通过植物组织培养生产福建道地金线莲的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过组织培养生产福建道地金线莲的方法，它包括植物体的选择及无菌处理、丛生芽诱导培养和大规模培养三大环节，其技术的关键在于诱导培养和大规模培养两个阶段采用了两种不同的培养基，诱导培养基为：ＭＳ培养基＋蔗糖１０－５０ｇ／Ｌ＋琼脂６－８ｇ／Ｌ＋活性炭２．０－３．０ｇ／Ｌ＋萘乙酸０．１－３．０ｍｇ／Ｌ＋６－苄氨基腺嘌呤０．１－５．０ｍｇ／Ｌ，ｐＨ值为５．０－７．０；大规模培养的培养基为：改良ＭＳ培养基＋硝酸钙６００ｍｇ／Ｌ＋香蕉泥３０－５０ｇ／Ｌ＋蔗糖２０－４０ｇ／Ｌ＋琼脂６－８ｇ／Ｌ＋活性炭２．０－３．０ｇ／Ｌ＋萘乙酸１．０－２．０ｍｇ／Ｌ＋６－苄氨基腺嘌呤２．０－３．０ｍｇ／Ｌ，ｐＨ值为５．０－７．０；植物组织培养能保持植物的优良性状，该方法比较容易操作，生产成本低，适合工厂化育苗，产量高，品质好，不污染环境，可以实现批量生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
，具体是一种通过植物组织培养生产，组织培 养生产福建道地金线莲的方法。
技术介绍
福建道地金线莲(Fujian daodi ShorthairyAntenoron)是兰科，开唇兰属植物， 是一种濒危珍惜的药用全草，是我国传统的珍贵药材。其性平味甘，具有清热、凉血、祛风利 湿、强心利尿、固肾平肝以及降血压等功效，主治咯血、支气管炎、肾炎、膀胱炎、糖尿病、血 尿、风湿性关节炎、小儿急惊风、毒蛇咬伤等。被称为“药中之王”。由于福建道地金线莲的 显著的药用功效及保健功能已为世人公认，其商品价格多年来一直不菲。福建道地金线莲(Fujian daodi ShorthairyAntenoronO)是一种前景可喜的中药 免疫增强剂，并具有抗肿瘤、降血糖、抗衰老、抗氧化、抗诱变等作用，受到国内外学者的高 度重视。由于金线莲属植物的种子不具胚乳，无发芽能力，只有在真菌共生下，才促进种子 萌发生长，发芽率很低，而传统的分株扦插等无性繁殖方式的成活率很低、生长速度很慢、 繁殖率低、加之其对生长条件要求严格、自然条件恶化、野生资源锐减、人为肆意采挖，现已 濒临灭绝，致使药源紧缺，国内外市场供不应求。目前国内外学者开展了对金线莲的初步研究，而通过本地选优的福建道地金线莲 的培养主要集中在组培诱导、基本培养基条件的筛选和理化因子的考查等方面。还没有找 到一个有效地培养技术用以解决福建道地金线莲诱导和增殖中存在的疑点和难点，从而影 响了福建道地金线莲的深入研究应用。天然的野生金线莲已作为濒临灭绝的植物物种受到保护，严禁采摘。为此研究福 建道地金线莲的人工培养技术，实现产业化显得十分重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种保持植物体本身优良药效， 繁殖速度快，增殖倍数高的的。本专利技术的目的是这样实现的一种通过组织培养生产福建道地金线莲的方法，它 包括如下步骤1. 1植物体的选择及无菌处理选择6-8月份生长的野生福建道地金线莲植物体，除去根和叶进行清洗和无菌处 理，将茎段剪成0. 5-1. 5CM带茎节的福建道地金线莲小段组织；1.2丛生芽诱导培养将经过无菌处理后的福建道地金线莲小段组织在诱导培养基中进行组织诱导培 养丛生芽，培养周期10-60天，培养温度10-35°C，光照培养时间0-24小时/天，光照强 度100 20001uX Ix ；所述的诱导培养基为MS培养基+蔗糖10_50g/L+琼脂6_8g/L+活性炭 2. 0-3. Og/L+ 萘乙酸 0. 1-3. Omg/L+6-苄氨基腺嘌呤 0. 1-5. Omg/L, PH 值为 5. 0-7. 