一种恒ｐＨ补料策略发酵生产银耳多糖的方法技术

一种恒ｐＨ补料策略发酵生产银耳多糖的方法，属于生物发酵工程技术领域。本发明专利技术用银耳酵母状分生孢子作为菌种，接种于发酵罐中，装液量为３．５Ｌ，搅拌转速为２００ｒｐｍ，流加１０％氢氧化钠和５％硼酸，控制ｐＨ在６．０；在碳源葡萄糖消耗完毕时（８４ｈ），利用间歇流加的方式向发酵罐中补加２０％甘油，培养至１２０ｈ后结束发酵，沉淀多糖。本发明专利技术的优点是：通过控制发酵环境的ｐＨ，并补加不同的碳源，既补充了营养物质，又变迁了代谢途径，使得菌体能够在适宜的环境下生长，促进了目的代谢产物的合成。发酵结束后，多糖产量达到４．４ｇ／Ｌ，工艺简单、环境污染小、操作方便、多糖的产量高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种恒PH补料策略发酵生产银耳多糖的方法，具体涉及高等真菌发 酵生产多糖的一种方法，属于生物发酵工程

技术介绍
银耳的主要药用成份是多糖，主要包括酸性多糖、中性杂多糖、酸性低聚糖、胞壁 多糖等。银耳多糖具有强心、延缓衰老、抗血栓、降血脂、降血糖、抗肝炎、抗突变、抗肿瘤、提 高免疫力、抗辐射等功效。银耳多糖在医药、美容、保健食品等领域具有广泛的应用。银耳多 糖可以从银耳子实体分离获得，也可以通过分生孢子深层发酵法生产。由于发酵法成本低、 多糖纯度高，深层发酵法正逐步取代组织提取法。目前对分生孢子发酵法生产银耳多糖的 研究主要集中于发酵条件的优化，如培养基的优化，反应器的设计优化以及发酵参数优化。 本实验室早前已对PH值的控制方式对银耳多糖产量的影响进行了深入研究。本专利技术在此 基础上进行补料分批发酵调控，即根据菌株生长和起始培养基的特点，在分批发酵的某阶 段适当补加其他不同于起始培养基的碳源，并同时控制PH，使得菌种保持一定的菌体生长 密度，使其代谢流不断迁移，促进产物多糖的生成，补料分批发酵是介于分批发酵与连续发 酵之间，兼有两者的优点，又克服了两者的缺点，因此具有很好的发展前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，使菌种保持 一定的菌体生长密度，又促使代谢流迁移，有利于产物多糖的生成。本专利技术的技术方案(1)菌种Tremella fuciformis ACCC50546购于中国农业微生物菌种保藏管理中 心。(2)培养基以g/L计保藏培养基(PDA培养基)马铃薯200，葡萄糖20，琼脂15。种子培养基葡萄糖20，蛋白胨2，酵母粉2，MgSO4 · 7H20 0. 5，磷酸二氢钾0. 46，磷酸氢二钾1。发酵培养基葡葡萄糖20，蛋白胨2，酵母粉2，MgSO4 ·7H20 0.5,磷酸二氢钾0. 46， 磷酸氢二钾1。(3)制备工艺菌种保藏所用菌种保藏在保藏培养基斜面上，4°C保存，两月转接一次。种子培养从保藏培养基上转入种子培养基需活化两次，每次培养3天。控制pH补料发酵的过程将活化好的种子以3% 5%的接种量接入到发酵罐中 (上海保兴KLF2000)，发酵罐装液量为3. 0-3. 5L，发酵温度为，搅拌转速为200rpm，流 加10%氢氧化钠和5%硼酸，控制pH在5. 5-6. 5 ；在碳源葡萄糖消耗完毕时(84h)，利用间 歇流加的方式向发酵罐中补加20%甘油，培养至120h后结束发酵，沉淀多糖。本专利技术的有益效果通过控制发酵过程的PH值并及时补加碳源，使得发酵过程能 够得以保持在最佳环境下，有利于菌体的生长，且有利于代谢流的迁移，所以最终多糖产量 可以达到4. 4g/L，工艺简单、环境污染小、操作方便、多糖的产量高。