一种以ＳＯＸ２蛋白表达水平作为前列腺癌恶性程度判断的方法技术

本发明专利技术属于一种医学诊断用的方法，具体的说是一种通过检测前列腺癌组织中ＳＯＸ２蛋白的表达情况来判断前列腺癌恶性程度的方法，该方法是通过免疫检测技术实现的，属于临床免疫诊断方法。前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一，位于欧美国家男性肿瘤致死率第二位，仅次于肺癌。近几年，在我国的发病率呈上升趋势。通过实验研究发现，前列腺癌组织中ＳＯＸ２蛋白表达程度越高，其分化程度越低，恶性程度越高，由此ＳＯＸ２可以成为前列腺癌分化程度的标志蛋白，进而为前列癌的预后判断提供参考。本发明专利技术通过对病理组织的免疫组化反应，检测该组织中ＳＯＸ２分子的表达数量，根据免疫组化反应的结果来判断前列腺癌的分化程度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于一种医学诊断用的方法，具体的说是一种通过检测前列腺癌组织中 S0X2蛋白的表达情况来判断前列腺癌恶性程度的方法，该方法是通过免疫检测技术实现 的，属于临床免疫诊断方法，特别是运用免疫组化方法检测S0X2蛋白从而判断前列腺癌恶 性程度的方法。
技术介绍
前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一，位于欧美国家男性肿瘤致死率第二位，仅 次于肺癌。近几年，在我国的发病率呈上升趋势。前列腺癌的预后与发现早晚、病理类型、 患者年龄，及相应的治疗措施是否得当密切相关。癌细胞的分化程度与肿瘤的恶性程度和 病人的预后密切相关。病理报告上常用Gleason评分来评价前列腺癌细胞的分化程度。因 此，对前列腺癌的恶性程度的早期快速诊断可以对治疗及预后判断产生积极的作用。S0X2 (SRY-Related HMG-Box Gene 2)是SOX家族的一个成员，是干细胞的标志性 基因之一，存在干细胞的核中，是一种维持干细胞特性的重要的转录因子，在维持胚胎干细 胞及癌症干细胞的多能性及自我更新能力方面起到至关重要的作用。S0X2与癌症干细胞的 致癌能力密切相关。因此癌细胞中的S0X2极有可能对癌症的分化程度进行密切的调节，并 有可能成为肿瘤分化程度判断的标志蛋白。我们通过对127例前列腺癌组织芯片(包括病 理分级1-3级，Gleason评分2_10分)的免疫组化染色分析发现S0X2的表达水平随着病 理分级的增高以及Gleason评分的增高而表达水平显著增高，这表明S0X2可以成为前列腺 癌分化程度的标志蛋白，进而为前列癌的预后判断提供参考。即在前列腺癌组织中S0X2蛋 白表达程度越高，其分化程度越低，恶性程度越高。(见表1)表1. S0X2表达水平与前列腺癌病理分级的关系组别总例数例数P病理分级 !级 2级3级Gleason 评分 2-4 5-6 7-1024 45 5825 36 657 37 3 011 20 1312 17 14615205 12 25O 7244 26 本实验以S0X2阳性细胞数占组织细胞的百分比作为阴性及阳性结果的判断，即 < 10%为阴性(-)，而彡10%并< 30%为弱阳性(+)，彡30%并< 50%为中阳性(++)， 彡50%为强阳性(+++)。结果表明S0X2的表达水平随着病理分级的增高以及Gleason评分的增高而表达水平增高，X 2检验分析显示两者之间均存在显著相关性。
技术实现思路
针对上述情况，本专利技术通过免疫组化的方法检测病理组织中的S0X2蛋白，以此判 断前列腺癌的分化程度。具体的讲就是，通过对病理组织的免疫组化反应，检测该组织中 S0X2分子的表达数量，根据免疫组化反应的结果来判断前列腺癌的分化程度。其
技术实现思路
包括免疫组化反应和显微镜观察等步骤。本专利技术是通过以下技术方案实现的1.脱蜡和水化具体步骤如下①组织切片置于二甲苯I中浸泡10分钟，②组织切片置于二甲苯II浸泡10分钟，③组织切片置于无水乙醇中I浸泡10分钟，④组织切片置于无水乙醇II浸泡10分钟，⑤组织切片置于95%乙醇中浸泡10分钟，⑥组织切片置于80%乙醇中浸泡10分钟，⑦组织切片置于自来水中浸泡1分钟，⑧组织切片置于蒸馏水中浸泡5分钟。2.抗原修复，将IOmM的Citrate Buffer (pH 6.0)通过微波炉，加热10分钟，放入组织切片中低火加热10-15分钟，在室温下晾凉。3.用超纯水洗处理过的组织切片3次，每次五分钟。4.将3%双氧水溶液滴加在载玻片上，室温静置10分钟，甩去多余液体。5.用超纯水洗2次，各五分钟6.滴加封闭液(正常山羊血清，5% BSA溶液)，在室温下孵育一小时，甩去多余液 体。7.