【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种实时荧光PCR检测方法，具体涉及猪细小病毒与猪伪狂犬病毒二 重STOR Green I实时荧光PCR检测方法。
技术介绍
猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)均可感染母猪，引起母猪流产、胚胎死 亡、胎儿畸形、胎儿木乃伊化及不孕等，同时还可引起仔猪的皮炎和腹泻。也可感染仔猪，导 致仔猪死亡或者形成僵猪，给养猪业造成了巨大的经济损失。临床上通过观察临床症状和 病理变化不能区分和确定某种疾病的感染，而且时有混合感染，给临床检测和控制这两种 疾病造成了很大困难。荧光定量PCR检测技术是近几年才研制成功的，它融汇了 PCR技术的核酸高效扩 增，探针技术的高特异性，光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点，直接探测PCR过程 中荧光信号的变化以获得定量的结果。根据荧光能量传递技术(Fluorescene resonance energy transferFRET)，探针一般采用双标记，5 ‘端用荧光报告基团标记，3 ‘端用荧光淬 灭基团标记，当两基团离的比较近时，检测不到荧光，距离较远时，则能检测到荧光。目前用 的荧光探针有Taqman探针、分子信标、双杂交探针等，另外STOR Green I是一种能与双链 DNA特异结合的一种染料，也可以用来定量。荧光定量PCR仪完全封闭操作，仪器直接读数， 结果判断更客观真实，定量范围宽(可包括0-108个拷贝/ μ 1)，PCR产物可以用熔点且无 需样品梯度稀释等特点。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对猪细小病毒和猪伪狂犬病毒在临床上通过观察 临床症状和病理变化不能区分和确定某种疾病的感染，而且...
【技术保护点】
猪细小病毒与猪伪狂犬病毒二重ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ实时荧光ＰＣＲ检测引物，其特征在于：猪细小病毒引物的序列如下：上游引物Ｐ１：５′－ＴＡＡ ＴＴＴ ＡＡＴ ＣＡＡ ＣＡＧ ＧＣＡ ＣＣＡ Ｃ－３′；下游引物Ｐ２：５′－ＴＴＣ ＴＧＴ ＡＴＣ ＡＡＧ ＴＴＣ ＴＴＴ ＡＴＣ ＣＣ－３′；猪伪狂犬病毒的引物序列如下：上游引物Ｐ３：５′－ＣＧＴ ＧＧＡ ＡＣＧ ＡＧＣ ＣＣＴ ＴＣＡ Ｇ－３′；下游引物Ｐ４：５′－ＡＧＡ ＧＣＧ ＧＧＴ ＴＧＧ ＣＧＡ ＴＧＴ－３′。
【技术特征摘要】
1.猪细小病毒与猪伪狂犬病毒二重STOR Green I实时荧光PCR检测引物，其特征在于猪细小病毒引物的序列如下上游引物 Pl 5' -TAA TTT AAT CAA CAG GCA CCA C-3'； 下游引物 P2 5' -TTC TGT ATC AAG TTC TTT ATC CC-3'； 猪伪狂犬病毒的引物序列如下 上游引物 P3 5' -CGT GGA ACG AGC CCT TCA G-3'； 下游引...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏战勇，陈红英，胡慧，李明凤，崔保安，郭显坡，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：41
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