稳定的结晶(6S)-和(6R)-四氢叶酸制造技术

本发明专利技术涉及稳定的结晶（６Ｓ）－和（６Ｒ）－四氢叶酸，其用途和其制备方法。结晶（６Ｓ）－和（６Ｒ）－四氢叶酸既纯又极稳定，这些物质甚至在较高温度下不加稳定剂暴露于空气中时也绝对惰性。在ｐＨ≥３．５制备结晶（６Ｓ）－四氢叶酸的结晶方法和在ｐＨ≥２制备结晶（６Ｒ）－四氢叶酸的结晶方法都非常简便易行并且收率高。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及结晶的N—〔4—〔〔(2—氨基—1，4，5，6，7，8—六氢—4—氧代—(6S)—和—(6R)—蝶啶基)甲基〕氨基〕苯甲酰基—L—谷氨酸(下称结晶(6S)—或(6R)—四氢叶酸)、其用途和制备方法。四氢叶酸衍生物有两个不对称中心。因为这些衍生物是从叶酸(即N—(蝶酰)—L—谷氨酸)合成而来，所以谷氨酸片断中的光学活性碳原子为L型，而6—位的光学活性碳原子通常由蝶酰基5，6—位双键氢化形成，故以外消旋(即(6R，S))形式存在。因此，形成的四氢叶酸衍生物由两种非对映异物体的1∶1昆合物组成。四氢叶酸盐主要以5—甲酰—5，6，7，8—四氢叶酸钙(leucovorin)或5—甲基—5，6，7，8—四氢叶酸钙的形式使用，作为药物治疗幼巨红细胞性叶酸贫血，作为解毒剂改善肿瘤治疗中叶酸拮抗剂，特别是氨基喋吟和氨甲蝶吟的耐受性(“抗叶酸补救途径”)、增强氟代嘧啶的治疗效果及治疗自身免疫疾病如牛皮癣和风湿性关节炎、改善对某些抗寄生物剂如三甲氧苄二氨嘧啶—磺胺甲基异噁唑的耐受性、及减低化疗中二去氮四氢叶酸盐(dideazatetrahydrofolates)的毒性。四氢叶酸还可用作制备各种叶酸衍生物的起始物。迄今为止，直接使用四氢叶酸作为药物及作为制备各种四氢叶酸衍生物的起始物是不可能的，因为在制备具有作为药物活性物质可以接受的纯度的四氢叶酸时遇到困难，及四氢叶酸极其不稳定，特别是它对氧化高度敏感〔见本文及A.L.Fitzhugh，Pteridines4(4)，187—191(1993)〕。已发展了各种克服此不稳定性的方法，必须特别提及与本专利技术有关的DE—OS 2323124。关于与本专利技术有关的制备四氢叶酸的方法，还必须特别提及EP600460。但是迄今还没有发现在工业上可行的制备超纯的、满足四氢叶酸药物应用的足够稳定性的四氢叶酸的方法。令人惊异地是，现发现通过结晶光学纯(6S)—或光学纯(6R)—、富集的(6S)—或富集的(6R)—或(6R，S)—四氢叶酸，可得到具有优良稳定性的化学及光学超纯的(6S)—或(6R)—四氢叶酸。生成的结晶(6S)—和/或(6R)—四氢叶酸使得该物质第一次可用作药物或作为工业规模制备其它超纯四氢叶酸衍生物的起始物。(6S)—四氢叶酸从pH≥3.5的极性介质中结晶，而(6R)—四氢叶酸从pH≥2.0的极性介质中结晶。适当的极性介质特别为水或水和与水相混溶的有机溶剂的混合物，如水溶性醇，例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、乙二醇；水溶性低级脂肪酸，例如甲酸、乙酸、乳酸；或水溶性酰胺，例如甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、1—甲基吡咯烷酮、2—甲基吡咯烷酮、2—哌啶酮。对所用溶剂和混合比例没有特别限制，因为结晶(6S)—四氢叶酸和结晶(6R)—四氢叶酸的溶解性特征一般低于相应的无定形形式。为了引发(6S)—四氢叶酸结晶，pH在3.5至6.5之间特别适合。为了引发(6R)—四氢叶酸结晶，pH在2至5.5之间特别适合。引发结晶的最佳pH取决于所用物质和目的，并可经简单试验测定。一般的原则是起始溶液中盐含量越高，要求引发结晶的pH越低，而引发结晶的pH低则要求结晶过程慢，因为不然的话在pH3左右沉淀出无定形四氢叶酸。例如，从用硼氢化物还原叶酸所得反应溶液中直接结晶(6S)—四氢叶酸，引发结晶严格要求pH≤4.8。结晶被引发后，pH可以变化。在(6S)—四氢叶酸结晶过程中及在(6R)—四氢叶酸结晶过程中，pH升高或通过加入酸或缓冲液保持pH恒定。