本发明专利技术为展青霉素检测前处理中的固相萃取净化柱，主要应用于展青霉素残留的检测，属于固相萃取柱领域。本发明专利技术以适量的ｐｖｐｐ（交联聚乙烯吡咯烷酮）和Ｆｌｏｒｉｓｉｌ混合均匀后装于１５ｍｌ的固相萃取柱空管中。山楂和苹果的制品提取液直接通过固相萃取柱，收集滤液，氮气吹干后定溶过滤即可进行分析。本柱杂质去除效果好，回收率高，可有效替代２２８ＡｆｌａＰａｔ多功能柱在展青霉素检测中的作用。作用与２２８ ＡｆｌａＰａｔ多功能柱基本相当，而成本仅相当于２２８ ＡｆｌａＰａｔ多功能柱的十分之一。而且本柱制作简便，操作简单，重复性好，易于批量生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种固相萃取柱的制备方法，特别是一种以pvpp和Florisil混合基 质填充的针对展青霉素净化的固相萃取柱(SPE)。
技术介绍
展青霉素(patulin)是一种有毒的真菌代谢产物，在自然界分布广泛，主要污染 水果及其制品，尤其是苹果、山楂、梨、番茄、苹果汁、山楂片等。毒理学试验表明，展青霉素 具有生育、致癌和免疫等毒理作用，同时它也是一种神经毒素。在大多数欧美国家展青霉 素的限量标准为O 50μ g/kg ；WHO推荐展青霉霉素在苹果汁中的最高限量标准为50μ g/ kg;我国相应的标准规定苹果、山楂半成品限量标准为100 μ g/kg，果汁、果酱、果酒、罐头、 果脯的限量标准为50 μ g/kg。展青霉素对人、畜危害较大，因此受到了世界各国的广泛关 注。展青霉素的检测属于痕量分析，样品前处理至关重要，其直接关系到结果的准确 性和可靠性。目前展青霉素的检测方法主要包括薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法 和色谱联用技术等。样品提取溶剂主要是乙酸乙酯，乙腈或乙腈和水的混合液。提取液的 纯化主要采用无水碳酸钠、C18固相萃取柱、亲水亲脂平衡柱、串联PVPP-C18柱、Mycos印多功 能柱等净化方法。薄层色谱法，样品处理步骤繁琐，需双向展开，甲苯在体内不易代谢，对人 体危害巨大，且色谱干扰严重，重现性差，回收率低，已不适于当前要求。目前已有行业标准 NY/T1650-2008采用液相色谱法测定展青霉素含量。主要采用Mycokpe 228 AflaPat多功 能柱对样品进行净化，该法简单、快速、灵敏、准确。但该多功能柱价格昂贵且依赖于进口。 而Cw固相萃取柱、亲水亲脂平衡柱、串联PVPP-C18柱等都操作相对复杂，而且对样品也有局 限性，效果却难以达到Mycoki/ 228 AflaPat多功能柱的效果。气相色谱法和色谱联用技 术由于其突出灵敏度已受到越来越多的重视，但对杂质同样灵敏，杂质的干扰更严重，从而 影响液相测定结果。所以对样品的前处理净化效果要求更高，一种好的净化柱将直接决定 测定方法的可行性。因此很有必要制备出功能与MycoS印 228 AflaPat多功能柱功能相当 的或更好的固相萃取柱，以替代Mycoki/228 AflaPat多功能柱。目前固相萃取柱的填充基 质品种繁多，各自的作用机理又各不相同，针对的样品也千差万别。Mycokr/ 228 AflaPat 多功能柱的填料为多种基质的混合体，作用模式主要为分子筛和专属性吸附。所以替代柱 的填充基质的筛选和互相的搭配及各自的搭配比例成为替代柱制作成功的关键。
技术实现思路
本专利技术为了克服上述存在的问题，从大量的填充基质中筛选出了 pvpp和 Florisil混合的填充基质，制备出了功能与!^^必印 228 AflaPat多功能柱相当的展青霉 素固相萃取柱。主要针对的净化样品有苹果及其制品和山楂汁等。一种pvpp和Florisil混合基质的固相萃取柱，其特征在于所述固相萃取柱的填 料基质为pvpp和Florisil，填装量可根据具体样品适当加减。两者的比例取值范围+① 0。固相萃取柱基质需混合均勻。pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱的制备方法，包括如下步骤(1)固 相萃取柱空管的底部放入一聚乙烯筛板，(2)填入一定量的pvpp和Florisil混合基质，干 法装柱，( 再在填料上部放一聚乙烯筛板，(4)将填料适当压紧，筛板不应歪斜，SPE柱制 作完成。所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱使用前应用甲醇、水或乙腈 预处理。所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱预处理后应以氮气吹干。所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱与MycoSepe 228 AflaPat多 功能柱相比，具有以下的几大优点(1)成本大大降低，只相当于Mycokp 228 AflaPat多 功能柱价格的十分之一左右。