本发明专利技术公开了一种以川贝母植株叶为外植体的鳞茎快速增殖方法，该方法包括愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖和分化小鳞茎、以及小鳞茎生长各步骤，所采用的诱导愈伤组织培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ１．０～２．０ｍｇ.Ｌ－１＋ＩＡＡ０．１～０．５ｍｇ.Ｌ－１＋蔗糖３０～５０ｇ.Ｌ－１＋琼脂６．０～７．０ｇ.Ｌ－１，愈伤组织增殖培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ.Ｌ－１＋ＮＡＡ０．５～１ｍｇ.Ｌ－１＋蔗糖３０～５０ｇ.Ｌ－１＋琼脂６．０～７．０ｇ.Ｌ－１，分化鳞茎培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ.Ｌ－１＋ＮＡＡ０．１～０．４ｍｇ.Ｌ－１＋蔗糖３０～５０ｇ.Ｌ－１＋琼脂６．０～７．０ｇ.Ｌ－１；小鳞茎生长培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ.Ｌ－１＋ＮＡＡ０．５ｍｇ.Ｌ－１＋蔗糖３０～５０ｇ.Ｌ－１＋琼脂６．０～７．０ｇ.Ｌ－１。本发明专利技术可以大量快速繁殖川贝母鳞茎，且培养成本低，繁殖率高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种鳞茎的增殖方法，特别是涉及一种以川贝母植株叶为外植体的鳞 茎快速增殖方法。
技术介绍
珍稀濒危药材川贝母(Fritillaria cirrhosa D. Don)是百合科植物，生长在海拔 3500m-4500m的高度，主产于四川、西藏、云南等省区。川贝母喜冷凉气候条件，具有耐寒、喜 湿、怕高温、喜荫蔽的特性。气温达到30°C或地温超过25°C，植株就会枯萎，在海拔低、气温 高的地区不能生存。川贝母具有清热润肺，化痰止咳之功效，用于肺热燥咳，干咳少痰，阴虚 劳嗽，咯痰带血等症状。川贝母是稀有的治疗咳嗽等的良药，由于川贝母价格昂贵，加之近 年来无计划盲目的采挖，自然资源日趋枯竭，预计在近几十年内也难以缓解。组织培养技术 生长周期短，繁殖率高，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且 条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产，因此应用组织培养的方法 进行川贝母快速繁殖是解决川贝母药材资源短缺问题的有效方法之一。现有的鳞茎组织培 养方法都是以鳞茎为外植体进行培养，由于鳞茎本身为入药部位，资源有限，所以以鳞茎为 外植体培养鳞茎，在获得鳞茎的同时又在消耗鳞茎，这相当于增加了鳞茎的培养成本，也使 得鳞茎的资源短缺现状无法得到快速缓解。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，该方 法在培养鳞茎的同时不需消耗鳞茎，培养成本低，繁殖率高。为达到上述目的，本专利技术采用的解决方法包括下列步骤(1)愈伤组织的诱导选取已经消毒处理的川贝母植株叶为外植体，将其在超 净工作台上切成小片，接种于诱导愈伤组织培养基MS+6-BA1. 0 2. Omg · L^+IAAO. 1 0. 5mg · L-1 中；(2)愈伤组织增殖将(1)步骤诱导产生的愈伤组织切成适当大小并转接到愈伤 组织增殖培养基MS+6-BA2. Omg · L^+NAAO. 5 Img · L—1中进行增殖培养；(3)愈伤组织分化鳞茎选取上述生长紧密的愈伤组织转接入鳞茎分化培养基 MS+6 BA2. Omg · I^+NAAO. 1 0. 