野生茄子耐盐基因ＳｔＰ５ＣＳ及其抗除草剂植物表达载体制造技术

本发明专利技术属于分子生物学领域，公开了野生茄子耐盐基因ＳｔＰ５ＣＳ及其抗除草剂植物表达载体。本发明专利技术所提供的野生茄子耐盐基因ＳｔＰ５ＣＳ序列为ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ．１。其抗除草剂植物表达载体由所述的野生茄子耐盐基因ＳｔＰ５ＣＳ插入到中间载体ｐＣＡＭＢＩＡ３３０１－Ｔ８００的ＢａｍＨ?Ｉ和Ｓａｌ?Ｉ位点得到的。本发明专利技术ＳｔＰ５ＣＳ基因将该植物表达载体用于农作物遗传转化，ＳｔＰ５ＣＳ基因在ＣａＭＶ３５Ｓ启动子的启动下超量表达，大量合成脯氨酸生物合成关键酶，植物体内积累脯氨酸，提高植物耐盐性。同时，ｂａｒ基因的表达产物膦丝菌素Ｎ－乙酰转移酶，能使植物抵抗以Ｌ－Ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎ（膦丝菌素，ＰＰＴ）为活性成分的除草剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，涉及野生茄子耐盐基因StP5CS及其抗除草剂植物 表达载体。
技术介绍
随着全球水资源危机和土壤盐渍化问题的加剧，盐胁迫已经成为影响作物生长， 导致作物减产的重要因素。我国耕地中有将近1/10是盐渍化土壤，主要分布在西北、华北 等粮食主产区，盐渍化能造成植物细胞内水分和离子平衡的破坏，引起氧化胁迫，破坏蛋白 质的功能，导致植物在形态、生理、生化和分子方面的严重变化，影响作物的生长和产量。转 基因技术是解决盐渍化问题的有效途径之一，将耐盐相关基因克隆并转化作物，使其在作 物中过量表达，将会大幅提高作物的耐盐能力。Δ ‘ -口比 口各琳一5-幾酸合成醇(Δ ‘ -pyrroline-5-carboxylate synthetase, P5CS)是高等植物体内脯氨酸合成途径的一个关键酶，该酶具有谷氨酸激 酶(Y -glutamylkinase, y -GK)禾口 Y _ 谷氨酉先磷酸还原酶(Y -glutamyl phosphate reductase, Y -GPR)双重活性，催化脯氨酸生物合成的前两步谷氨酸磷酸化及谷氨 酸-Y-半酸还原(参考文献Hu C本文档来自技高网...

【技术保护点】
野生茄子耐盐基因ＳｔＰ５ＣＳ，其特征在于该基因的序列为ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１。

【技术特征摘要】
野生茄子耐盐基因StP5CS，其特征在于该基因的序列为SEQ ID NO.1。2.野生茄子耐盐基因StP5CS抗除草剂植物表达载体，其特征在于由权利要求1所述的 野生茄子耐盐基因StP5CS与植物表达载体构成。3.根据权利要求2所述的野生茄子耐盐基因StP5CS抗除草剂植物表达载体，其特征在 于所述的植物表达载体是通过分别用EcoR I/Hind III双酶切植物表达载体pCAMBIA3301 和全序列合成的T800 DNA片段，回收10986bp的pCAMBIA3301大片段和849bp的T800 DNA 小片段，连接所述两个片段得到的中间载体PCAMBIA3301-T800。4.权利要求3所述的野生茄子耐盐基因StP5CS抗除草剂植物表达载体的构建方法，其 特征在于包括如下步骤1)野生茄子耐盐基因StP5CS的克隆以提取的野生茄子幼嫩叶片为材料，提取总RNA，反转录为cDNA，设计引物扩增StP5CS 基因，以反转录的cDNA为模板，进行聚合酶链式反应PCR，产物连接到pMD19-T载体，转化 TOPlO感受态细胞，进行序列测定；2)中间载体pCAMBIA3301-T800的改造全序列合成含有CaMV35S启...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱月林，盖钧镒，张功臣，杨立飞，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]