一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法技术

一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法，它涉及一种单克隆抗体的制备方法。本发明专利技术解决了现有紫杉醇微生物发酵的菌株的紫杉醇产量仍然较低，且发酵液中杂质含量多，难以分离提取的问题。方法：一、紫杉醇人工抗原的合成与鉴定；二、利用合成的紫杉醇免疫原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其效价高且特异性强的小鼠脾细胞与ＳＰ２／０细胞进行融合，培养并筛选出细胞株；三、将细胞株注入小鼠腹腔，收获腹水，得高浓度的单克隆抗体即完成。本发明专利技术抗紫杉醇单克隆抗体的产量高达１∶１２８００，发酵液中杂质含量少，分离提取简单，为从内生真菌发酵液中迅速、高效地分离、提取和纯化紫杉醇，为早日实现工业化生产奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种单克隆抗体的制备方法。
技术介绍
恶性肿瘤严重地威胁着人类的健康，而且癌症是目前人类疾病中仅次于心脑血管 疾患的第二大死因。紫杉醇是从红豆杉属植物中提取出来的具有多种抗肿瘤疗效的二萜生物碱类药 物；由于红豆杉(又名紫杉)是珍稀树种，生长速度缓慢，并且其生物学特性对生态环境要 求较高，天然更新能力差，所以种群数量极为有限，属濒危保护植物，资源十分有限，因此国 内外学者都在积极地研究开发紫杉醇的新药源。微生物发酵生产是降低成本、大量获取紫杉醇的最理想方法。1993年美国蒙塔那 州立大学化学家Andrea Stierle和植物病理学家Gary Strobel在蒙塔那西北部国家冰川 公园的短叶红豆杉中分离到一株内生真菌Taxomyces andreanae，在Stierle等的工作一 经发表，美国细胞克隆公司就出价100万美元支持蒙塔那州立大学的这项研究。但是目前 可用于紫杉醇微生物发酵的菌株的紫杉醇产量仍然较低，且发酵液中杂质含量多，难以分 离提取，致使无法满足市场的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有紫杉醇微生物发酵的菌株的紫杉醇产量仍然较低， 且发酵液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法，其特征在于抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法按以下步骤实现：一、紫杉醇人工抗原的合成与鉴定；二、利用合成的紫杉醇免疫原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其效价高且特异性强的小鼠脾细胞与ＳＰ２／０细胞进行细胞融合，培养并筛选出具有分泌特异性抗体的细胞株；三、将筛选的细胞株注入小鼠腹腔，收获腹水，获得高浓度的单克隆抗体，即完成抗紫杉醇单克隆抗体的制备；　　其中步骤二中免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠：取体重为１０～１２ｇ的１２周龄雌性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠６只进行免疫；首次免疫采用Ｔａｘｏｌ－ＢＳＡ与等量福氏完全佐剂混合，注射器互推法乳化完全后，进行背部皮下多点注射，剂量为每只８０μｇ；３周后进行...

【技术特征摘要】
一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法，其特征在于抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法按以下步骤实现一、紫杉醇人工抗原的合成与鉴定；二、利用合成的紫杉醇免疫原免疫Balb/c小鼠，取其效价高且特异性强的小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合，培养并筛选出具有分泌特异性抗体的细胞株；三、将筛选的细胞株注入小鼠腹腔，收获腹水，获得高浓度的单克隆抗体，即完成抗紫杉醇单克隆抗体的制备；其中步骤二中免疫Balb/c小鼠取体重为10～12g的12周龄雌性Balb/c小鼠6只进行免疫；首次免疫采用Taxol BSA与等量福氏完全佐剂混合，注射器互推法乳化完全后，进行背部皮下多点注射，剂量为每只80μg；3周后进行第二次免疫，以后每隔二周加强免疫一次，换用Taxol BSA与福氏不完全佐剂等量混合，进行背部皮下多点注射；第三次免疫后，小鼠断尾取血，用间接ELISA法检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：周东坡，赵凯，平文祥，金涛，孙宇石，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]