一类抗血小板聚集肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一类抗血小板聚集的旋光性多肽类化合物，这类化合物由左旋或右旋的色氨酸、天冬酰氨、焦谷氨酸三种氨基酸组成，用于治疗与血小板聚集相关的心脑血管疾病，如缺血性中风、炎症、哮喘等相关的疾病。

【技术实现步骤摘要】
一类抗血小板聚集肽及其应用本专利技术涉及一种具有旋光性的多肽类物质及其在心脑血管中的应用，属医药化 工领域。
技术介绍
血小板具有特定的形态结构和生化组成，在正常血液中有较恒定的数量(如人 的血小板数为每立方毫米10 30万)，血小板的功能主要是促进止血和加速凝血，同 时血小板还有维护毛细血管壁完整性的功能。血小板聚集功能亢进对引起和加重心肌缺 血是非常重要的因素。血小板被启动发生聚集，除参与血栓形成外，聚集时TXA2水平 升高还可引起冠脉痉挛，引起微血栓，形成心肌微血管阻塞，使心肌微循环发生障碍。 血小板聚集性增高的疾病常见于心脑血管疾病，如冠心病、心肌梗死、心绞痛、脑梗 塞、缺血性中风及外周血管病等，还有高胆固醇血症、糖尿病和肾脏病等。抑制血小板 聚集功能对抑制动脉血栓形成、心脑血管疾病和各种血栓栓塞性疾病的防治都具有重要意义。孔毅(Toxicon，54(2009) 103-109)等在蛇毒中发现了三肽类化合物焦谷氨酸-天冬酰氨-色氨酸，研究了其药效，发现该化合物具有明显的抗血小板聚集作用和抗 血栓形成作用。氨基酸序列的改变和构型的改变会影响化合物的药效和半衰期，天然蛋白都是 由L型氨基酸构成的，L型氨基酸构建的自组装短肽具有较好的生物相容性，在体内被 L型酶降解。而D型氨基酸的自组装短肽一般不能被L型酶降解(Luo Z.，Zhao X., Zhang S.Macromol.Biosci.[J], 2008，8(8) 785-791),体内稳定存在的时间相对较长。 如细胞壁中含有的D氨基酸的细菌可以防止被蛋白水解酶消化掉；同时，含有D天冬 氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、亮氨酸等D型氨基酸的多肽，因具有抗菌活性而应用于临床 (Wakayama M, Yoshimune K, HiroseY, et al J.M ol.Catal. (B)，En.[J], 2003，23: 71 78)。本专利技术合成了旋光性的D和L型氨基酸组成的多肽类化合物，并研究了其作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一类具有旋光性的三肽化合物，特别是这些化合物具有抗 血小板聚集的作用。本专利技术的另一个目的是提供一类具有旋光性的三肽化合物，特别是采用固相合 成、柱分离的方法得到目标化合物。Fmoc固相合成是以Fmoc为保护基保护氨基酸，逐 步完成接肽反应的一种方法。由于脱Fmoc保护基以及将产物从树脂上切下时反应条件温 和，副反应少，所以Fmoc固相合成法已经被广泛采用。本专利技术以6种旋光性的氨基酸 即L-色氨酸[(L) Trp]、D-色氨酸[(D) Trp]、L-天冬酰氨[(L) Aot]、D-天冬酰氨[(D) Asn], L-焦谷氨酸[(L) Pyr]、D-焦谷氨酸[(D) Pyr]及其保护氨基酸为原料，选用2-氯三苯甲基氯树脂(2-Chlorotrityl chloride resin)，Fmoc固相合成法为技术基础，从C端(羧基端)向N端(添加氨基酸)进行系列多肽的合成。本专利技术的另一个目的是提供一类具有旋光性的三肽化合物，特别是将这些化合 物制成临床需要的口服制剂或注射剂。技术方案本专利技术采用固相合成的技术，选用旋光性的氨基酸及其保护氨基酸为原料合成 了多肽，将这些多肽加入到富血小板血浆，同时加入诱导剂，测定其聚集率，发现本发 明的多肽化合物都具有较强的抗血小板聚集功能。一种具有下式(1)的含有三个氨基酸序列的多肽，或其药学上可接受的盐[Xai]-[Xa2]-[Xa3] (1)当Xa1 为(D)Pyr 时，Xa2 为(L)Aot 或(D) Asn，Xa3 为(L)Trp 或(D)Trp ；或者，Xa2为(L)Trp 或(D) Trp，Xa3 为(L)Asn 或(D)Asn ；当Xa1S (L)Pyr 时，Xa2 为(L) Trp 或(D) Trp，Xa3 为(L) Aot 或(D)Asn;或者，Xa2为(D) Aot，Xa3 为(L) Trp 或(D)Trp;或者，Xa2S(L)Asn,Xa3 为(D)Trp;其中(L)和(D)分别代表左旋和右旋氨基酸。