分离无细胞凋亡或胎儿核酸的方法技术

本发明专利技术提供一种分离无细胞核酸（例如凋亡或胎儿核酸）的方法，以及检测赘生性细胞或鉴定胎儿的遗传组成的方法。本发明专利技术也提供包含抗ＤＮＡ抗体的磁性颗粒和包含该磁性颗粒的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
在怀孕期间通常进行产前检查或筛查以确定胎儿的性别或检测胎儿的遗传病 和/或染色体异常。到现在为止，已经认识到了由一种或多种缺陷基因引起的超过4000 种遗传病。一些例子包括囊性纤维化(Cystic Fibrosis)、亨廷顿病(Huntington，s Disease)、0地中海贫血(Beta Thalassaemia)、强直性肌营养不良(Myotonic Dystrophy)、镰状细胞贫血(Sickle Cell Anemia)、卟啉症(Porphyria)和脆性X染色 体综合征(Fragile-X-Syndrome)。染色体异常是由染色体数量的畸变、染色体材料的 复制或缺失，以及由染色体结构的缺陷引起的。染色体异常的例子有三体性，例如16三 体性(trisomy 16)，妊娠前三个月引起流产的主要原因，21三体性(trisomy 21)(唐氏 综合征(Down syndrome))、13 三体性(trisomy 13)(中白陶综合征(Patau syndrome)) > 18三体性(trisomy 18)(爱德华兹综合征(Edwards syndrome))；克莱恩费尔特综合 征(Klinefelter，s syndrome) (47，XXY)、(47，XYY)和(47，XXX)；染色体的缺失(单体 性(monosomy))，例如特纳综合征(Turner syndrome) (45，X0)；染色体的异位、缺失和/ 或微缺失(microdeletion)，例如罗伯逊易位(Robertsonian translocation)、安格尔 曼综合征(Angelman syndrome)、迪乔治综合征(DiGeorge syndrome)禾口沃-希综合征 (Wo1f-Hirschhorn Syndrome)。目前可用的产前遗传检查通常涉及侵入性操作。例如，对妊娠10-12周左右的孕 妇进行的绒毛膜绒毛取样(CVS)和在14-16周左右进行的羊膜腔穿刺术都包括侵入性操作 以获得样品供检查胎儿染色体异常用。通常使用细胞遗传学或荧光原位杂交(FISH)分析 来检查通过这些取样操作获得的胎儿细胞的染色体异常。尽管这些操作对于检测染色体异常可能是有用的，其已经显示了与流产的风险 有关。因此羊膜穿刺术或CVS仅提供给感觉存在增加的风险的妇女，包括那些高龄产妇 (those of advanced maternal age) (> 35岁)、那些母体血清筛查异常的妇女或那些以 前有过胎儿染色体异常的妇女。这些检查的结果是使得年龄超过35岁的妇女生出染色体 异常(如唐氏综合征)的婴儿的百分比显著降低。然而，缺乏用于大多数孕妇的适当的或 相对安全的产前检查或筛查的导致了大约80%生出唐氏综合征婴儿的妇女的年龄在35岁 以下。如此需要用于一般群体的孕妇的非-侵入性筛查试验，特别是针对鉴定胎儿染色 体异常以及其它遗传变异、病症或疾病的检查。这需要分离可以用于产前遗传筛查的胎儿 核酸的非-侵入性技术
技术实现思路
本专利技术部分基于如下发现，即能够在不溶解或去除样品中细胞的情况下从生物样 品分离无细胞核酸，例如，来自凋亡或坏死细胞的核酸或胎儿核酸。因此，本专利技术提供了分 离无细胞核酸(例如，凋亡的核酸或胎儿核酸)的方法，和鉴定胎儿的遗传组成的方法。本 专利技术还提供包含抗-DNA抗体的磁性颗粒，和包含所述磁性颗粒的试剂盒。在本专利技术的一个实施方式中提供一种分离胎儿核酸的方法。该方法包括从母体生 物样品分离无细胞核酸，该母体生物样品含有细胞成分和无细胞核酸，在分离之前不用处 理细胞成分。在本专利技术的另一实施方式中提供一种鉴定胎儿遗传组成的方法。该方法包括根据 本专利技术的方法分离胎儿核酸，并基于分离的胎儿核酸来鉴定胎儿的遗传组成。