对于(6S)—四氢叶酸的结晶，如果想得到光学富集的(6S)—四氢叶酸，优选在结晶过程中pH为4.5—5.5；而如果想制备稳定的结晶(6S)—四氢叶酸，则优选结晶过程中pH为3.5—4.5。对于(6R)—四氢叶酸的结晶，独立于所预期结果，优选结晶过程中pH为3.5—4.5。对于每种情况，可在室温、较高温度或较低温度下进行结晶。一般，结晶时间可为几分钟到数天。结晶时间越长，一般得到的产品纯度越高也更稳定。从低于适合引发目标异构体结晶的pH开始，或优选从更高pH开始，通过慢慢调节pH自发地结晶(6S)—和(6R)—四氢叶酸。可在适于引发目标异构体结晶的pH范围内通过接种相应的结晶四氢叶酸来引发结晶。结晶起始物可为外消旋(6R，S)—四氢叶酸、富集的(6S)—或(6R)—四氢叶酸以及无定形或结晶的(6S)—或(6R)—四氢叶酸。适宜的起始物不仅可为已分离的固体物质如(6R，S)—四氢叶酸、如EP495204中所述制得的硫酸和磺酸与(6S)—四氢叶酸的加成盐，而且还可为叶酸通过催化氢化或用硼氢化物还原现场制备的四氢叶酸。(6R)—四氢叶酸可从(6S)—四氢叶酸结晶母液中直接结晶。两种异构体都可从如调pH至＞7或＜2所得溶液、或从悬浮液结晶。用无定形或部分结晶的光学纯四氢叶酸或其盐作为结晶的起始物，上述方法制得了具有前所未有的纯度(＞98％)及前所未有的稳定性的结晶四氢叶酸。本专利技术还涉及结晶(6S)—和/或(6R)—四氢叶酸作为制备药物的成分或用于制备其它四氢叶酸衍生物的用途，因为其优良稳定，固态结晶(6S)—和(6R)—四氢叶酸在实际上无限期的时间内保持高质量。本专利技术还涉及包含结晶(6S)—和/或(6R)—四氢叶酸的药物制剂。用已知方法如冷冻干燥制备该药物制剂。其施用类似四氢叶酸领域中的已知物质如5—甲酰—5，6，7，8—四氢叶酸的施用。本专利技术还涉及通过分步结晶分离(6R，S)—四氢叶酸得到两种非对映异构体(6S)—和(6R)—四氢叶酸的方法。该方法非常简单且收率高。甚至在粗外消旋(6R，S)—四氢叶酸经第一次结晶后，就可得到收率高于70％，且其(6S)组分的量高于75％的结晶(6S)—四氢叶酸，得到收率50％以上，且其(6R)组分的量在80％以上的结晶(6R)—四氢叶酸。在相似条件下进一步结晶，可得到异构体纯度大于95％的结晶(6S)—和(6R)—四氢叶酸。(6R)—或(6S)—四氢叶酸还可以不经分离直接用于制备其它四氢叶酸衍生物。例如，通过向(6R)—四氢叶酸溶液中加入甲醛可很容易地制备富集的5，10—亚甲基—(6S)—四氢叶酸。在实施例中所给出的四氢叶酸含量和异构体含量均由HPLC测定。所有四氢叶酸含量均基于无水物质。实施例1(稳定性)为了测定结晶(6S)—和(6R)—四氢叶酸的稳定性，这些物质和对比样品一起在60℃空气中压力条件下贮存。在周期性时间间隔内测定剩余的四氢叶酸含量，并与起始值相比示于下表 在60℃空气中甚至在很长测试时间后，结晶(6S)—和(6R)—四氢叶酸还保持很浅的颜色，几乎为白色。相反，为了比较而包括在内的其它产物迅速高度变色。用于稳定性测试的物质按如下制备·结晶(6S)—四氢叶酸如本专利申请的实施例6·结晶(6R)—四氢叶酸如本专利申请的实施例9·“Yamanouchi′s结晶(6R，S)—四氢叶酸”如DE—OS 2323124，实施例3·无定形(6S)—四氢叶酸将(6S)—四氢叶酸溶解在乙酸中，用乙醚沉淀·无定形(6R)—四氢叶酸将(6R)—四氢叶酸溶解在乙酸中，用乙醚沉淀·无定形(6R，S)—四氢叶酸将(6R，S)—四氢叶酸溶解在乙酸中，用乙醚沉淀。实施例2(粉末X射线图)为了表征结晶(6S)—和(6R)—本文档来自技高网...

【技术保护点】
结晶（６Ｓ）－四氢叶酸。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：HR穆勒，M厄尔曼，R莫泽，T安曼，
申请(专利权)人：阿泼洛发公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]