制备抗蠕虫疫苗的方法技术

本发明专利技术涉及疫苗制剂，该疫苗制剂包括不寄生于哺乳动物或鸟类的线虫品种的悬浮液，匀浆或抽出物，以及在药用学上可接受的佐剂和／或稀释剂．该疫苗对寄生于哺乳动物和鸟类中的其他线虫品种的免疫接种是很有用的．（*该技术在2005年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及疫苗特别是抗蠕虫疫苗的专利技术。哺乳动物的蠕虫感染，尤其是寄生性线虫感染，是巨大经济损失的根源，特别是羊和牛的感染，而马、猪、山羊、狗、猫和家禽的感染也是如此。这些动物必须定期地接近抗蠕虫化学制剂的治疗以控制感染。如果蠕虫感染得不到控制，受感染动物将发病，并出现贫血，腹泻，脱水，食欲不振以及其它症状，而且有时动物会死亡。人也会受蠕虫感染。唯一可行的控制蠕虫感染的方法是抗蠕虫化学制剂。而抗蠕虫化学制剂仅对治疗时存在的虫类起作用，因为动物经常会被再感染，所以必须定期用化学制剂治疗。有时，羊需要每三周进行一次治疗。而狗和猫则需要更频繁的治疗（每日或每隔一日）以控制犬恶丝虫或犬心虫。这是一个费钱又费力而又紧张的防治过程。由于化学制剂的普遍应用，虫类将产生抗药性，因而必须开发新的而且更有力的化学制剂，很显然一种新的探讨是非常渴望的。抗寄生性线虫疫苗的开发将能解决许多与化学制剂治疗有关的问题。预防接种提供的防护作用可能延续很长时期-或可多于12个月。仅仅在接受接种的动物会发生作用，而且不会出现任何中毒问题和残留后遗症。在这方面有人曾做过某些接种的尝试，但成就很少，而且有些成就如在应用经辐射过的幼虫疫苗上所曾发现关于材料的有效性和疫苗的稳定性等实际问题一样，成为妨碍疫苗大规模商业开发-->的因子。这些试尝都是用寄生于哺乳动物的线虫进行的。死疫苗制剂失去防护作用，认为是由于许多因素造成的。例如认为寄生性线虫具有一种排放机制，可分泌一种能抑制或调节宿主免疫机能的物质，使有效的免疫反应不能作用于天然感染。这些免疫调节物质也许存在于用于死疫苗制备的寄生性线虫的粗制品中。其次，认为寄生性线虫对宿主改变了其抗原性状，使重要的（防护性的）寄生物抗原不能激起宿主在天然感染中强有力的免疫反应。这种现象也可出现在接种死疫苗制剂或线虫抽出物之后。第三种可能是在大多数科研中被用于抗原来源的寄生物的快速而丰富的L3发育阶段，可能不含有像L4，L5和成虫阶段的有力的防护性抗原。寄生物发育阶段的有限的有效性防碍了它作大规模疫苗的应用，即使像这些寄生性线虫是有防护性的，但除了L3阶段以外也不能容易地在试管中进行培养。本专利技术是由于本专利技术人发现不寄生于哺乳动物的线虫也具有与已经受寄生性线虫感染或接受其抽出物接种的哺乳动物产生的抗体交叉反应的抗原而做出的。所以由一种可容易地培养而不寄生在哺乳动物的线虫生产的疫苗制剂可用于预防接种并成功的防护了寄生于该动物的线虫对哺乳动物的感染，甚至用于生产疫苗的线虫的种类与寄生物的种类可以不是同种，并且在分类上可以是其他的“目”或者甚至是不同的“纲”中。于此公开一种抗哺乳动物寄生性线虫感染预防接种用的疫苗制剂，此外该疫苗包含一种匀浆或其抽出物，而它至少是一种不寄生于哺乳动物的线虫。另一方面本专利技术提供了一种哺乳动物抗寄生性线虫感染的预防接-->种方法，本方法包括用有效剂量的不寄生于该类哺乳动物的线虫品种的悬浮液，匀浆或抽出物对哺乳动物的预防接种。本专利技术的另一方面，疫苗制剂包括一种至少有一类不寄生于哺乳动物的线虫的悬浮液，其中的线虫已被杀死或使其失去活动能力。本专利技术的疫苗制剂最好采用注射法注入哺乳动物的体内。所以，对匀浆和/或抽出物要进行消毒，例如用微孔过滤器过滤，加入抗细菌的化合物，用甲醛水溶液消毒或其它已知的方法。在线虫悬浮液中要杀死线虫时可用在技术上已熟练的已知方法，例如用甲醛水溶液杀死线虫。疫苗制剂中的活性成分在有任何疫苗制备技术中已知的佐剂存在时也都能稀解，例如存在有铝盐沉淀物或油性佐剂例如弗劳伊得佐剂。混入疫苗中活性成分的量分别决定于受接种动物的大小，应用的佐剂和活性成分的纯度。因而需要的剂量应在物质干重量小至10微克至50毫克之间。最佳剂量应在50微克至1.0毫克的范围内。用于加入疫苗中的线虫的品种最好是能在试管中容易培养的。这才有可能使各种发育阶段的线虫有足够的有效数量进入商品疫苗中。很多来自成虫发育阶段的在量的方面和/或质的方面都较幼虫阶段优越。