本发明专利技术披露了一种十字花科作物抗病品种的鉴定方法，包括：找出十字花科黑腐病菌８００４菌株基因组中的无毒基因；用所述８００４菌株基因组中的无毒基因构建系列的鉴别菌株；将至少带有所述无毒基因的农杆菌悬液注渗到十字花科应试寄主叶片脉间，并检测应试寄主的过敏反应。本发明专利技术不仅能够快速地鉴定出十字花科作物抗病品种，而且能提供十字花科作物抗病基因的相关信息，为快速分离、克隆抗病基因奠定了基础，这无疑对十字花科作物抗病育种以及提高十字花科类蔬菜的产量和品质具有显著的不可估量的意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及作物抗病品种的鉴定方法，尤其涉及十字花科作物抗病品种的鉴定方法。
技术介绍
十字花科蔬菜黑腐病的病原菌为十字花科黑腐病菌0(CC， Xanthomonascampestris pv. campestris)，也称野油菜黄单胞菌野油菜致病变种。十字花 科蔬菜黑腐病主要发生在大白菜、萝卜、菜心、芥菜、绿菜花、白菜花、苤蓝及油菜等十字花 科蔬菜作物上，近几年来发病有逐渐加重的趋势，降低了该类蔬菜的产量和品质，造成很大 的经济损失。种植作物的抗病品种是对付作物病害的有效措施之一，而鉴定作物抗病品种 资源则是抗病育种的基础。生物性病原最主要的是真菌，其次是病毒、细菌、线虫、类菌原体、放线菌以及寄生 性种子植物等。这些病原生物多数为寄生性微生物，常统称为病原物；其中真菌和细菌性病 原又称为病菌，被病原物寄生的植物称为寄主植物，简称寄主。病原菌群对寄主植物有致病性分化现象是指，同种病原物内的不同群体对不同分 类单元的寄主植物的致病性不同。病原物的无毒基因是指病原物遗传因子，其编码的产物激发病原物与植物特异性 相互作用。无毒基因是决定对寄主植物特异性不亲和的基因，农杆菌在植物体内瞬间表达 无毒基因，可引起依赖于寄主抗病基因的过敏反应。寄主抗病基因是经典遗传学基因对基 因(gene-for-gene)假说中所指的与病原物无毒基因相对应的存在于植物特定品种中且 在植物生长的整个周期或其中某个阶段为组成型表达的植物抗病品种所特有的一类基因。十字花科黑腐病菌群对寄主植物有明显的致病性分化现象，其主要原因之一就是 病菌不同菌株无毒基因的种类或组成的差异，以及对应的寄主抗病基因的变化。以往，鉴定作物抗病品种的方法是这样的从寄主植物的破口处接种上病原物，对 该该寄主植物经过一段时间进行观察，如果未产生相应的病害，则说明该寄主植物为抗病 品种，反之，则说明该寄主植物为非抗病品种。这种方法的缺点是其需要花费的时间较长， 已经不适应日益发展的农业现代化生产和建设的需要。参考文献[ 1 ] Keen NT. Gene-for-gene complementarity in plant-pathogen interactions. Annu RevGenet, 1990, 24 :447-463.[2]Bai J, Choi S-H, Ponciano G, Leung H, and Leach JE. Xanthomonas oryzae pv.oryzaeavirulence genes contribute differently and specifically to pathogen aggressiveness. MolPlant-Microbe Interact. ,2000,13 :1322-1329.[3]ffhite FF. Prospects for understanding avirulence gene function. Curr· Opin. Plant Biol，2000，3 :291-298.[4]Heesemann, J. Algermissen, B. and Laufs, R. Genetically manipulatedvirulence of Yersiniaenterocolitica. Infect. Immun,1984,46 :105-110.[5]Dangle JL.The enigmatic avirulence genes of phytopathogenic bacteria. Curr TopMicrobiol Immunol,1994,192 :99-118.[6]Vivian A and Gibbon MJ. Avirulence genes in plant-pathogenic bacteria signals orweapons. Microbiology, 1997,143 :693-704.[7] Cornells GR, Van Gijsegem F. Assembly and function of type III secretory systems. Annu. Rev. Microbiol, 2000, 54 :735-774.[8]Fenselau S, Balbo I, and Bonas U. Determinants of pathogenicity in Xanthomonascampestris pv. vesicatoria are related to proteins involved in secretion in bacterialpathogens of animals. Mol Plant-Microbe Interact,1992,5 390-396.[9]Kim MG, Geng X, Lee SY, Mackev D. The Pseudomonas syringae type III effectorAvrRpml induces significant defenses by activating the Arabidopsis nucleotide-bindingleucine-rich repeat protein RPS2. Plant J,2009,57(4) :645-653.
