【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及指纹图谱库及其构建方法，具体涉及一种柑橘品种DNA指纹图谱库 及其构建方法。
技术介绍
柑橘是世界第一大水果，全球种植面积670万公顷，年产量超过1亿吨，年贸易 额234亿美元，是仅次于小麦、玉米和大豆的第四大国际贸易农产品。我国是世界上柑 橘栽培面积最大的国家，柑橘总产量达2300万吨，居世界第一位。近30年来，国外培 育出上百个柑橘新品种，而我国选育出了数十个柑橘优良新品种。可是，目前我国柑橘 种苗行业管理制度还不够完善，以劣充优，以假种苗坑农事件时有发生，不仅损害了种 植者的利益，也对柑橘产业的健康发展构成了极大的威胁。国际植物新品种保护联盟(UPOV)把特异性(distinctness)、一致性(uniformity)和稳定性(stability)作为新品种登记和保护的必备特征。这些特征作同样 可以作为品种鉴定的依据。长期以来，品种特性鉴定一直采用以形态性状为主要依据。 这种经典的鉴定一般要在植株特定生长发育时期(果实、种子)才能进行，因而鉴定周 期较长；而且农艺性状易受栽培管理和环境条件的影响。柑橘是多年生木本植物，易发 生芽变，很多亲缘关系相近的品种间农艺性状差异较小，甚至只有单一性状的不明显变 异，而且目前柑橘生产上一般要在种苗定植后2 — 4年的才能开花结果，若此时才利用依 靠形态学标记来鉴定品种真伪已无实际意义。随着分子生物学的发展，各种DNA分子标记技术不断涌现，检测技术渐趋完 善，为实现柑橘种苗质量的早期、快速和准确鉴定提供了新途径。柑橘中也有利用分子 标记技术开展研究(Barkley et al. 2006; Pan...
【技术保护点】
柑橘品种标准ＤＮＡ指纹图谱库，它是包括柑橘品种ＤＮＡ和ＳＳＲ特征引物对序列为材料，通过柑橘标准ＤＮＡ指纹图谱库构建得到；其特征在于：所述ＳＳＲ特征引物为ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０所示的序列。
【技术特征摘要】
1.柑橘品种标准DNA指纹图谱库，它是包括柑橘品种DNA和SSR特征引物对序列 为材料，通过柑橘标准DNA指纹图谱库构建得到；其特征在于所述SSR特征引物为 SEQ ID NO: 1 SEQ ID N0:40 所示的序列。2.如权利要求1所述的柑橘品种标准DNA指纹图谱库，其特征在于所述柑橘品种 DNA来自下表所述的柑橘品种3.如权利要求1或2所述的柑橘品种标准DNA指纹图谱库的构建方法，按如下步骤 进行a.柑橘各品种总DNA提取提取所述各柑橘品种的总DNA，利用琼脂糖凝胶电泳和总分光光度计检测总DNA的 质量，使提取的总DNA完整性好，且A260/A280比值在1.6-2.0之间；b.SSR特征引物对序列的筛选SSR引物来源选择分布于不同的连锁群上的引物对序列，合成，PAGE纯化； SSR特征引物对序列的筛选以所述柑橘品种为材料，利用所述合成的SSR引物对 各柑橘品种的DNA进行PCR扩增；引物的筛选首先是根据所述合成的SSR引物在各个柑橘品种中PCR扩增出的谱带的 特异性、多态性以及带型的易区分程度进行初筛，筛选出一批在不同柑橘品种间多态性 丰富、带型清晰而且特征谱带能够稳定重复的SSR引物；然后，找出一对在所述柑橘品 种间多态性信息含量PIC最高，等位位点数最多的SSR引物作为柑橘品种指纹图谱库构 建的核心引物，根据所述核心引物的特征指纹将所述柑橘品种划分为9个类群即为9个等 位位点；进一步，以所述核心引物的区分结果为基准，在这9个类群中检测，每次检测 到一个具有多态性的SSR引物进一步筛选，以此类推，这样将其划分为更多的类群，直 到把各类群分到只有一个品种为止；最终从所述合成的柑橘SSR引物对序列中筛选得到 来自多个连锁群的SSR特征引物对序列； C.柑橘DNA特征指纹图谱的获得利用所述筛选得到来自多个连锁群的SSR特征引物对序列，分别对所述各柑橘品种 DNA进行PCR扩增，得到所述各柑橘品种的DNA特征指纹图谱； d.柑橘标准DNA指纹图谱库的构建应用指纹图谱自动识别系统对所述各柑橘品种的DNA特征指纹图谱进行识别和处 理，然后将各柑橘品种的DNA特征指纹图谱转换成柑橘品种标准DNA指纹图谱库。4.如权利要求3所述的方法，按以下步骤 a.柑橘各品种总DNA提取提取各柑橘叶片的总DNA，利用...
【专利技术属性】
技术研发人员：雷天刚，陈善春，何永睿，姚利晓，彭爱红，许兰珍，
申请(专利权)人：中国农业科学院柑桔研究所，
类型：发明
国别省市：85
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