3mg · Γ1中进行鳞茎分化培养；(4)鳞茎的生长切取(3)步骤诱导产生的小鳞茎以2 4个为一组接入到鳞茎 生长培养基MS+6-BA2. Omg · L^+NAAO. 5mg · L—1中，待鳞茎长至所需体积后即可收获；上述所有培养基的配制pH值为5.6 6.0、蔗糖30 50g · L—1、琼脂6.0 7. Og · L-1 ；上述培养条件均为温度18 22°C、每天光照8 12小时、光照强度为1000 18001x。上述(1)步骤中所述的川贝母植株叶可采取组培苗幼叶，由于组培苗幼叶是在无3细菌的环境中长成，因此在此步骤中无需再作专门的消毒处理。上述(2)步骤中所述愈伤组织按35g培养基中接入2g的比例接入增殖培养基中。上述(3)步骤中愈伤组织接入在分化培养基中，其插入部分的长度占整个长度的 3/5。本专利技术由于采用以川贝母植株叶为外植体的组织培养方法再生鳞茎，因此与传统 栽培方法相比所花的时间大大缩短，克服了传统栽培中时间长，收获量低等问题，而且培养 的鳞茎总生物碱含量可达0. 190%，是市售鳞茎总生物碱含量的2. 8倍(市售鳞茎总生物碱 含量为0. 068% )，也高于野生鳞茎的总生物碱含量(0. 109% )，另外由于川贝母植株叶本 身不是入药部位，因此该方法变相增加了鳞茎的产出量，降低了培养成本。此外实施该方法 只需有简单的植物组织培养设备即可进行，实用性强，且不受季节限制。下面结合实施例对本专利技术进一步详细说明。具体实施例方式实施例1(1)愈伤组织的诱导选取生长健康的幼嫩川贝母植株叶作为外植体，将其用 洗衣粉液洗净后于流水下冲洗30min，再用2.0%次氯酸钠溶液漂洗15min，用清水洗净 吸干后放入0. 1 %升汞溶液中消毒5min，再用无菌水冲洗3次，并用无菌滤纸吸干表面 的水分，然后将处理后的植株叶在超净工作台上切成2cm左右的大小，并将伤口处插入 MS+6-BA2. Omg 'U1+IAAO. Img .L-1+ 蔗糖 30g .L-1+ 琼脂 6. 0 7. Og .I71 培养基中，在 20 21°C、光照强度为1000 18001x、每天光照12小时的条件下进行培养，培养35 45天可 诱导出大量的愈伤组织；(2)愈伤组织增殖选取⑴步骤中生长速度快的黄绿色愈伤组织，将其在 超净工作台上切成2g左右重量后接入35g培养基中，其愈伤组织的增殖培养基为 MS+6-BA2. Omg · L^+NAAO. 5mg · L-1+ 蔗糖 30g · L-1+ 琼脂 6. 5g · L—1，在 20 °C、光照强度为 12001x、每天光照12小时的条件下进行培养，培养28天后，愈伤组织可增加2. 6倍；(3)愈伤组织分化鳞茎选取选取(2)步骤中生长紧密的淡黄色和黄色愈伤组织， 在超净工作台上切成Icm左右见方大小后以3/5的比例(插入部分的长度占整个长度的 比)接入到鳞茎分化培养基MS+6-BA2. Omg -L^+NAAO. 2mg .L—1+蔗糖 30g .L—1+琼脂 6. Og .L—1 中，在20°C、光照强度为ΙΟΟΟΙχ、每天光照12小时的条件下进行培养，培养20天后在紧密 愈伤组织表面开始分化出小鳞茎，40天后统计鳞茎分化率为76%，每个外植体上平均分化 出6个左右的小鳞茎，且部分鳞茎抽苗；(4)鳞茎体积的长大将上述由愈伤组织分化的小鳞茎按纵切法分割成2 4个 一组，接入MS+6-BA2. Omg · L^+NAAO. 5mg · Γ1的培养基中，在22°C、光照强度15001x、每天 光照12小时的条件下进行培养，小鳞茎体积快速增大，培养40d后，小鳞茎体积增大4倍左 右，即可收获。如果培养时间过长，膨大的鳞茎会出现愈伤化现象。实施例2(1)愈伤组织的诱导选取生长健康的川贝母组培苗幼叶作为外植体，将其在超 净工作台上切成2cm左右的大小，并将伤口处插入MS+6-BA2. Omg · L^+IAAO. 5mg · Γ1+蔗糖 30g · L-I+琼脂6. 