(2)填充基质减少为2种，更有便于柱的制作和柱稳定性的控 制。⑶制作简单，即可实验室自制，也适于大生产。⑷样品的提取，溶剂的选择与Mycc^epe 228AfIaPat多功能柱一至。所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱与Mycokpe 228 AflaPat多 功能柱相比，具有以下的几点不足(1)柱使用前需要进行预洗。(2)洗后需对柱子进行氮 气吹干。附图说明附图为自制展青霉素固相萃取柱和Mycokpe 228 AflaPat多功能柱实验液相 图谱对比展青霉素峰保留时间19. anin，l至6分别为1.山楂汁自制柱图谱，2.山楂 汁Mycokps 228 Af IaPat多功能柱图谱，3.苹果汁自制柱图谱，4.苹果汁Mycokpe 228 AflaPat多功能柱图谱，5苹果酱自制柱图谱，6.苹果酱Mycokp 228 AflaPat多功能柱图■i並 曰O具体实施例方式实施例一本专利技术的一个优选实施例的具体步骤为(1)固相萃取柱空管及筛板的选择选择标准化生产的15ml空管及聚乙烯筛板，底部的筛板为薄型，填料上部筛板为 加厚型筛板。(2)填料的比例及填量的选择pvpp和Florisil填量的比例为2比1，基质的填充总量为1. 5g。(3)固相萃取柱的填装柱子的填装包括如下步骤a.固相萃取柱空管的底部放入一聚乙烯筛板，b.填入 一定量的pvpp和Florisil混合基质，干法装柱，c.再在填料上部放一聚乙烯筛板，d.将填 料适当压紧，筛板不应歪斜，SPE柱制作完成。(4)预洗液及洗液量和预洗速度的选择以乙腈比水为G 1)的比例的混合溶液20ml对柱子进行使用前预洗，预洗速度 以每秒1 2滴的速度进行预洗。(5)以缓和的氮气将柱中的洗液吹干。实施例二 展青霉素固相萃取柱高效液相色谱法测定苹果制品及山楂汁中展青霉 素的含量(1)按实施例一相同的方法制备好展青霉素固相萃取柱。(2)在不含展青霉素的空白样品(苹果汁、苹果酱、山楂汁)中，分别按25ug/kg、 50ug/kg、250ug/kg三个水平添加展青霉素标准品。(3)样品处理苹果酱取苹果酱样品5g加入5ml水，加入果胶酶溶液(活性不低于1500IU/g) 于40°C下放置2小时，或室温下放置16小时。再加入20ml乙腈后于涡旋振荡器上振荡2 分钟，取上清液直接过固相萃取柱，收集过滤液5ml。40°C氮气吹干，加入200ul流动相溶 解，过微孔滤膜，等待进液相。苹果汁或山楂汁取5ml果汁，加入20ml乙腈后于涡旋振荡器上振荡2分钟，取上 清液直接过固相萃取柱，收集过滤也5ml。40°C氮气吹干，加入200ul流动相溶解，过微孔滤 膜，等待进液相。MycoSepi 228 AflaPat多功能柱的样品处理方法相同。(4)液相条件检测波长276nm，流动相为乙腈比水(5 95)，流速lml/min，柱温30°C，进样 20ul。实验结果如下表1，液相图谱对比见附图。表1.采用自制展青霉素固相萃取净化柱和MyCOs￥ 228 AflaPat多功能柱实验结 果对比本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种以ｐｖｐｐ和Ｆｌｏｒｉｓｉｌ混合基质填充的固相萃取柱，其特点在于所述的填充基质ｐｖｐｐ和Ｆｌｏｒｉｓ以及两者的混合比例。
【技术特征摘要】
1.一种以pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱，其特点在于所述的填充基质 pvpp和Floris以及两者的混合比例。2.权利要求1所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱，所述的填充基质 pvpp 禾口 Florisilο3.权利要求1所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱，所述pvpp和 Florisil混合比例范围+⑴ O。4.权利要求1所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱，所述pvpp和 Florisil基质填料应混合均勻填柱。5.权利要求1-4任一所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱的制备方 法，包括如下步骤(1)固相萃取柱空管的底部放入一聚乙烯筛板，( 填入一定量的PV...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨美华，周玉春，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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