具体实施例方式对照实施例本专利技术所用的菌种为iTremella fuciformisACCC5(^46，购于中国农 业微生物菌种保藏管理中心，先转PDA斜面培养7天，然后分离出酵母状分生孢子进行 摇瓶发酵3天，温度，转速200r/min，最后在5L发酵罐中进行发酵5天，发酵条件为 PH值自然，搅拌转速200r/min，通气速率2.0vvm。发酵培养基为(g/L):葡萄糖20，蛋白胨 2，酵母粉2，MgSO4 · 7H20 0. 5，磷酸二氢钾0. 46，磷酸氢二钾1。每隔12小时取样一次，发 酵过程中不补加甘油，银耳多糖产量为1.6g/L。实施例1 从PDA培养基上挑取菌种，在种子培养基中活化两代后，以3%的接种量 接入5L的发酵罐中，装液量为3L，搅拌转速为200rpm，在下培养，流加10%氢氧化钠 和5%硼酸，控制pH在5. 5 ；当葡萄糖消耗完毕时(84h)，利用间歇流加的方式向发酵罐中 补加20%甘油，培养至120h后结束发酵，银耳多糖产量为3. 4g/L。实施例2 从PDA培养基上挑取菌种，在种子培养基中活化两代后，以3%的接种量 接入5L的发酵罐中，装液量为3L，搅拌转速为200rpm，在下培养，流加10%氢氧化钠 和5%硼酸，控制pH在6.0;当葡萄糖消耗完毕时(84h)，利用间歇流加的方式向发酵罐中 补加20%甘油，培养至120h后结束发酵，银耳多糖产量为3. 7g/L。实施例3 从PDA培养基上挑取菌种，在种子培养基中活化两代后，以5%的接种量 接入5L的发酵罐中，装液量为3. 5L，搅拌转速为200rpm，在下培养，流加10%氢氧化 钠和5%硼酸，控制pH在6.0;当葡萄糖消耗完毕时(84h)，利用间歇流加的方式向发酵罐 中补加20%甘油，培养至120h后结束发酵，银耳多糖产量为4. 4g/L。实施例4 从PDA培养基上挑取菌种，在种子培养基中活化两代后，以5%的接种量 接入5L的发酵罐中，装液量为3. 5L，搅拌转速为200rpm，在下培养，流加10%氢氧化 钠和5%硼酸，控制pH在6.5 ；当葡萄糖消耗完毕时(84h)，利用间歇流加的方式向发酵罐 中补加20%甘油，培养至120h后结束发酵，银耳多糖产量为4. Og/L。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种恒ｐＨ补料策略发酵生产银耳多糖的方法，其特征在于：以Ｔｒｅｍｅｌｌａ　ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓＡＣＣＣ５０５４６（购于中国农业微生物菌种保藏管理中心）为出发菌株，先转ＰＤＡ斜面培养基２８℃培养７天，然后分离出酵母状分生孢子进行摇瓶发酵３天，温度２８℃，转速２００ｒ／ｍｉｎ，再以５％的接种量接种于５Ｌ发酵罐中，发酵罐装液量为３．５Ｌ，发酵温度为２８℃，搅拌转速为２００ｒｐｍ，流加１０％氢氧化钠和５％硼酸，控制ｐＨ在６．０；在碳源葡萄糖消耗完毕时（８４ｈ），利用间歇流加的方式向发酵罐中补加２０％甘油，培养至１２０ｈ后结束发酵，沉淀多糖。

【技术特征摘要】
1. 一种恒PH补料策略发酵生产银耳多糖的方法，其特征在于以Tremella fucif0rmisACCC5(^46(购于中国农业微生物菌种保藏管理中心)为出发菌株，先转PDA斜 面培养基培养7天，然后分离出酵母状分生孢子进行摇瓶发酵3天，温度^°C，转速 200r/min，...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱虎，张帅帅，
申请(专利权)人：中国石油大学华东，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]