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供，能够 快速地鉴定出十字花科作物抗病品种。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了， 包括找出十字花科黑腐病菌8004菌株基因组中的无毒基因；用所述8004菌株基因组中的无毒基因构建系列的鉴别菌株；将至少带有所述无毒基因的农杆菌悬液注渗到十字花科应试寄主叶片脉间，并检 测应试寄主的过敏反应。优选地，若在应试寄主上检测到过敏反应，则表明该应试寄主对无毒基因发生了识别作 用，提示该寄主具有针对该无毒基因的抗病基因。优选地，找出十字花科黑腐病菌8004菌株基因组中的无毒基因，具体包括在十字花科黑腐病菌8004菌株基因组中搜索已注释的无毒基因，并验证的新的 无毒基因的编码区。优选地，用8004菌株基因组中的无毒基因构建鉴别菌株，具体包括分别扩增所有找出的无毒基因全长序列作为候选基因，并将候选基因克隆于表达 双元载体PBI121中，构建含有所述无毒基因的表达载体；通过农杆菌注渗法分别将含有所述无毒基因的表达载体导入根癌农杆菌EHA105 菌株中，构建系列的鉴别菌株。优选地，将至少带有所述无毒基因的农杆菌悬液注渗到十字花科应试寄主叶片脉 间，具体包括分别将鉴别菌株在根癌农杆菌培养基YEB中，于培养对小时，离心收集菌体， 再用无菌水稀释成0D_ = 1. O的菌体悬液；用无菌的去掉针头的注射器，将菌体悬液约10微升，从十字花科寄主的叶背注渗 入叶脉间，形成一个可见的浸润斑；将接种后的十字花科寄主置于28。C及80%湿度的环境 中，交替进行连续光照16小时及连续黑暗8小时，共观察48小时。优选地，检测应试寄主的过敏反应，具体包括在十字花科寄主上以十字花科黑腐病菌野生型kc 8004作阳性对照，以含有 PBI121的EHA105菌株作阴性对照，观察若十字花科寄主上产生含无毒基因表达载体的鉴本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种十字花科作物抗病品种的鉴定方法，包括：找出十字花科黑腐病菌８００４菌株基因组中的无毒基因；用所述８００４菌株基因组中的所述无毒基因构建系列的鉴别菌株；将至少带有所述无毒基因的农杆菌悬液注渗到十字花科应试寄主叶片脉间，并检测所述应试寄主的过敏反应。
【技术特征摘要】
1.一种十字花科作物抗病品种的鉴定方法，包括找出十字花科黑腐病菌8004菌株基因组中的无毒基因；用所述8004菌株基因组中的所述无毒基因构建系列的鉴别菌株；将至少带有所述无毒基因的农杆菌悬液注渗到十字花科应试寄主叶片脉间，并检测所 述应试寄主的过敏反应。2.按照权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，若在所述应试寄主上检测到所述过敏反应，则表明所述应试寄主对所述无毒基因发生 了识别作用，提示所述寄主具有针对该无毒基因的抗病基因。3.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述找出十字花科黑腐病菌8004菌 株基因组中的无毒基因，具体包括在所述十字花科黑腐病菌8004菌株基因组中搜索已注释的无毒基因，并验证的新的 无毒基因的编码区。4.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于，用所述8004菌株基因组中的所述无 毒基因构建鉴别菌株，具体包括分别扩增所有找出的所述无毒基因全长序列作为候选基因，并将所述候选基因克隆于 表达双元载体PBI121中，构建含有所述无毒基因的表达载体；通过农杆菌注渗法...
【专利技术属性】
技术研发人员：何勇强，姜伯乐，唐纪良，岑卫健，姜伟，刘娇，黄俊锭，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：45
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。