艰难梭菌芽孢的抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了与细菌艰难梭菌的内生孢子结合的抗体、制备这种抗体的方法以及使用这种抗体的方法，包括检测艰难梭菌内生孢子的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】艰难梭菌芽孢的抗体及其用途相关专利申请的交叉引用本申请要求于2008年2月28日提交的美国临时申请序列号61/032，270的优先 权，将该美国临时申请以引用的方式并入本文。
技术介绍
艰难梭菌(Clostridium difficile)(即形成厌氧芽孢的革兰氏阳性菌)是在人 中引起伪膜性肠炎和抗生素相关性腹泻的主要原因并且是牵涉于医院引起的医院内感染 的最广泛的细菌之一(参见例如Wren，2006，Future Microbiol ； 1(3) :243_245)。根据疾 病控制中心(⑶C)，艰难梭菌在美国每年可造成成百上千例腹泻病例和至少5，000例死亡。 在1993年至2003年之间，艰难梭菌感染数目翻番，在2000年后增长最大。患有与艰难梭菌相关的疾病的个体在粪便中排出芽孢。艰难梭菌感染常常在住院 患者之间传播并且该生物体通常存在于医院工作人员的手上(参见，例如McFarland等人， 1989，N Engl J Med ；320 204-210)。需对感染艰难梭菌的患者进行隔离并采取防范措施 来避免感染蔓延。无症状的携带者可排出芽孢并且为了隔离目的而需要进行筛选(参见例 如，Kyne 等人，2000，N Engl J Med ；342 :390_397)。艰难梭菌芽孢能耐热、耐干燥和耐清洗剂，并且可在诸如手推车手柄、床栏杆、便 盆、盥洗室、浴盆、地板、器具、亚麻制品、电话、听诊器、温度计和远程控制器之类的环境表 面上存活多达70天。因而，环境表面是易感染源。需要在住院期间对患者的房间进行彻底清洁。显然需要监控清洁效果以及需要确认患者房间和环境表面没有艰难梭菌芽孢。目 前，还没有用于检测环境样品和患者样品中的艰难梭菌芽孢的易用快速方法。虽然目前有 市售的试剂盒(免疫测定法和分子测定法两种试剂盒)可用于检测艰难梭菌毒素，但这些 试剂盒不能检测艰难梭菌芽孢。因而，存在对用于检测艰难梭菌芽孢的快速易用系统的需要。
技术实现思路
本专利技术包括与艰难梭菌芽孢结合的分离的抗体。在一些实施例中，该芽孢是未萌 发的芽孢。在一些实施例中，该芽孢是萌发的芽孢。在一些实施例中，该抗体不与艰难梭菌 营养细胞结合。在一些实施例中，该抗体不与艰难梭菌毒素结合。本专利技术包括一种分离的抗体，该抗体与艰难梭菌菌株630的具有SEQID NO :1的假 定蛋白CD1021或假定蛋白CD1021的片段结合。在一些实施例中，该分离的抗体与假定蛋 白⑶1021的包含氨基酸残基505至604的片段结合。在一些实施例中，该分离的抗体与假 定蛋白CD1021的包含氨基酸残基30至120的片段结合。在一些实施例中，该分离的抗体 与假定蛋白CD1021的包含氨基酸残基194至293的片段结合。在一些实施例中，该分离的 抗体与假定蛋白⑶1021的包含氨基酸残基203至217的片段结合。在一些实施例中，该分 离的抗体与假定蛋白⑶1021的包含氨基酸残基333至347的片段结合。本专利技术包括与氨基酸序列SEQ ID NO 2结合的分离的抗体。本专利技术包括与氨基酸序列SEQ ID NO 9结合的分离的抗体。本专利技术包括与氨基酸序列SEQ ID NO 10结合的分离的抗体。本专利技术包括与氨基酸序列EGSSLQYKGDDPESY(SEQ ID NO 3)结合的分离的抗体。本专利技术包括与氨基酸序列LKNETYKTKYHKYLE(SEQ ID NO 4)结合的分离的抗体。本专利技术包括一种分离的抗体，该抗体与艰难梭菌菌株630的具有SEQID NO 5的 推定的N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶蛋白或推定的N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酸酰胺 酶蛋白的片段结合。在一些实施例中，该分离的抗体与推定的N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酸 酰胺酶蛋白的包含氨基酸残基294至393的片段结合。