其多肽类化合物为(D) Pyr- (L) Trp- (D) Asn ； (D) Pyr- (D) Trp- (L) Asn ；(D) Pyr- (L) Trp- (L) Asn ；(D) Pyr- (D) Trp- (D) Asn ；(D) Pyr- (L) Asn- (L) Trp ；(D) Pyr- (D) Asn- (D) Trp ；(D) Pyr- (L) Asn- (D) Trp ；(D) Pyr- (D) Asn- (L) Trp ；(L) Pyr- (D) Trp- (D) Asn ；(L) Pyr- (L) Trp- (L) Asn ；(L) Pyr- (L) Trp- (D) Asn ；(L) Pyr- (D) Trp- (L) Asn ；(L) Pyr- (D) Asn- (D) Trp ；(L) Pyr- (D) Asn- (L) Trp ；(L)Pyr-(L)Asn-(D)Trp ；其中(L)和(D)分别代表左旋和右旋氨基酸。上述化合物具有抗血小板聚集的作用，并能用于治疗与血小板聚集相关的心脑 血管疾病，如缺血性中风、炎症、哮喘等相关的疾病上述多肽化合物加入适宜药用辅料，制成适用于临床的药物制剂。药物制剂 为片剂、口腔崩解片、分散片、缓控释片、胶囊、缓控释胶囊、冻干粉针、无菌分装粉 针、溶媒析晶粉针。有益效果本专利技术所涉及的多肽化合物结构中含有手性氨基酸，是一种新型的具有旋光性的多肽类化合物。本专利技术提供的旋光性三肽化合物具有很强的抗血小板聚集的作用，且 活性强于已公开的蛇毒中发现了三肽类化合物焦谷氨酸_天冬酰氨_色氨酸。实施方式合成过程中需要用到缩合试剂、切割试剂进行肽的链接及保护基团的除去，分 别如下所述。缩合试剂1)苯并三唑-N，N, N' , N'四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)(分子量379.3)2)羟基-苯并三唑(HOBt)3) 二异丙基乙胺(DIEA)(分子量129.25)切割试剂1)三氟乙酸(TFA)2)三异丙基硅烷(TIS)具体实施例1 合成(D) Pyr- (L) Asn- (L) Trp(1)、树脂的活化称取1.0lg2-氯三苯甲基氯树脂放入小烧杯中，加入DMF溶胀30min后倒出一 半体积的DMF加入等体积的DCM再溶胀30min，倒入砂心漏斗后抽滤干.树脂的活化过 程中配制脱保护液取6ml呱啶(Pip)倒入棕色瓶中，后加入24mlDMF，混合放置。 (2)、Fmoc- (L) Trp (Boc)-树脂的制备称Fmoc-(L) Trp (Boc)-OH 1.74g用DMF溶解，溶解完全后。反应装置连好后通 氮气，将Fmoc-Trp(Boc)-OH的DMF溶液加入到含树脂的砂心漏斗中，后再加入DIEA 1.2ml，室温反应2小时。(3)、脱保护将反应后的树脂滤干，用DMF洗三次，抽滤干，加入脱保护试剂，反应 40min。反应完全后滤去反应液，将树脂用DMF洗涤。此间称Fmoc-(L) Aot(Trt)-OH 1.97g,缩合剂 HBTU1.44g(3.80mmol)，用 DMF 约 4ml 溶 lOmin。(4)、接第二个氨基酸(L)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有下式（１）的含有三个氨基酸序列的多肽，或其药学上可接受的盐：［Ｘａ↓［１］］－［Ｘａ↓［２］］－［Ｘａ↓［３］］　（１）当Ｘａ↓［１］为（Ｄ）Ｐｙｒ时，Ｘａ↓［２］为（Ｌ）Ａｓｎ或（Ｄ）Ａｓｎ，Ｘａ↓［３］为（Ｌ）Ｔｒｐ或（Ｄ）Ｔｒｐ；或者，Ｘａ↓［２］为（Ｌ）Ｔｒｐ或（Ｄ）Ｔｒｐ，Ｘａ↓［３］为（Ｌ）Ａｓｎ或（Ｄ）Ａｓｎ；当Ｘａ↓［１］为（Ｌ）Ｐｙｒ时，Ｘａ↓［２］为（Ｌ）Ｔｒｐ或（Ｄ）Ｔｒｐ，Ｘａ↓［３］为（Ｌ）Ａｓｎ或（Ｄ）Ａｓｎ；或者，Ｘａ↓［２］为（Ｄ）Ａｓｎ，Ｘａ↓［３］为（Ｌ）Ｔｒｐ或（Ｄ）Ｔｒｐ；或者，Ｘａ↓［２］为（Ｌ）Ａｓｎ，Ｘａ↓［３］为（Ｄ）Ｔｒｐ；其中（Ｌ）和（Ｄ）分别代表左旋和右旋氨基酸。

【技术特征摘要】
1.一种具有下式(1)的含有三个氨基酸序列的多肽，或其药学上可接受的盐 [Xai]-[Xa2]-[Xa3] (1)当 Xa1 为(D)Pyr 时，Xa2 为(L)Asn 或(D) Aot，Xa3 为(L)Trp 或(D)Trp ； 或者，Xa2 为(L)Trp 或(D) Trp，Xa3 为(L)Asn 或(D)Asn ； 当 Xa1 为(L)Pyr 时，Xa2 为(L)Trp 或(D) Trp，Xa3 为(L)Asn 或(D)Asn ； 或者，Xa2S (D) Asn，Xa3 为(L) Trp 或(D)Trp; 或者，Xa2S(L)Asn, Xa3 为(D)Trp; 其中(L)和(D)分别代表左旋和右旋氨基酸。2.如权利要求书1所述的多肽，其多肽类化合物为 (D) Pyr- (L) Trp- (D) Asn ；(D) Pyr- (D) Trp- (L) Asn ； (D) Pyr- (L) Trp- (L) Asn ； (D) Pyr- (D)...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦引林，孔毅，
申请(专利权)人：秦引林，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]