在本专利技术的另一实施方式中提供一种磁性颗粒。该磁性颗粒包含在其表面上的 抗-DNA抗体。本专利技术的又一个实施方式中提供一种包含本专利技术的磁性颗粒的试剂盒。附图简述附图说明图1显示将抗-DNA抗体与链霉抗生物素蛋白涂覆的磁性颗粒附接的过程中的示 例性步骤。图2显示通过蛋白G将抗-DNA抗体与链霉抗生物素蛋白Dynabead M-280附接的 过程中的示例性步骤。图3显示将抗-DNA抗体与胺化Dynabead附接的过程中的示例性步骤。专利技术详述本专利技术部分基于如下发现，即在不溶解或去除样品中细胞的情况下可以从生物样 品分离无细胞核酸，例如凋亡的或胎儿的核酸。根据本专利技术的一方面，其提供一种分离凋亡 或胎儿核酸的方法。该方法包括从生物样品，例如受试者或母体的生物样品，分离无细胞核 酸。此处所用的术语“无细胞核酸”指的是循环的、或自由漂浮的(free floating)核酸， 并且可与循环的、或自由漂浮的核酸互换使用。在一个实施方式中，无细胞核酸包括存在于 任何完整或部分完整的细胞外的核酸。在另一实施方式中，无细胞核酸包括存在于任何完 整或部分完整的细胞外，但在细胞或细胞样成分内的核酸，例如在膜结构、线粒体样结构、 脂质膜囊泡内等。一般而言，术语“母体(maternal host) ”指的是怀有(即孕有)胎儿的女性受试 者。任何合适的母体生物样品，例如一种包含胎儿核酸的母体生物样品，均可以用于本专利技术 的方法中。示例性的生物样品包括，但不限于，全血、血浆、血清、尿、宫颈粘液、羊水或绒毛 膜绒毛样品。在一个实施方式中，母体生物样品是全血。在另一实施方式中，所述生物样品 是储存在水性介质中的宫颈粘液样品或尿样。在又一个实施方式中，所述生物样品是含有 从一种或多种宫颈粘液样品或尿样中浙滤的核酸的介质(例如，水性介质)的样品。水性 介质可以是任何介质，例如含水缓冲液，其适用于保存宫颈粘液样品或尿品。一般而言，所述生物样品(例如母体生物样品)包含细胞成分以及无细胞核酸，并 且所述无细胞核酸的分离不用在分离前对所述细胞成分进行处理。例如，所述细胞成分可 以包含细胞或(例如，如在血浆或血清的情况下)细胞的或基质的成分或蛋白。此处所用的术语“分离”指的是分开、捕获、隔离(sequester)等，并可与它们互换 使用。可以通过目前已知或者以后发现的任何用于从生物样品分离核酸的手段(means)来 分离所述无细胞核酸。在一个实施方式中，所述无细胞核酸是通过使生物样品与包含核酸 的配体的固体表面接触而分离的。所述配体可以直接或间接(例如通过接头)涂覆或固定 在固体表面上。用于将配体附接到固体表面的方法是本领域技术人员熟知的并且可以使用 现在已知的或以后开发的任何方法。在一个实施方式中，所述固体表面为磁性颗粒，包含在柱(例如树脂柱)中的颗粒，微通道、微孔、平板、滤器、膜或载玻片的表面。在另一实施方式中，可以将所述配体涂覆在装置(例如，微流装置)的表面。示例 性的微流装置包括进口装置(inlet means)、出口装置(outlet means)和在进口和出口装 置之间延伸的微通道配置。该微通道配置可以是任何能为生物样品提供随机化流动通路的 微通道。例如，所述微通道配置可以包括多个横向分离柱(separator post)，其与微通道和 自微通道的突起相整合。这种柱通常以能够提供随机化流出通路的模式排列。微流装置的 实例在美国申请号11/458本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离胎儿核酸的方法，该方法包括：　　从母体生物样品分离无细胞核酸，　　其中所述生物样品包含细胞成分和无细胞核酸，并且其中进行无细胞核酸的分离不用在分离之前处理该细胞成分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：拉姆巴特，范文华，
申请(专利权)人：诺瓦蒂斯公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]