稳定的r-干扰素的配制方法技术

一种稳定的酸性ｒ－干扰素的配方和一种稳定的ｒ－干扰素的冷冻本体溶液．（*该技术在2006年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于稳定的冷冻干燥的γ-干扰素的配制方法。依此法配制的γ-干扰素，在水中恢复后，室温下，至少可在24小时内保持清亮及生物活性。“γ-干扰素”（GIF）一词是指天然干扰素或重组体干扰素，它与人的免疫干扰素具有相类似的生物特性。在本专利公开时，术语γ-干扰素-A或GIF-A代表含有以半胱氨酸-酪氨酸-半胱氨酸开头，以谷氨酰胺结尾的146个氨基酸。另外，已知几种截断的γ-干扰素产物，在下文中对其中每一个都用类似的方法来标明，即，在γ-干扰素（GIF）一词之后加英文大写字母。如：GIF-D，代表消除半胱氨酸-酪氨酸-半胱氨酸片段后的产物，它仅含143个氨基酸;又如：GIF-B，是指GIF-A在羧基位置被截断后，含有131个氨基酸的片段。所有这些截断产物均可用于本专利。而GIF-A则是在本项专利技术中优先选用的一种GIF。据报道，γ-干扰素为一种抗增殖剂，并能增强α-和β-干扰素（即白细胞和成纤维细胞干扰素）的抗病毒及抗增殖效力。还有人提出，γ-干扰素可作为免疫调节剂。一种已有的干扰素剂量形式的配制方法，是将与其它组分和在一起的干扰素冷冻干燥，以便在使用时用水恢复。由于从文献上得知，γ-干扰素在酸中不稳定（不象α-和β-干扰素那样，在酸性PH-->条件下是稳定的），因而通常在中性或微碱性条件下对其进行处理。例如，英国专利申请GB2119313A公开，在PH7.5时，冷冻干燥的配方为每毫升恢复溶液中含7至23毫克毫升γ-干扰素。然而，当γ-干扰素浓度较高时（每毫升中含量高于0.2毫克），因为立即生成可见的沉淀，这种中性或微碱溶液是不能作为注射用配方的。由于几方面的原因，这些沉淀是不合乎要求的，例如，有使病人患血栓症的潜在危险，有使γ-干扰素的效力丧失的迹象，及堵塞注射器针头的可能性。而本专利技术提供了一个生物稳定的冷冻干燥γ-干扰素的配方，包括γ-干扰素和-相应的缓冲剂，其中缓冲剂可维持水恢复液的PH值在4.0到6.0的范围内，最佳为PH4.5-5.0，该溶液的浓度为每毫升含0.001，最好是0.05，到10毫克γ-干扰素。这种配方令人吃惊地形成了生物及化学稳定的冷冻干燥粉末，该粉末用水恢复时形成清亮的溶液。因γ-干扰素最好是非肠道施用，故本专利技术的配方主要供注射用，即，肌肉、静脉及皮下注射。当然，本配方也将适用γ-干扰素的其它方法，其中γ-干扰素需要采取一种更为合适的剂量形式（例如，鼻腔喷雾剂，及象眼药水那样的局部剂量形式）。有关γ-干扰素的酸不稳定性已有大量文献记载。例如，J.Vilcek等，JournalofImmunologicalMethods，第69卷（1984年），61-70页，报道了γ-干扰素在低PH时的不稳定性，他们发现在PH3.5时，分离柱中洗提出了大部分γ-干扰素，但提出组分必须是立即直接收集到中性缓冲介质中。在低PH条件下，含有或不含如人血清白蛋白那样的酸性蛋白质-->增溶剂的γ-干扰素溶液，在初期是清亮的，这与中性或微碱性溶液不同，它们是混浊液。