抗癌免疫疗法的应激蛋白-肽复合物制造技术

本发明专利技术公开的是一种抑制哺乳动物体内肿瘤增殖的方法。该方法包括以下步骤：（ａ）从预先从哺乳动物中得到的肿瘤细胞中分离应激蛋白－肽复合物，（ｂ）将分离的应激蛋白－肽复合物回输给哺乳动物，以刺激哺乳动物对分离出该复合物的肿瘤的免疫应答。在本发明专利技术实践中具有特殊应用的应激蛋白－肽复合物包括Ｈｓｐ７０－肽、Ｈｓｐ９０－肽和ｇｐ－９６肽复合物。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
抗癌免疫疗法的应激蛋白—肽复合物专利
本申请总体上涉及癌症治疗领域，具体地说，涉及人癌的免疫疗法。专利技术背景人们已经发现，预先免疫近交繁殖的小鼠和大鼠，可以抵抗由同一遗传背景的小鼠和大鼠而来的肿瘤。(Gross(1943)癌症研究3：323-326；Prehn等(1957)国家癌症学会杂志18：769-778；Klein等(1960)癌症研究20：1561-1572；Old等(1962)纽约科学院年刊101：80-106；综述见Srivastava等(1988)现代免疫学9：78-83)。这些研究不仅指出接种没有活性的癌细胞的小鼠可以对后续的活性癌细胞的攻击产生免疫力，并且表明肿瘤特异性抗原的存在。进一步的研究揭示了这种预防性诱导免疫力的现象具有肿瘤特异性。尽管小鼠能对用来免疫它们的瘤细胞产生特异的免疫力，它们对于其它无关的肿瘤的攻击仍然敏感。(Basombrio(1970)癌症研究30：2458-2462，Globerson等(1964)国家癌症学会杂志32：1229-1243)。癌细胞免疫原性的证实引起了对能够引发对肿瘤攻击产生抗性的癌源分子的研究。一般的途径是分级分离癌细胞来源的蛋白，然后分别检测它们使小鼠对该级分由之制备的癌产生免疫的能力(Srivastava(1988)同上；Old(1981)癌症研究41：361-375)。利用这种方法已鉴定出一些蛋白，但是，这些蛋白中大部分与一类被称作应激诱导蛋白或应激蛋白的蛋白相关(Lindquist等(1988)遗传学综述年刊22：631-677)。由于应激蛋白在性质上是最高度保守和最丰富的蛋白之一，因此，看来它们并不是肿瘤特异性抗原的候选物。随后发现应激蛋白以非共价形式与多种肽类结合，形成应激蛋白--肽复合物。(Gething等(1992)自然355：33-45；Lindquist等(1988)同上；Young(1990)免疫学综述年刊8：401-420；Flynn等(1991)自然353：726-730)。研究显示，在用ATP进行处理时应激蛋白--肽复合物会失去其免疫原性。(Udono等(1993)实验医学杂志178：1391-1396)。这种处理能把应激蛋白-肽复合物解离成应激蛋白和肽两部分。考虑到从正常细胞-->和肿瘤细胞得到的应激蛋白的结构没有差别，并且应激蛋白以ATP依赖方式与多种肽类相结合，这种应激蛋白-肽复合物的抗原性似乎并不是应激蛋白本身形成的，而是由与应激蛋白结合的肽形成的。因此，本专利技术的一个目的是为治疗性地抑制哺乳动物肿瘤的增殖提供一种新的方法。这里所描述的方法不要求对特异性抗原决定簇进行分离和表征，并且，可以为制备和利用对抑制哺乳动物特异性的预定肿瘤增殖有效的免疫原性组合物提供一种更快的方法。本专利技术的这一目的和其他的目的及特征在下面的说明和权利要求中是显而易见的。专利技术概述应激蛋白与分离出它们的细胞的抗原性肽相伴随这一发现，为容易地分离预选肿瘤的抗原性肽提供了一种方法。一旦分离完毕，这种应激蛋白-肽复合物又被回输给分离出它的动物，以引发对原有肿瘤的免疫应答。因此，这种方法不必对肿瘤特异性抗原进行分离和表征，可以使技术人员容易地制备出对抗预选肿瘤的有效的免疫原性组合物。广义地讲，本专利技术为抑制哺乳动物中预选肿瘤的增殖提供了一种方法。这种方法包括给治疗中的哺乳动物施用一种组合物，该组合物包含与应激蛋白-肽复合物联合应用的药用载体。这种复合物是从预先从哺乳动物切下的肿瘤细胞中得到的，其特征为可以有效地启动哺乳动物对分离出该复合物的肿瘤细胞的免疫应答。