0 ；1.3大规模培养将诱导出的丛生芽在大规模培养基中进行大规模培养，培养周期10_60天，培养 温度10-35°C，光照培养时间0-24小时/天，光照强度1000 20001ux ；所述的大规模 培养基为改良MS培养基+硝酸钙600mg/L+香蕉泥30_50g/L+蔗糖10_50g/L/L+琼脂 6-8g/L+ 活性炭 0. 1-5. Og/L+ 萘乙酸 0. 1-3. Omg/L+6-苄氨基腺嘌呤 0. 1-5. Omg/L, PH 值为 5. 0-7. O0作为本专利技术通过组织培养生产福建道地金线莲的方法更优化的技术方案，对培养 基的配方比例和培养条件进行优化选择。所述的丛生芽诱导培养培养周期20_50天，培养温度20-30°C，光照培养时间 0-24小时/天，光照强度1500 20001uX ；所述的诱导培养基为MS培养基+蔗糖20_40g/ L/L+ 琼脂 6-8g/L+ 活性炭 2. 0-3. Og/L+ 萘乙酸 1. 0-2. Omg/L+6-苄氨基腺嘌呤 2. 0-3. Omg/ L，PH 值为 5. 5-6. 5 ；所述的大规模培养培养周期20_50天，培养温度20-30°C，光照培养时间8_16 小时/天，光照强度1500 20001UX ；所述的大规模培养基为改良MS培养基+硝酸钙 600mg/L+ 香蕉泥 30-50g/L+ 蔗糖 20_40g/L+ 琼脂 6_8g/L+ 活性炭 2. 0-3. 0g/L+ 萘乙酸 1. 0-2. Omg/L+6-苄氨基腺嘌呤 2. 0-3. 0mg/L, PH 值为 5. 5-6. 5。植物体的无菌处理是本专利技术的重要技术环节，无菌处理的方法包括如下步骤A、将选取的福建道地金线莲植株，用自来水冲洗2-3小时，用毛刷清洗干净，除去 根和叶，再用蒸馏水冲洗，置超净工作台内。B、将除去了根和叶的茎段植物体用70-80%的酒精浸泡20-40秒进行表面灭菌， 再用无菌水清洗干净C、将经过酒精灭菌的茎段植物体用0. 3-0. 8%次氯酸钠溶液浸泡消毒3-6分钟， 用无菌水冲洗4-5次，再转入0. 15%升汞溶液中灭菌8分钟，倒去灭菌液，用事先准备好的 无菌水冲洗4-5次，再用滤纸吸干无菌水；D、无菌条件下将次氯酸钠消毒的茎段剪成0. 5-1. 5CM带茎节的小段。本专利技术的优点在于通过植物组织培养，保持植物体的优良性状，保持植物优良的 药物疗效，该方法易操作，生产成本低，不污染环境，可以实现工厂化育苗。选用配方合理的 诱导培养基，诱导出的丛生芽比例达到98%以上，通过两段培养的方式再生植株产量大幅 度提高，和增殖倍数达到8倍以上。通过本专利技术方法生产福建道地金线莲，不变异，产量高， 成本低，周期短，极具市场竞争力。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明。实施例1 一种通过组织培养生产福建道地金线莲的方法，他包括如下步骤A.植物体的选择及无菌处理A)选择8月份生长的野生福建道地金线莲植株，用自来水冲洗2-3小时，用毛刷清 洗干净，除去根和叶，再用蒸馏水冲洗，置操净工作台内；B)将除去了根和叶的茎段植物体用75%的酒精浸泡30秒进行表面灭菌，再用无菌水清洗干净；C)将经过酒精灭菌的茎段植物体用0. 5%次氯酸钠溶液浸泡消毒5分钟，用无菌 水冲洗5次，再转入0. 15%升汞溶液中灭菌8分钟，倒去灭菌液，用事先准备好的无菌水冲 洗4-5次，再用滤纸吸干无菌水；D)无菌条件下将消毒的茎段剪成ICM左右带茎节的福建道地金线莲小段；B.丛生芽诱导培养将经过无菌处理后的福建道地金线莲小段组织在诱导培养基中进行组织诱导 培养丛生芽，培养周期30天，培养温度28°C，光照培养时间24小时/天，光照强度 20001ux ；所述的诱导培养基为MS培养基+蔗糖45g/L+琼脂6_8g/L+活性炭2. Og/L+萘 乙酸2. Omg/L+6-苄氨基腺嘌呤2. Omg/L, PH值为5. 