中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杜晓娟，柯杨，胡乐林，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：11
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