石首鱼类精子激发大黄鱼雌核发育二倍体的诱导方法，涉及一种鱼类的养殖，尤其是采用异源精子诱导大黄鱼雌核发育二倍体的方法。其步骤为：采用人工受精，将杂交组合中同科不同种父本的精子与大黄鱼的卵混合；将精卵混合后，用海水激活；将受精卵放入压力容器，施压；达到靶压力３８～５５ＭＰａ时停止施压；持续１～３０ｍｉｎ后降压，完成压力休克的诱导。无须对异源精子进行射线失活处理，简单可行，便于现场操作，安全可靠；对经验的要求不高，便于掌握；远缘杂交产生单倍体，单倍体的致死效应剔除了没有成功进行二倍体诱导的个体，确保了存活个体均为雌核发育二倍体。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种鱼类的养殖，尤其是采用异源精子诱导大黄鱼雌核发育二倍体的方法。
技术介绍
以大黄鱼(Pseudosciaena crocea Richardon)为母本，浅色黄姑鱼(Nibea Chui，Trewavas)或鮸状黄姑鱼(Nibea miichthioides Chu Lo&Wu)或眼斑拟石首鱼(Sciaenopsocellatus Linnaeus)等同科不同种鱼类为父本的属间远缘杂交试验中，受精率较高，但孵化率几乎为零，死亡胚胎具十分明显的单倍体症状，虽有极少部分受精卵可发育至孵化，但孵化仔鱼均为畸形个体，无存活至开口摄食的个体。杂交胚胎典型的单倍体症状表现为细胞分裂不全、卵裂不规则、细胞边界模糊、躯体短小、围心腔扩大、肌节模糊、色素减少、血液循环不全、脊椎弯曲等。目前有关成功诱导大黄鱼雌核发育二倍体的方法还没有见正式报道。有关大黄鱼三倍体的成功诱导仅见于1)王军等的大黄鱼三倍体诱导的初步研究(王军，王德祥，尤颖哲，等，大黄鱼三倍体诱导的初步研究，厦门大学学报自然科学版，2001，40(4)927-930)；2)林琪等的静水压休克诱导大黄鱼三倍体(林琪，吴建绍，曾志南，静水压休克诱导大黄鱼三倍体，海洋科学，2001，25(9)6-9)。其它鱼类雌核发育二倍体的诱导方法一般如下取同种鱼类的鲜活精子，用精子稀释液稀释，置于紫外线或X射线或γ射线下照射，一定时间后与新鲜的成熟卵子进行人工授精，而后采用静水压等方法诱导二倍体。由于精子受射线照射失活，只具备激活卵子发育的能力而不参与受精卵的遗传调控，因此受精卵是雌核发育单倍体。该类方法的不足在于1)精子需要失活处理，不便于现场操作；2)精子失活操作要接触紫外线或X射线或γ射线下照射，具有一定的危险性；3)精子失活操作的条件需要长期的试验摸索，不便于掌握；4)由于精子失活操作不可能十分彻底，因此雌核发育子代中必然混有正常二倍体或三倍体，给实验结果的分析带来困难。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种结果纯正，无须精子失活处理，受精率、诱导率和成活率高，便于现场操作、安全可靠、简单易行的石首鱼类精子激发诱导大黄鱼雌核发育二倍体的方法。为此本专利技术采用异源精子进行诱导的方法。本专利技术的步骤为1.采用人工受精，将杂交组合中同科不同种父本的精子与大黄鱼的卵混合；2.将精卵混合后，用海水激活；3.将受精卵放入压力容器，施压；4.达到靶压力38～55MPa时停止施压；5.持续1～30min后降压，完成压力休克的诱导。在步骤2)中，激活精卵所用海水的水温最好为18～25℃。在步骤3)中，受精后施压时间是受精后1～10min后将受精卵放入压力容器，施压；受精后最佳的施压时间是受精后2.5min。在步骤4)中，最好达到靶压力40～45MPa时停止施压，持续10～15min后降压，完成压力休克的诱导。本专利技术的优点在于1)无须对异源精子进行射线失活处理，简单可行，便于现场操作，安全可靠；2)对经验的要求不高，便于掌握；3)远缘杂交产生单倍体，单倍体的致死效应剔除了没有成功进行二倍体诱导的个体，确保了存活个体均为雌核发育二倍体。具体实施例方式实施例1将浅色黄姑鱼的精子与大黄鱼的卵混合，采用干法受精，水温为21～24℃，受精后2.5min将受精卵放入压力容器施压，当靶压力达到42～44MPa时停止施压，持续10～15min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥80％，孵化率≥50％，胚胎期二倍体诱导率≥88％。