在一些实施例中，该分离的抗体与 推定的N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶蛋白的包含氨基酸残基582至596的片段结合。 在一些实施例中，该分离的抗体与推定的N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶蛋白的包含氨 基酸残基64至78的片段结合。本专利技术包括与氨基酸序列SEQ ID NO 6结合的分离的抗体。本专利技术包括与氨基酸序列YKLKDKNGGTTKTVA(SEQ ID NO 7)结合的分离的抗体。本专利技术包括与氨基酸序列KFKEKPDADSIKLKY(SEQ ID NO 8)结合的分离的抗体。本专利技术包括单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或抗原结合片段 抑制本专利技术的抗体与其抗原靶标的结合。本专利技术包括本专利技术的分离的抗体的抗原结合片段。在一些实施例中，本专利技术的分离的抗体是多克隆抗体。在一些实施例中，本专利技术 的分离的抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，本专利技术的分离的抗体不与枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)芽孢或产孢梭菌(Clostridium sporogenes)芽孢结合。在一些实施 例中，本专利技术的抗体和抗原结合片段带有标记。本专利技术包括包含一种或多种本专利技术的分离的抗体或它们的抗原结合片段的组合 物。本专利技术包括包含一种或多种本专利技术的分离的抗体或它们的抗原结合片段的试剂品.ο本专利技术包括产生本专利技术的单克隆抗体的杂交瘤细胞系或转化的B细胞系。本专利技术包括分离的多核苷酸序列，该多核苷酸序列包括编码本专利技术单克隆抗体的 重链、轻链、重链可变区、轻链可变区或一个或多个互补决定区的核酸序列。本专利技术包括表 达载体，该表达载体包括这种分离的多核苷酸序列。本专利技术包括宿主细胞，该宿主细胞包括 这种表达载体。本专利技术包括制备抗艰难梭菌抗体的方法，该方法包括用包含艰难梭菌基因组所编 码的蛋白质的至少一部分的多肽，对宿主生物体以可有效产生响应所述多肽的抗体的量进 行免疫。在一些实施例中，所述包括由艰难梭菌基因组编码的蛋白质的至少一部分的多肽 选自 SEQ ID N0:1、SEQ IDN0:2、SEQ ID NO :3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID NO :6、 SEQ IDNO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO 10 以及它们的片段。在一些实施例 中，本方法还包括对抗体制备物进行纯化。本专利技术包括制备抗艰难梭菌抗体的方法，该方法包括使编码由艰难梭菌基因组编 码的蛋白质的至少一部分的核酸序列在免疫活性宿主生物体中表达。在一些实施例中，所7述编码由艰难梭菌基因组编码的蛋白质的至少一部分的核酸序列编码选自SEQ ID NO=U SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ IDN0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 10以及它们的片段的氨基酸序列。在一些实施例中，本 方法还包括对抗体制备物进行纯化。本专利技术包括组合物，该组合物包括至少两种分离的抗体或它们的抗原结合片段， 其中每种分离的抗体与艰难梭菌芽孢的独特抗原表位结合。在所述组合物的一些实施例中，至少一种分离的抗体或其抗原结合片段与艰难梭 菌菌株630的具有SEQ ID NO :1的假定蛋白⑶1021或与假定蛋白⑶1021的多肽片段结 合。在一些实施例中，所述假定蛋白⑶1021的多肽片段选本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的抗体，其与艰难梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）芽孢结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：拉伊拉贾戈帕尔，魏爱平，
申请(专利权)人：三M创新有限公司，
类型：发明
国别省市：US[]