在酸性PH下，最终总是要生成沉淀，但增溶剂的加入可大大延缓沉淀的生成。本专利技术中的冷冻干燥粉，可在PH4.5时，经长期冷藏后（如一年）仍保持其稳定性，恢复液保持清亮，也就是无沉淀和/或混浊，并在室温或冷藏下至少24小时内具有生物稳定性。由于药粉是在临使用前恢复，因而要使溶液保持清亮以便注射，24小时是足够长的。此外，恢复液在冷冻贮存2星期后，仍可保持清亮及生物稳定性。在本专利技术的文字叙述中，“生物稳定”一词是指当用标准方法通过病毒的细胞病变效应（CPE）的延缓来度量时，干扰素配方的生物活性在上述的贮藏期内基本保持不变。另一些不太定量的生物功能，如抗增殖及免疫调节活性，也都显示了同样的稳定性。本专利技术的一个突出的优点是，在较低PH下，γ-干扰素更易溶解，因而与以前公布的中性或碱性配方相比，本配方可使γ-干扰素的浓度提高。中性PH下，含量大于0.2毫克γ-干扰素/毫升的溶液将产生沉淀，而在本专利技术的配方中，清亮的恢复溶液中所含γ-干扰素可高达10毫克/毫升。本专利技术的另一个优点是，由于α-和β-干扰素均为酸稳定的酸性蛋白质，酸性PH的配方，就使α-和β-干扰素在同一溶液中与γ-干扰素结合成为可能。还有一个优点就是可以大大地减少或消除常常做为稳定剂而加到γ-干扰素溶液中的高浓度的盐（如氯化钠）。在本专利技术的剂量形式的制备中，低盐γ-干扰素溶液的冷冻干燥，可得到较含盐溶液好得多的冷冻干燥粉。并且，这种低盐配方用水再生时，即可得到适用于肌-->肉注射的等渗溶液。本专利技术的冷冻干燥配方中，缓冲剂的加入量，是要能使恢复溶液的PH值保持在4.0-6.0范围内，最佳为4.5-5.0。优先选用的缓冲体系是柠檬酸和磷酸二钠盐，但也可用其它的有机酸缓冲剂，如琥珀酸或酒石酸和/或无机酸缓冲剂，如硼酸或磷酸-钠或多钠盐。配方中最好含有一个增溶剂，例如人血清白蛋白（HSA），明胶或酪蛋白。每毫升恢复液中HSA的含量可多至30毫克，以1毫克/毫升为最佳。如果要加抗氧剂的话，可选用硫氢类的还原剂，如谷胱甘肽，亚硫基二乙酸，二硫苏糖醇和2-巯基乙醇，或抗坏血酸与半胱氨酸或其药用盐的混合物。优选用的抗氧剂是将抗坏血酸与-水合半胱氨酸盐酸结合使用。对于不含可氧化的半胱氨酸的干扰素的同类物（如GIF-D），则不需用抗氧剂。每毫升恢复液中，抗氧剂的含量最好在0.1到5毫克范围内。为了制出令人满意的冷冻干燥片，并优化其再溶解过程，可加入一种或多种填充剂，象中性氨基酸（如甘氨酸，丙氨酸），单糖（如葡萄糖），二糖（如乳糖），及多糖醇（如甘露糖醇），其含量可为0-100毫克/毫升恢复液，而以10-30毫克/毫升为宜。优选用的填充剂是甘氨酸。另一些赋形剂也可加到配方中，例如螯合剂，象乙二胺四乙酸（EDTA）二钠盐，浓度为0-0.5毫克/毫升恢复液。这完全由技术上熟练的人自行掌握。上述的增溶，抗氧及填充剂，仅用作本专利技术的γ-干扰素配方所优选用的添加剂。单独或结合使用这些添加剂中的一种或全部，并不-->是获得本专利技术的优越性的必要条件。本专利技术的冷冻干燥粉的恢复媒介物包括水，等渗水，葡萄糖溶液，丙烯甘醇和/或聚乙烯甘醇。当恢复液不用作注射液时（例如用作局部或口服液），则可用其它的药用媒介，如酒精。