实施例2将眼斑拟石首鱼的精子与大黄鱼的卵混合，采用干法受精，水温为20～23℃，受精后1min将受精卵放入压力容器施压，当靶压力达到40～42MPa时停止施压，持续2～2.5min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥82％，孵化率≥84.8％，胚胎期二倍体诱导率≥93.75％。实施例3与实施例1相似，其不同在于激活所用海水的水温为18～20℃，受精后10min将受精卵放入压力容器施压，靶压力达到38～40MPa时停止施压，持续1～4min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥80％，孵化率≥81％，胚胎期二倍体诱导率≥75％。实施例4与实施例2相似，其不同在于激活所用海水的水温为23～25℃，受精后8min将受精卵放入压力容器施压，靶压力达到50～55MPa时停止施压，持续25～30min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥78％，孵化率≥45％，胚胎期二倍体诱导率≥98％。实施例5与实施例1相似，其不同在于激活所用海水的水温为20～22℃，受精后4min将受精卵放入压力容器施压，靶压力达到45～50MPa时停止施压，持续15～20min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥81.1％，孵化率≥65％，胚胎期二倍体诱导率≥98％。实施例6与实施例2相似，其不同在于激活所用海水的水温为21～23℃，受精后6min将受精卵放入压力容器施压，靶压力达到40～45MPa时停止施压，持续5～10min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥78.8％，孵化率≥77％，胚胎期二倍体诱导率≥75％。权利要求1.，其特征在于其步骤为1)采用人工受精，将杂交组合中同科不同种父本的精子与大黄鱼的卵混合；2)将精卵混合后，用海水激活3)将受精卵放入压力容器，施压；4)达到靶压力38～55MPa时停止施压；5)持续1～30min后降压，完成压力休克的诱导。2.如权利要求1所述的，其特征在于在步骤2)中，激活受精卵所用海水水温为18～25℃。3.如权利要求1所述的，其特征在于在步骤3)中，受精后施压时间是受精后1～10min后将受精卵放入压力容器，施压。4.如权利要求3所述的，其特征在于在步骤3)中，受精后施压时间是受精后2.5min。5.如权利要求1所述的，其特征在于在步骤4)中，达到靶压力40～45MPa时停止施压。6.如权利要求1所述的，其特征在于在步骤5)中，持续10～15min后降压，完成压力休克的诱导。全文摘要，涉及一种鱼类的养殖，尤其是采用异源精子诱导大黄鱼雌核发育二倍体的方法。其步骤为采用人工受精，将杂交组合中同科不同种父本的精子与大黄鱼的卵混合；将精卵混合后，用海水激活；将受精卵放入压力容器，施压；达到靶压力38～55MPa时停止施压；持续1～30min后降压，完成压力休克的诱导。无须对异源精子进行射线失活处理，简单可行，便于现场操作，安全可靠；对经验的要求不高，便于掌握；远缘杂交产生单倍体，单倍体的致死效应剔除了没有成功进行二倍体诱导的个体，确保了存活个体均为雌核发育二倍体。文档编号A61D19/02GK1586430SQ200410060148公开日2005年3月2日 申请日期2004年6月28日 优先权日2004年6月28日专利技术者王军, 王德祥, 苏永全, 王世锋, 丁少雄 申请人:厦门大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
石首鱼类精子激发大黄鱼雌核发育二倍体的诱导方法，其特征在于其步骤为：１）采用人工受精，将杂交组合中同科不同种父本的精子与大黄鱼的卵混合；２）将精卵混合后，用海水激活；３）将受精卵放入压力容器，施压；４）达到靶 压力３８～５５ＭＰａ时停止施压；５）持续１～３０ｍｉｎ后降压，完成压力休克的诱导。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王军，王德祥，苏永全，王世锋，丁少雄，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：92[中国|厦门]
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