本发明专利技术涉及一种抗炎六肽Ｌｙｓ?Ｖａｌ?Ｃｉｔ?Ｌｙｓ?Ｐｒｏ?Ｖａｌ，及这种抗炎六肽的制备和应用，本发明专利技术还包括本发明专利技术的多肽的制备方法，所述方法选自常规的固相合成方法、溶液中合成方法，基因重组方法或化学合成方法，本发明专利技术所述药物用途是治疗炎性免疫相关疾病的药物用途，其中所述炎性相关疾病是脓毒症、脓毒性休克、（类）风湿性关节炎、哮喘、急慢性肾小球性肾炎、系统性红斑狼疮等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药领域，特别是涉及一种能够抑制炎症因子分泌的六肽分子Lys Val Cit Lys Pro Val，本专利技术还涉及这种抗炎六肽的制备和应用。
技术介绍
自1986年核因子-κ B(nuclear factor-κ B, NF-κ B)被偶然发现以来，其重要性 正日益受到关注并成为目前最活跃的研究领域之一。典型的NF- κ B是由多肽链ρ50和ρ65 两亚基形成的异二聚体。当细胞处于静息状态时，NF-κ B主要与κΒ抑制蛋白(IkBS，，其 中起重要作用的是ΙκΒα，ΙκΒβ)结合形成三聚体，以无活性方式存在于细胞质中；当细 胞受到多种外界信号(如炎性刺激、致癌物、电离辐射、生长因子及其它应激原等)刺激进 而启动细胞第二信使系统时，IkBs在IkB激酶(I κ Ks :由I κ K α、ΙκΚβ、NIK、IKAP组 成的复合物)的作用下发生磷酸化并降解，NF-κ B失去I κ Bs的严格控制而被激活，并移位 进入细胞核内；其亚基形成环状结构与靶基因特定部位结合，启动400余种与炎症、细胞存 活、增殖、侵袭及血管生成密切相关的基因转录表达。已证实NF- κ B的活化不仅与肿瘤的 生长、增殖、存活、侵袭、转移、新生血管生成以及放、化疗耐受有关，而且也与多种炎症相关 性疾病的发生发展密切相关，如(类)风湿性关节炎、哮喘、慢性肾小球性肾炎、幽门螺杆菌 相关性胃炎、炎症性肠道疾病等慢性炎性疾病，脓毒症、脓毒性休克、急性肾小球性肾炎等 急性炎性疾病，Alzheimer' s病，动脉粥样硬化，系统性红斑自狼疮等身免疫性疾病和癌 症的发生和发展均于NF-κ B过度或持续活化密切相关。因此，NF-κ B被认为是极具潜力的 抗肿瘤、抗炎靶点。目前众多医药公司斥巨资研发具有治疗潜力的NF-K B抑制剂，部分已 进入I/II期临床实验。可见有关NF-κ B的研究态势正逐渐“从克隆向临床”(from clone to clinic)过渡。鉴于NF-κ B在上述疾病的发生和发展中的潜在作用，以NF-K B及其信号传导通 路中的相关蛋白为靶点，研发NF-K B相关疾病的治疗药物已成为本领域中的研究热点。目 前国外有关以NF- κ B为靶点的拮抗治疗策略主要包括以下几个方面(1)抗氧化治疗如 抗氧化剂——吡咯烷二硫氨基甲酸(Pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)非特异抑制 NF-K B的转录活性；(2)抑制IKK的形成及活性应用ΙΚΚα的反义核酸、表达IKKa显 性失活突变体以及应用干扰IKK复合物形成的干扰肽等抑制IKK的形成及活化；(3)减少 IkB的降解某些蛋白酶小体抑制剂如MG101、MG115、MG132、PS-341、Iactacystin以及近 来发现的印oxomicin等均可通过抑制I κ B的降解，达到拮抗NF- κ B活性的目的。(4)促 进I κ B的生成应用I κ Ba的腺病毒表达载体，使I κ Ba显型失活突变体过量表达，可明 显抑制NF- κ B的核移位及其后续效应；(5)抑制NF- κ B的合成设计Ρ50和Ρ65的反义核 酸和siRNA阻滞NF- κ B的合成；(6)传统非甾体类抗炎药物抑制NF- κ B的活化；(7)来源 于中药的姜黄素、黄酮类化合物和白藜芦醇等化合物非特异地抑制NF-κ B信号通路的活 化。上述以NF- κ B为靶点的治疗策略在体外和动物实验中已表现出不同程度的疗3效，部分治疗策略已进入临床试用阶段，且已通过United States Patent and Trademark Office和European Patent Office等注册并受专利保护。