本专利技术优选的冷冻干燥粉的恢复媒介物是水。再一方面，本专利技术的γ-干扰素酸性本体溶液，具有冷冻-融化稳定性。“本体溶液”一词是指水溶液，其中含1-15，最好是1-10毫克γ-干扰素/毫升和0-5毫克/毫升的一种抗氧剂，如半胱氨酸，该溶液以前未曾用冷冻干燥的γ-干扰素配制过。当最大含量为1毫克GIF/毫升的中性本体溶液经冷冻-融化时，产生大量的沉淀。然而我们惊讶地发现，在溶液的冰点或更低的温度下贮藏（譬如-10℃或更低，通常于-20℃进行稳定性测试），PH为4.5-5.5最好是PH5时，γ-干扰素的8毫克/毫升本体溶液经融化不产生沉淀。用于本体溶液的缓冲剂，与上文所述的用于冷冻干燥配方的相同。例如，这样一种本体溶液（PH5）可有如下组成：成份    浓度毫克/毫升γ-干扰素    2.0无水柠檬酸    1.5无水磷酸二钠盐    1.8-水合半胱氨酸盐酸    1.0氢氧化钠0.1N适量至本文档来自技高网...

【技术保护点】
稳定的冷冻干燥的γ一干扰素配方的配制方法，该γ一干扰素是可恢复的，特征在于，使含有γ一干扰素和相容的缓冲剂的溶液冷冻干燥，该缓冲剂维持恢复液的ＰＨ值在４．０至６．０范围内。

【技术特征摘要】
1、稳定的冷冻干燥的γ-干扰素配方的配制方法，该γ-干扰素是可恢复的，特征在于，使含有γ-干扰素和相容的缓冲剂的溶液冷冻干燥，该缓冲剂维持恢复液的pH值在4.0至6.0范围内。2、稳定的冷冻干燥的γ-干扰素配方的配制方法，特征在于，包括下述步骤：1）将γ-干扰素溶解在相容的缓冲溶液中，恢复后缓冲剂维持恢复液的pH值在4.0至6.0范围内，2）冷冻干燥上述制得的溶液。3、稳定γ-干扰素的方法，特征在于，包括下述步骤：1）将γ-干扰素溶解在相容的缓冲溶液中，恢复后缓冲剂维持恢复液的pH值在4.0至6.0范围内，2）冷冻干燥上述制得的溶液。4、权利要求1至3中任一权利要求的方法，其中另外含有一种增溶剂。5、权利要求4的方法，其中每毫升恢复液中增溶剂含量可高至30毫克人血清白蛋白。6、权利要求1至3中任一权利要求的方法，其中另外含有一种从硫氢类还原剂，及抗坏血酸与半胱氨酸或其药用盐的混合物中选出的抗氧化剂。7、权利要求6的方法，其中抗氧化剂为抗坏血酸与半胱氨酸的混合物。8、权利要求1至3中任一权利要求的方法，其中含有0至100毫克从中性氨基酸、单糖、二糖及多元糖醇中选出的一种或多种填充剂。9、权利要求8的方法，其中所述的填充剂为甘氨酸。10、权利要求1至3中任一权利要求的方法，其中另外还含有一种螯合剂。11、权利要求10的方法，其中所述的螯合剂为乙二胺四乙酸二钠盐。12、权利要求1至3中任一权利要求的方法，其中缓冲剂包括柠檬酸和磷酸二钠盐。13、权利要求12的方法，其中缓冲剂维持恢复液的pH值在4.5至5.0范围内。14、权利要求1至3中任一权利要求的方法，其中γ-干扰素的含量为0.1～2毫克/毫升恢复液。15、权利要求14的方法，其中γ-干扰素为γ-干...

【专利技术属性】
技术研发人员：扎卡里严，伊姆蒂亚兹阿马德乔德里，
申请(专利权)人：先灵公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]