0C.大规模培养将诱导出的丛生芽在大规模培养基中进行大规模培养，培养周期45天，培养温 度28°C，光照培养时间24小时/天，光照强度15001uX所述的大规模培养基为改良MS 培养基+硝酸钙600mg/L+香蕉泥30-50g/L+蔗糖15g/L+琼脂6_8g/L+活性炭2. Og/L+萘 乙酸1. Omg/L+6-苄氨基腺嘌呤2. Omg/L, PH值为5. 0实施例2 —种通过组织培养生产福建道地金线莲的方法，它包括如下步骤A.植物体的选择及无菌处理A)选择10月份生长的野生福建道地金线莲植株，用自来水冲本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过植物组织培养生产福建道地金线莲的方法，它包括如下步骤：１．１植物体的选择及无菌处理：选择５－１０月份生长的福建道地金线莲野生健壮植物，除去根和叶进行清洗和无菌处理，将茎段剪成０．５－１．５ＣＭ带茎节的福建道地金线莲小段组织；１．２诱导培养：将经过无菌处理后的福建道地金线莲小段组织在诱导培养基中进行组织诱导培养丛生芽，培养周期：１０－６０天，培养温度：１０－３５℃，光照培养时间：０－２４小时／天，光照强度：０～２０００ｌｕｘ；所述的诱导培养基为：ＭＳ培养基＋蔗糖１０－５０ｇ／Ｌ＋琼脂６－８ｇ／Ｌ＋活性炭２．０－３．０ｇ／Ｌ＋萘乙酸０．１－３．０ｍｇ／Ｌ＋６－苄氨基腺嘌呤０．１－５．０ｍｇ／Ｌ，ＰＨ值为５．０－７．０；１．３大规模培养：将诱导的丛生芽在大规模培养基中进行大规模培养，培养周期：１０－６０天，培养温度：１０－３５℃，光照培养时间：０－２４小时／天，光照强度：０～２０００ｌｕｘ；所述的诱导培养基为：改良ＭＳ培养基＋硝酸钙６００ｍｇ／Ｌ＋香蕉泥３０－５０ｇ／Ｌ＋蔗糖１０－５０ｇ／Ｌ／Ｌ＋琼脂６－８ｇ／Ｌ＋活性炭０．１－５．０ｇ／Ｌ＋萘乙酸１．０－２．０ｍｇ＋６－苄氨基腺嘌呤２．０－３．０ｍｇ，ＰＨ值为５．５－６．５。...

【技术特征摘要】
一种通过植物组织培养生产福建道地金线莲的方法，它包括如下步骤1.1植物体的选择及无菌处理选择5 10月份生长的福建道地金线莲野生健壮植物，除去根和叶进行清洗和无菌处理，将茎段剪成0.5 1.5CM带茎节的福建道地金线莲小段组织；1.2诱导培养将经过无菌处理后的福建道地金线莲小段组织在诱导培养基中进行组织诱导培养丛生芽，培养周期10 60天，培养温度10 35℃，光照培养时间0 24小时/天，光照强度0～2000lux；所述的诱导培养基为MS培养基+蔗糖10 50g/L+琼脂6 8g/L+活性炭2.0 3.0g/L+萘乙酸0.1 3.0mg/L+6 苄氨基腺嘌呤0.1 5.0mg/L，PH值为5.0 7.0；1.3大规模培养将诱导的丛生芽在大规模培养基中进行大规模培养，培养周期10 60天，培养温度10 35℃，光照培养时间0 24小时/天，光照强度0～2000lux；所述的诱导培养基为改良MS培养基+硝酸钙600mg/L+香蕉泥30 50g/L+蔗糖10 50g/L/L+琼脂6 8g/L+活性炭0.1 5.0g/L+萘乙酸1.0 2.0mg+6 苄氨基腺嘌呤2.0 3.0mg，PH值为5.5 6.5。2.按照权利要求1所述的通过植物组织培养生产福建道地金线莲的方法，其特征在 于所述的丛生芽诱导培养培养周期20-50天，培养温度20-30°C，光照培养时间8-16 小时/天，光照强度100 200...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈咏梅，黄碧华，
申请(专利权)人：福建省金草生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：92[中国|厦门]