如第一个临床应用治疗复发或难 治的多发性骨髓瘤的蛋白酶体抑制剂——硼替佐米(bortezomib，商品名为万珂Velcade， 最初被称为PS-341)，主要对抗NF-k B路径。如美国医药公司Corgentech和AlgoRx于 2005年12月联合注册了商品名为Avrina的药物，对湿疹进行I、II期临床试验。该药物 为NF- κ B诱骗(Decoy)分子，被认为是高度选择性的NF- κ B抑制剂。但众所周知，NF- κ B 拮抗剂的应用必然要面对如下不可回避的问题①安全性由于NF-κ B遍布全身所有的细 胞，不加选择的抑制其活性会导致广泛的生理功能紊乱。如上述硼替佐米使用后可出现显 著的神经病变。解决该问题的理想选择有两个一是采用药物靶向传输系统，使其只在病灶 部位或病变细胞中起作用；二是局部用药，如上述Avrina药物对湿疹治疗时采用的是局部 涂抹用药方式。②穿膜性NF-κ B拮抗剂只有进入细胞内才能发挥抑制作用。解决方法如 下一是选择小分子拮抗剂，因其可自由穿过细胞膜；二是通过转染制剂如脂质体转染；三 是通过连接穿膜肽后，由其导入细胞内。③高效性对获得的阳性多肽或化合物，在提高其 药代动力学性质(如溶解度、疏水性、转运特性等)的基础上，通过改构、优化等策略提高其 与靶分子的亲和力或同时作用多个靶标发挥作用。目前有关NF-κ B拮抗剂的安全性(靶 向性)、穿膜性、高效性的研究正成为该领域的研究热点和难点。我们在国家自然科学基金项目的资助下，利用酵母双杂交技术，以NF-K B亚基 ρ65的DNA结合域为“诱饵”，筛选出系列ρ65相互作用多肽，后经Pull-down、表面等离子共 振分析、报告基因实验、离体细胞培养和在体炎症动物模型实验验证，成功获得系列NF-K B 亚基拮抗肽，其中5条分别见专利200510007479. 2,200510069451. 1。为了提高多肽的活性并降低其副作用，需要对现有的活性多肽进行结构改造或结 构优化。目前对多肽进行结构改造的方法可分为两大类①在不改变多肽本质基础上进行 的改造。包括将直链肽改造成环肽、定位突变或化学修饰(如聚乙二醇修饰)、结构拼接组 装、微囊包埋等设计策略。②把肽结构变换成非肽分子。我们通过不同的策略对自行研制 的上述NF- κ B亚基拮抗肽进行结构改造，意外发现NF- κ B亚基拮抗肽AspLysProVal序列 本身具有穿膜特性并表现出抗炎作用，而改构后的短肽Lys(D-Pr0)ValCit在保留其穿膜 特性的基础上，表现出的抗炎活性更强，见专利201010111921. 7。在此基础上，我们进一步 对该肽进行改构，发现改构后的六肽分子Lys Val Cit Lys Pro Val的抗炎作用更强，且仍 然保留其穿膜特性。实验结果表明，该六肽不仅能够抑制炎性细胞炎症因子的分泌，还可有 效拮抗酵母多糖A所致的小鼠足跖炎症反应。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供以Lys(D-Pr0)ValCit为母体的改构六肽，该改构六肽具有 穿膜作用且具有更强的抗炎活性。本专利技术的另一目的是提供此抗炎六肽的药物用途。本专利技术的六肽，氨基酸序列如下Lys Val Cit Lys Pro Val0本专利技术还包括本专利技术的多肽的制备方法，所述方法选自常规的固相合成方法、溶 液中合成方法，基因重组方法或化学合成方法。4本专利技术所述药物用途是治疗炎性免疫相关疾病的药物用途。其中所述炎性相关疾 病是脓毒症、脓毒性休克、(类)风湿性关节炎、哮喘、急慢性肾小球性肾炎、系本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梁华平，范霞，张醇，王希，杨雪，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：85
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