滴加一抗(1 100) 50 μ L，室温静置1小时。8. TBST缓冲液洗3次，每次5分钟。9.滴加二抗(1 100) 50 μ L，室温静置0. 5小时。10. TBST缓冲液洗3次，每次5分钟。11.滴加三抗(1 100) 50 μ L，室温静置0.5小时。12. TBST缓冲液洗4次，每次5分钟。13. DAB显色，在显微镜下掌握染色程度，在达到满意效果后放入清水中终止染色， 后用自来水冲洗10分钟。14.苏木精复染20秒，自来水冲洗10分钟。15.脱水、透明具体步骤如下①组织切片置于80%乙醇中浸泡30秒，②95%乙醇中浸泡3分钟，③无水乙醇中II浸泡5分钟，④无水乙醇I浸泡5分钟，⑤二甲苯II中浸泡5分钟，⑥二甲苯I浸泡5分钟，16.树脂封片、镜检。附图说明图1在恶性程度较低，分化程度高的前列腺癌细胞中检测结果显示S0X2低表达。图2在恶性程度较高，分化程度低的前列腺癌细胞中检测结果显示S0X2高表达。具体实施例方式下面结合附图与具体实施方式对本专利技术作进一步详细描述。实施例1样本某妇女淋巴结的组织切片。1.脱蜡和水化具体步骤如下①组织切片置于二甲苯I中浸泡10分钟，②组织切片置于二甲苯II浸泡10分钟，③组织切片置于无水乙醇中I浸泡10分钟，④组织切片置于无水乙醇II浸泡10分钟，⑤组织切片置于95%乙醇中浸泡10分钟，⑥组织切片置于80%乙醇中浸泡10分钟，⑦组织切片置于自来水中浸泡1分钟，⑧组织切片置于蒸馏水中浸泡5分钟。2.抗原修复，将IOmM的Citrate Buffer (pH 6. 0)通过微波炉，加热10分钟，放入 组织切片中低火加热10-15分钟，在室温下晾凉。3.用超纯水洗处理过的组织切片3次，每次五分钟。4.将3%双氧水溶液滴加在载玻片上，室温静置10分钟，甩去多余液体。5.用超纯水洗2次，各五分钟6.滴加封闭液(正常山羊血清，5% BSA溶液)，在室温下孵育一小时，甩去多余液 体。7.滴加一抗(1 100) 50 μ L，室温静置1小时。8. TBST缓冲液洗3次，每次5分钟。9.滴加二抗(1 100) 50 μ L，室温静置0. 5小时。10. TBST缓冲液洗3次，每次5分钟。11.滴加三抗(1 100) 50 μ L，室温静置0.5小时。12. TBST缓冲液洗4次，每次5分钟。13. DAB显色，在显微镜下掌握染色程度，在达到满意效果后放入清水中终止染色， 后用自来水冲洗10分钟。14.苏木精复染20秒，自来水冲洗10分钟。15脱水、透明具体步骤如下①组织切片置于80%乙醇中浸泡30秒，②95%乙醇中浸泡3分钟，③无水乙醇中II浸泡5分钟，④无水乙醇I浸泡5分钟，⑤二甲苯II中浸泡5分钟，⑥二甲苯I浸泡5分钟，16.树脂封片、镜检。镜检结果如图1所示。可见该组织切片中S0X2的表达程度低，有少量棕黄色颗粒，为S0X2检测弱阳性 ⑴结果，后经病理检测结果为低恶性、高分化前列腺癌，Gleason评分4分。实施例2样本某妇女前列肿瘤浸润转移的淋巴结组织切片。1.脱蜡和水化具体步骤如下①组织切片置于二甲苯I中浸泡10分钟，②组织切片置于二甲苯II浸泡10分钟，③组织切片置于无水乙醇中I浸泡10分钟，④组织切片置于无水乙醇II浸泡10分钟，⑤组织切片置于95%乙醇中浸泡10分钟，⑥组织切片置于80%乙醇中浸泡10分钟，⑦组织切片置于自来水中浸泡1分钟，⑧组织切片置于蒸馏水中浸泡5分钟。2.抗原修复，将IOmM的Citrate Buff本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以ＳＯＸ２蛋白表达水平作为前列腺癌恶性程度判断的方法，其特征在于，处理病病理组织切片，抗原修复，对病理组织的进行免疫组化反应，将组织切片脱水、透明化处理，并树脂封片，镜检，由此检测该组织中ＳＯＸ２分子的表达数量，根据免疫组化反应的结果来判断前列腺癌的分化程度。

【技术特征摘要】
一种以SOX2蛋白表达水平作为前列腺癌恶性程度判断的方法，其特征在于，处理病病理组织切片，抗原修复，对病理组织的进行免疫组化反应，将组织切片脱水、透明化处理，并树脂封片，镜检，由此检测该组织中SOX2分子的表达数量，根据免疫组化反应的结果来判断前列腺癌的分化程度。2.根据权利要求1所述的一种以S0X2蛋白表达水平作为前列腺癌恶性程度判断的方 法，其特征在于，免疫组化反应所滴加的抗体滴加一抗(1 100) 50 μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：李娜，向荣，贾现培，李雪霏，牟雯君，张舒，吕丹，刘艳华，刘寅，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]