具免疫调节活性并能促进细胞素（干扰素、肿瘤坏死因子等）生成的无毒制剂，适用于人和动物的治疗和预防；它可通过提取植物和植物残渣来制备。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及由植物和植物残渣获得无毒制剂的方法;所述制剂给人和动物使用时，具有免疫调节活性，并能促进细胞素(干扰素、肿瘤坏死因子等)的形成。已公开了许多有关具免疫促进(immunotropic)活性或抗肿瘤活性的各种提取物、特别是泥炭(peat)的生产HyoshitaTakuya等人(Chem.Abstr.1974，00，47021j)报道了一个方法，其中，将泥炭用8%氢氧化钠溶液提取若干次;将得到的提取物酸化，离心分离固体颗粒，然后渗析并用柱层析纯化。这部分主要(95%)由多糖组成，并具有抗肿瘤活性。St.Tolpa等人(在波兰专利第124110号中)描述了相同的泥炭提取液，但所不同的是，他们对该提取液进一步的处理不同酸化步骤后，进行碱化，然后再酸化，蒸发浓缩，中和，再浓缩，用醇-水混合物提取，然后再部分浓缩，并用醚或其它与水不互溶的有机溶剂提取，最后分出水层，并用凝胶过滤色谱柱纯化。但它未指出哪些部分可以被认为能成为较佳的最终产品。与上述两文献所报道的碱性提取介质相反，波兰专利申请279.475(Tarchomi skie Zaklady，Farmaceutyczne POLFA，公开在BUP 24/90中)报导了用酸化的水性提取介质提取泥炭的方法。将该酸性提取液中和，用超滤法或反渗透法浓缩，所述反渗透法使用保留限(截止)为500-10000道尔顿的膜。然后将该产物用凝胶过滤柱色谱法或阴离子交换树脂柱分离。也可以获得盐浓度不同及多糖与糖蛋白的比率不同的部分。但它未指出所获得的所有混合物均无毒且显示出免疫促进活性。上述方法有一些共同的特征。人们早就知道，在从天然原料中分离活性物质的同时，要保护该活性物质，因而可以避免可能是使该活性物质分解或失活的原因的次级反应。令人遗憾的是，先有技术均未报道为用各方法制备的产品(是各种物质的混合物)其生物活性之主要原因的化合物的确切结构或化学特性。很少有关于多糖和使用将低分子量部分除去的分离方法(渗析和超滤)的报道。这表明在所获得的产品中，生物活性可能是高分子量部分所导致的。在对泥炭提取物目前的研究中发现，即使在保护条件下获得的提取物，或者具有较低的免疫促进活性，或者含有几乎不可分离的石碴(ballast)物质(主要是无机盐类)，这就限制了该产品在所需的药用制剂中的应用;在进一步的加工过程中，它们地增加了劳动和能耗，对于一些治疗应用，甚至拒绝使用该产品。本专利技术的主要目的是提供提取植物和植物残渣及加工该提取物的新方法，用该方法可以较高产率获得具能促进细胞素生成的免疫促进特性的制剂;该方法克服了已知方法的缺陷。我们出乎意料地发现当提取条件按以下特征之一或一个以上进行改变时，每批产品的免疫促进活性均保持在较佳的范围内且终产品中的有机物质的收率显著增加-所提取的化合物间的某些次级反应可按控制的方向并在可控的程度上有意进行，以便生成新化合物，这些新化合物在已知的如泥炭提取物中或者不存在，或者含量相当低;-对如此得到的提取物的加工进行改良，以便在分离石碴物质(由天然泥炭中提取时和/或由提取介质带入的)时不会除去该提取物中有用和有益的成分。与得自泥炭的制剂的生物活性和治疗活性相关的有机物质包括TTP(TOEPA TORF PREPARATION，波兰TORF CORPORATION的注册商标)，它们是Amadori重排化合物和在该醛糖和氨基酸反应产物的重排过程中得到的产物，即通式R1-CO-CH2-NH-R2化合物，式中R1是1-脱氧-2-酮-单糖、寡糖或多糖的残基，其中这样的1-脱氧-2-酮基团是碳原子链的端基;以及R2是氨基酸残基或肽残基，其中端基是与该肽键无关的游离NH2-基团。这些化合物的制备方法以及它们的药用用途公开在PCT/EP 93/00327中。现已发现，可以获得这样的植物和植物残渣的提取物它们富含合成这些活性化合物所需的两类底物，一类是单糖、寡糖和多糖，另一类是氨基酸和肽，而且最终还包括作为上述反应的催化剂的具至少一个活性亚甲基基团的有机酸和/或化合物。本方法可以生产出无毒制剂，如得自泥炭的制剂，所述制剂具免疫调节活性并促进细胞素(干扰素、肿瘤坏死因子等)在活生物体中生成，它们适用于人和动物的治疗和预防。