图1说明在寄生性和自由生活的线虫之间的免疫学交叉反应性。图1A表明接受用一种寄生性线虫-捻转血矛线虫成虫的匀浆接种的羊的抗血清与自由生活线虫匀浆的反应。图1B表明接受用一种寄生性线虫-捻转血矛线虫幼虫的匀浆接种的羊的抗血清与自由生活线虫匀浆的反应。图1C表明接受用一种自由生活线虫-斯太诺尔线虫-->（Steinernoma    faetiae）的匀浆接种的羊的抗血清显示出与寄生性线虫匀浆的交叉反应性。进行专利技术的方法如下例所示接种的线虫不需要是寄生性线虫的同一科，总科，亚目，目或者如可能时甚至不属于同一纲。因此小杆线虫目的墨西哥斯太诺尔线虫（Steinernoma    feltiao    Mexican）能防护羊的圆线虫目的捻转血矛线虫的感染。所以有很多种类的线虫适合于作疫苗用，但最好还是能在试管中容易培养的品种，如斯太诺尔线虫科（例如斯太诺尔线虫），小杆线虫科（例如小杆线虫）以及异小杆线虫科（例如异小杆线虫Hefrorabditis    heltiothidis）等。美国专利4178366和4334498公开了在试管中大量培养这种线虫的方法。对预防接种有效的寄生性线虫的种类同样是为数众多的。在前述例中，可以观察到接种一种小杆线虫目的墨西哥斯太诺尔线虫抽出物，对一种圆线虫目的捻转血矛线虫的防护作用。因此显而易见，可以指望从容易培养的线虫品种中提取一种抽出物，并用此法可以得到的有效的疫苗用以控制多种寄生在人体和家畜的任何一种线虫。例如，人的旋毛虫或犬钩虫感染，马的寻常圆线虫感染，羊的蛇形毛圆线虫感染，山羊的捻转血矛线虫感染，牛的胃线虫感染，猪的蛔虫或旋毛虫感染，猫的狮弓蛔线虫或狭头钩虫感染，狗的犬钩虫或鞭虫感染等都将有希望获得免疫。此外，疫苗对寄生在组织内的线虫起作用而对寄生在胃肠道中的不起作用。例如，这种疫苗能有效的控制由Texocara    SPP幼虫引起人的循环系统的感染和由犬恶丝虫引起的狗循环系统的感染，以及对上述和其它动物循环系统，泌尿生殖系-->统，呼吸系统，皮肤和皮下组织的感染。必须注意上面所列举的并不够全面。用下述例子对本专利技术做进一步的叙述。例1：制备小杆线虫（图1第1行），斯太诺尔线虫（图1第2行），蛇形圆毛线虫传染性幼虫（图1第3行），捻转血矛线虫传染性幼虫（图1第4行），捻转血矛线虫传染性成虫（图1第5行）的匀浆并溶解于2%十二烷基磺酸钠，2%β-巯基乙醇，30%的甘油，和65毫克分子三羟甲基氨基甲烷缓冲液pH6.8的溶液中煮沸5分钟。在12，000g离心沉淀2分钟使不溶物质形成沉淀小片。将溶解的等分试样放入5～15%的聚丙烯酰胺凝胶中（Laemmli，英国，1970    Nature    227，680-685），并在电流100毫安进行电泳（电压最大500伏）直到溴酚蓝靠近凝胶端部。被分离出来的部分用电泳转移到硝酸纤维纸（Schleicher    and    Schull0.2微米，目录号401319）上，（Towhin等人1979，Proc.Natl.Acad.Sci.美国76卷    4350-4354）。用0.5%吐温20（非离子活性剂20），10毫克分子三羟甲基氨基甲烷/150毫克分子氯化本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备一种抗蠕虫疫苗的方法，其特征在于将不寄生在哺乳动物的线虫品种的悬浮液，匀浆或抽出物，以及在药用学上可接受的佐剂和／或稀释剂混合成剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】AU 1984-11-15 PG81451、制备一种抗蠕虫疫苗的方法，其特征在于将不寄生在哺乳动物的线虫品种的悬浮液，匀浆或抽出物，以及在药用学上可接受的佐剂和/或稀释剂混合成剂。2、根据权利要求1的所述的方法，其中疫苗制剂的线虫已被杀死或使其停止活动。3、根据上述任何一项权利要求所述的方法，其中制备悬浮液，匀浆或抽出液用的线虫，是由在试管中容易培养的种类中选出的。4、根据上述任何一项权利要求所述的方法，其中制备悬浮液，匀浆或抽出液用的线虫...

【专利技术属性】
技术研发人员：加里斯图尔特科邦，戴维布鲁斯亚当斯，
申请(专利权)人：澳州生物科技公司，联邦科学及工业研究组织，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]