【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物血液复杂基质中烟草特有N-亚硝胺(TSNAs)的分析方法。 该方法利用同位素标记物作为内标物，采用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)对动 物血液中痕量TSNAs及其代谢产物进行检测，揭示TSNAs在动物体内的代谢规律。
技术介绍
吸烟与健康问题日益引起人们极大关注，烟叶和卷烟烟气中的一些有害成分， 特别是具有强致癌性的烟草特有N-亚硝胺(TSNAs),更加引起各国科学家们的极大 关注[刘万峰，王应元.烟草中烟草特有亚硝胺的研究进展.中国烟草科学，2002，(2) 11-15]。研究TSNAs在动物体内的代谢产物和代谢过程，开展TSNAs的代谢历 程研究，可为TSNAs的毒性抑制研究提供依据，为缓解吸烟与健康矛盾提供技术支持。烟草中主要存在四种形式的N-亚硝胺挥发性N-亚硝胺、非挥发性N-亚硝 胺、烟草特有N-亚硝胺和亚硝化的氨基酸。卷烟烟气中已发现的亚硝胺达35种，而烟草 特有N-亚硝胺的研究最早开始于20世纪60年代初期且最受关注，这是因为部分TSNAs 具有致癌活性，它们对吸烟者和被动吸烟者的健康可能有不利影响。目前已经鉴定出8 ...
【技术保护点】
一种动物血液样品中痕量烟草特有Ｎ－亚硝胺的分析方法，其特征在于：将动物血液样品放入加有乙二胺四乙酸二钾（ＥＤＴＡ－ｋ２）饱和水溶液的离心管内，１００００ｒｐｍ离心，取上层血浆加入ＮＮＮ－ｄ４、ＮＮＫ－ｄ４、ＮＡＴ－ｄ４、ＮＡＢ－ｄ４、ＮＮＡＬ－ｄ３混合内标溶液，静置３０ｍｉｎ沉淀蛋白后，取上层液过滤，采用ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析检测样品中烟草特有Ｎ－亚硝胺的含量。
【技术特征摘要】
1.一种动物血液样品中痕量烟草特有N-亚硝胺的分析方法，其特征在于将动物血 液样品放入加有乙二胺四乙酸二钾(EDTA_k2)饱和水溶液的离心管内，IOOOOrpm离 心，取上层血浆加入NNN_d4、NNK_d4、NAT_d4、NAB_d4、NNAL_d3混合内标溶 液，静置30min沉淀蛋白后，取上层液过滤，采用LC-MS/MS分析检测样品中烟草特有 N-亚硝胺的含量。2.根据权利要求1所述的动物血液样品中痕量烟草特有N-亚硝胺的分析方法，其特 征在于该方法具体包括以下步骤动物血液样品收集；混合内标溶液配制以同位素标记物NNN_d4、NNK-d4、NAT_d4、NAB_d4、 NNAL-d3作为内标物，配制浓度均为50 ng/mL的混合内标溶液；混合标准溶液配制分别称取NNN，NNK, NAT、NAB、NNAL,配制具有浓度梯 度的NNN，NNK, NAT、NAB、NNAL系列混合标准溶液，并各加入Iml浓度为50ng/ ml的混合内标溶液；标准曲线绘制将TSNAs系列(NNN，NNK, NAT、NAB、NNAL)标准溶液按 由低到高浓度顺序进行HPLC-MS/MS分析，并以各TSNAs与其内标的峰面积比(Y) 对其相应的浓度(X，ng/mL)进行线性回归分析，得到各TSNAs的工作曲线回归方程 和相关系数；样品前处理将动物血液样品放入加有0.1 mL乙二胺四乙酸二钾(EDTA_k2)饱和 水溶液的1.5 mL离心管内，IOOOOrpm离心，取上层血浆0.5 mL加入0.5 mL浓度为50ng/ ml 的混合内标(NNN_d4、NNK_d4、NAT_d4、NAB_d4、NNAL_d3)溶液，静置 30 min沉淀蛋白后，取上层液过滤，进行HPLC-MS/MS分析；数据处理和分析，对动物血液中痕量TSNAs及其代谢产物进行检测，揭示TSNAs在 动物体内的代谢规律。3.根据权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢斌斌，王兆宇，王昇，张建勋，刘惠民，张晓兵，宗永立，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：41
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