0 7. Og · L-I培养基中，在20 21°C、光照强度为1000 18001x、每4天光照12小时的条件下进行培养，培养35 45天可诱导出大量的愈伤组织；(2)愈伤组织增殖选取⑴步骤中生长速度快的黄绿色愈伤组织，将其在 超净工作台上切成2g左右重量后接入35g培养基中，其愈伤组织的增殖培养基为 MS+6-BA2. Omg · L^+NAAO. 5mg · L-1+ 蔗糖 30g · L-1+ 琼脂 6. 5g · L—1，在 20 °C、光照强度为 12001x、每天光照12小时的条件下进行培养，培养28天后，愈伤组织可增加3. 2倍；(3)愈伤组织分化鳞茎选取选取(2)步骤中生长紧密的淡黄色和黄色愈伤组织， 在超净工作台上切成Icm左右见方大小后以3/5的比例(插入部分的长度占整个长度的 比)插入到鳞茎分化培养基MS+6-BA2. Omg -L^+NAAO. 3mg .L—1+蔗糖 30g .L—1+琼脂 6. Og .L—1 中，在20°C、光照强度为ΙΟΟΟΙχ、每天光照1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种以川贝母植株叶为外植体的鳞茎快速增殖方法，其特征在于包括下列步骤：（１）愈伤组织的诱导：选取已经消毒处理的川贝母植株叶为外植体，将其在超净工作台上切成小片，接种于诱导愈伤组织培养基ＭＳ＋６－ＢＡ１．０～２．０ｍｇ.Ｌ↑［－１］＋ＩＡＡ０．１～０．５ｍｇ.Ｌ↑［－１］中；（２）愈伤组织增殖：将（１）步骤诱导产生的愈伤组织切成适当大小并转接到愈伤组织增殖培养基ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ.Ｌ↑［－１］＋ＮＡＡ０．５～１ｍｇ.Ｌ↑［－１］中进行增殖培养；（３）愈伤组织分化鳞茎：选取上述生长紧密的愈伤组织转接入鳞茎分化培养基ＭＳ＋６～ＢＡ２．０ｍｇ.Ｌ↑［－１］＋ＮＡＡ０．１～０．４ｍｇ.Ｌ↑［－１］中进行鳞茎分化培养；（４）鳞茎的生长：切取（３）步骤诱导产生的小鳞茎以２～４个为一组接入到鳞茎生长培养基ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ.Ｌ↑［－１］＋ＮＡＡ０．５ｍｇ.Ｌ↑［－１］中，待鳞茎长至所需体积后即可收获；上述所有培养基的配制ｐＨ值为５．６～６．０、蔗糖３０～５０ｇ.Ｌ↑［－１］、琼脂６．０～７．０ｇ.Ｌ↑［－１］；上述培养条件均为温度１８～２２℃、每天光照８～１２小时、光照强度为１０００～１８００ｌｘ。...
【技术特征摘要】
1.一种以川贝母植株叶为外植体的鳞茎快速增殖方法，其特征在于包括下列步骤(1)愈伤组织的诱导选取已经消毒处理的川贝母植株叶为外植体，将其在超净工作 台上切成小片，接种于诱导愈伤组织培养基MS+6-BA1. 0 2. Omg -L^+IAAO. 1 0. 5mg化一1 中；(2)愈伤组织增殖将(1)步骤诱导产生的愈伤组织切成适当大小并转接到愈伤组织 增殖培养基MS+6-BA2. Omg · I^+NAAO. 5 Img · Γ1中进行增殖培养；(3)愈伤组织分化鳞茎选取上述生长紧密的愈伤组织转接入鳞茎分化培养基MS+6 BA2. Omg · L-1+NAAO· 1 0. 4mg · Γ1中进行鳞茎分化培养；(4)鳞茎的生长切取(3)步骤诱导产生的小鳞茎以2 4个为一组接入到鳞茎生长 培养基MS+6-BA2. Omg · L^...
【专利技术属性】
技术研发人员：薛永新，代勇，王跃华，闫胜杰，徐世军，孙雁霞，王晓蓉，何宗晟，
申请(专利权)人：薛永新，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]
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