【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测Hl和H3亚型流感病毒的核苷酸序列和试剂盒，尤指快速的基于 LNA和MGB修饰的短探针单重和双重荧光RT-PCR检测核苷酸序列和试剂盒，不仅适用于不 同动物组织样本中Hl和H3亚型流感病毒的准确检测，还可适用于不同动物活体样本(主 要为拭子样品)H1和H3亚型流感病毒的检测，可用于动物Hl和H3亚型流感病毒的筛查， 出入境检疫等，属于检验检疫领域。
技术介绍
自1934年首次分离出甲型流感病毒以来，由Hl或H3亚型的流感病毒已引起多次 世界性的人和动物的大流行以及大流行间期的小流行。Hl和H3亚型流感病毒感染宿主范 围广，主要感染宿主包括人，禽，猪、马以及其他多种动物。而且其中一些毒株具有在多种动 物间传播的能力，例如引起人类历史上多起大流感流感的病原均可在人、猪之间传播。从 1989年和1990年发生于我国的马流感疫情中分离出的H3N8亚型的马流感毒株(A/马/吉 林/1/89)，该毒株的6个基因片段为禽源片段。2009年全球大流行的甲型Him流感病毒 是一个新型流感变异株，目前研究已经证明该毒株可自然感染猪、犬猫等哺乳动物。目前采用TaqM...
【技术保护点】
一组检测Ｈ１和Ｈ３亚型流感病毒的核苷酸序列，其核苷酸序列如序列表ＳＥＱＩＤ ＮＯ：１至ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６，其中序列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１和ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２分别为检测Ｈ１亚型流感病毒ＨＡ基因的正义引物和反义引物，序列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３为检测Ｈ１亚型流感病毒ＨＡ基因的ＬＮＡ修饰的荧光探针，序列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４和ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５分别为检测Ｈ３亚型流感病毒ＨＡ基因的正义引物和反义引物，序列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６为检测Ｈ３亚型流感病毒ＨＡ基因的荧光探针。
【技术特征摘要】
一组检测H1和H3亚型流感病毒的核苷酸序列，其核苷酸序列如序列表SEQID NO1至SEQ ID NO6，其中序列SEQ ID NO1和SEQ ID NO2分别为检测H1亚型流感病毒HA基因的正义引物和反义引物，序列SEQ ID NO3为检测H1亚型流感病毒HA基因的LNA修饰的荧光探针，序列SEQ ID NO4和SEQ ID NO5分别为检测H3亚型流感病毒HA基因的正义引物和反义引物，序列SEQ ID NO6为检测H3亚型流感病毒HA基因的荧光探针。2.根据权利要求1所述的检测Hl和H3亚型流感病毒的核苷酸序列，其特征在于所 述探针序列SEQ ID NO 3的5，端标记报告荧光基团HEX，3，端标记淬灭荧光基团TAMRA， 第5、7、9、11位的碱基用LNA进行修饰。3.根据权利要求1所述的检测Hl和H3亚型流感病毒的核苷酸序列，其特征在于所 述探针序列SEQ ID NO 6的5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记MGB基团。4.一种检测Hl和H3亚型流感病毒的试剂盒，由以下组分组成1)裂解液2)Hl亚型单重荧光RT-PCR反应液，包括PCR缓冲液、RT缓冲液、MgCL2、dNTP、Hl正义 引物、Hl反义引物和Hl荧光探针3)H3亚型单重荧光RT-PCR反应液，包括RT缓冲液、MgCL2,dNTP、H3正义引物、H3反 义引物和H3荧光探针4)Hl和H3双重荧光RT-PCR反应液，包括RT缓冲液、MgCL2、dNTP、Hl正义引物、Hl反 义引物、Hl荧光探针，H3正义引物、H3反义引物、H3荧光探针5)RT-PCR酶颗粒6)Taq DNA聚合酶7)DEPC水8)阴性对照流感病毒阴性组织样品，用0.01mol/L pH7. 2PBS缓冲盐水制成20%悬 液，70°C作用1小时；9)阳性对照为体外转录的非感染性RNA片段，其对应的DNA序列为序列表SEQ...
【专利技术属性】
技术研发人员：张鹤晓，高志强，乔彩霞，蒲静，谷强，张伟，刘环，张利峰，汪琳，柏亚铎，张向东，
申请(专利权)人：中华人民共和国北京出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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