对原料泥炭进行提取;将腐殖质在酸性环境下用沉淀法从得到的提取液中分出;用盐酸酸化至pH1.5-3.0;分离沉淀并将该提取液用减压蒸发浓缩和/或用超微过滤(nano-filtration)浓缩，同时去除无机盐类;将浓缩液的pH调至6.0-7.1;将得到的混合物浓缩至稠糖浆状并加热至70-90℃。最好加热至80℃直至氨基酸和/或肽产物的Amadori重排完全;所述氨基酸和/或肽产物的末端游离NH2-基团(与任何肽键无关)为合适的1-脱氧-2-酮糖-C1-基团所取代，这是由于由泥炭中提取的单糖、寡糖和多糖与氨基酸和/或肽的反应所致;然后通过将反应混合物冷却而终止该反应;将疏水物质(降低产品的免疫促进活性)用选择性吸附法从获得的反应后混合物中去除，所述选择性吸附用特异性的吸附树脂如AMBERLITE XAD型，最好是XAD-2或XAD-4，或任何其它具相似性质的树脂。泥炭提取物最好首先是通过提取天然泥炭(可以首先用酸性溶液洗涤)所获得的碱提取物和水提取物的混合物，所述提取为先用碱水溶液然后再用水提取。较佳的原泥炭为低腐殖化度(humificationdegree)H6-H10。Amadori重排反应最好在浓缩水溶液或浓缩水-醇溶液中进行。由终产物中吸附待去除的物质最好在中性或微酸性溶液中进行;用蒸馏水和稀碱水溶液洗脱该柱。用喷雾干燥法从终溶液中分离出具生物活性和治疗活性的固体物质。Amadori重排反应可以用检验反应即铁氰化钾与重排产物在碱性溶液中的还原反应来监控。在室温下，铁氰化钾在第1分钟内被还原剂如抗坏血酸还原，在头5分钟内被所需的重排产物还原，在头15-30分钟内被还原糖还原。还原产物亚铁氰化钾与硫酸亚铁生成普鲁士蓝。该反应可用于该重排反应的光度定量监控。按预定的时间间隔取反应混合物样，并对其进行该检验反应。当还原的样品中的普鲁士蓝强度不再增强时即中止该重排反应。我们出乎意料地发现由加工底物如泥炭提取物的混合物生成所需的Amadori重排产物比在实验室中相同的糖和氨基酸的预混合组合物容易进行。还测定出与类似的合成产物相比，泥炭提取物中所含的一些物质能增强本专利技术方法所获得的终制剂的生物有效性，而另一些物质则能降低该有效性。用在本专利技术方法中的起始泥炭提取物富含糖和氨基酸，该提取物按文献所述方法获得。优选的原料是呈高度腐殖化(例如标度为H6-H10，见Moor-undTorf-Kunde编辑，Karl-HansGottlich，Stuttgart，1990年第3版)且碳与氮之比为15-35的低泥炭。水提取物可由上述任何方法即使用酸性、中性和/或碱性水性提取介质的方法获得，最好是将这些方法配合起来。最好是将原泥炭先用酸性水溶液提取介质短时(1-2小时)提取，以除去无机物质如碳酸盐、金属氧化物等;然后用碱性水溶液提取介质(如0.2-0.6%NaOH溶液)于20-50℃长时(几小时至多于二十时)提取，以溶解腐殖酸和fulvoacid;最后用水、最好是蒸本文档来自技高网...
【技术保护点】
具免疫调节活性并能促进细胞素在活体中生成且适宜于人和动物的治疗和预防用的制剂的生产方法，其中，提取原植物和植物残渣并用在酸性环境中沉淀的方法将得到的提取液与腐殖质分离，其特征在于：－用盐酸酸化至ｐＨ１. ５－３. ０并分离沉淀物而将腐殖质从 泥炭提取液中除去，然后将提取液通过减压蒸发和／或同时除去无机盐的超微过滤来浓缩，将浓缩溶液的ｐＨ调至６. ０－７. １；－将得到的混合物浓缩至稠糖浆状并加热至７０－９０℃，最好加热至８０℃直至氨基酸和／或肽产物的Ａｍａｄｏｒｉ重排完全，所述 氨基酸和／或肽产物的末端游离ＮＨ↓［２］－基团（与任何肽键无关）为合适的１－脱氧－２－酮糖－Ｃ↓［１］－基团所取代，这是由于由泥炭中提取的单糖、寡糖和多糖与氨基酸和／或肽的反应所致；－通过将反应混合物冷却而终止该反应，将疏水物质（会降低 产品的免疫促进活性）用选择性吸附法除去，所述选择性吸附法用特异性的ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ型吸附树脂，最好是ＸＡＤ－２或ＸＡＤ－４型或具相似性质的其它树脂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：JZ米奥杜祖斯基，K韦特基维兹，M科瓦斯卡，J戈拉尔，M克林梅卡，
申请(专利权)人：托夫企业公司，
类型：发明
国别省市：LI[列支敦士登]
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