随后将这种复合物以足够的数量回输给哺乳动物，以引发哺乳动物对肿瘤细胞的免疫应答，由此，可以抑制哺乳动物中任何仍然残存的肿瘤细胞的增殖。预计这种方法可以和其它常规的癌症治疗方法(包括，例如，外科手术、放疗、化疗)联合应用。例如，技术人员可以在手术切除癌组织之后，用本文描述的方法，从切除的组织中分离应激蛋白-肽复合物并把这种复合物回输给哺乳动物。这种复合物可随后诱导机体对在外科手术中没有被切除的仍然存在的肿瘤细胞产生特异性免疫应答。当原发肿瘤转移到身体的不同部位时，这种方法对癌症治疗是适合的。-->本文所用的术语“肿瘤”，可以理解为细胞的任何一种异常或不可控制的生长，这种生长可导致对正常组织的侵害。可以预计这一术语也包括已转移了的异常生长或生长失控的细胞，即已经从身体原发部位(即原发肿瘤)扩散到空间上与原发部位不同的继发部位的异常细胞。本文所用的术语“应激蛋白”，可以理解为任何一种满足下列条件的细胞蛋白：当细胞受到应激性刺激时，它在细胞内的浓度升高，它能够结合其它的蛋白或肽，在ATP存在或pH值低的情况下能够释放结合的蛋白或肽。应激性刺激包括但不仅限于热休克、营养缺乏、代谢紊乱、氧基和细胞内病原体的感染。第一种要鉴定的应激蛋白是热休克蛋白(Hsp)。正如它的名字所暗示的，Hsp典型地是由对热休克产生应答的细胞诱导产生的。目前已经鉴定出的哺乳动物三个主要Hsp家族，包括Hsp60、Hsp70和Hsp90。数字反映了应激蛋白以千道尔顿为单位的近似分子量。每个家族的成员都高度保守，见例如，Bardwell等(1984)美国国家科学院院刊81：848-852；Hickey等，(1989)分子细胞生物学9：2615-2626；Jindal(1989)分子细胞生物学9：2279-2283，其公开内容在此引入作为参考。到目前为止，鉴定出的哺乳动物Hsp90家族成员包括胞液Hsp90(亦称作Hsp83)和内质网对应物Hsp90(亦称作Hsp83)、Hsp87、Grp94(亦称作ERp99)和gp96。见例如(Gething等(1992)自然355：33-45，其公开内容在此引入作为参考。到目前为止，鉴定出的Hsp70家族成员包括胞液Hsp70(亦称作p73)和Hsc70(亦称作p72)；内质网对应物Bip(亦称作Grp78)；线粒体对应物Hsp70(亦称作Grp75)，Gething等(1992)同上。到目前为止，哺乳动物Hsp60的家族成员仅仅在线粒体中鉴定出。Getnhing等(1992)同上。此外，已经发现Hsp60、Hsp70和Hsp90家族由在氨基酸序列上与应激蛋白相关(例如有大于35％的氨基酸序列一致)的蛋白组成，但是他们的表达水平并不因应激性刺激而改变。因此，可以预计在这里所用的应激蛋白的定义，包括其他蛋白，其突变蛋白，类似物和变异体，与这三个家族的成员最少具有35％-55％，优选55％-75％，最优选75％-85％的氨基酸序列一致性，这三个家族的成员在细胞内的表达水平-->在对应激性刺激应答时受到激发。这里所用的术语“肽”，可理解为任何一种从哺乳动物肿瘤细胞分离到的以应激蛋白-肽复合物形式存在的氨基酸序列。这里所用的术语“免疫原性应激蛋白-肽复合物”，可以理解为任何一种能够从哺乳动物肿瘤细胞分离并且包含与肽非共价结合的应激蛋白的复合物。这种复合物又以有效地引发哺乳动物对分离出它的肿瘤细胞的免疫应答为特征。这里所用的术语“免疫应答”，可以理解为哺乳动物在抗原刺激下产生的任何一种目的为从哺乳动物中清除抗原的细胞过程。这种免疫应答典型地由一种或多种性质上属于淋巴细胞和/或吞噬细胞的细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制哺乳动物体内肿瘤增殖的方法，该方法包括：给荷瘤哺乳动物施用一种组合物，该组合物包含：（ａ）从肿瘤细胞分离出的免疫原性应激蛋白－肽复合物，该复合物可以有效地在哺乳动物体内起始对肿瘤的免疫应答，和（ｂ）药用载体，所用的量 足以在哺乳动物体内引发对肿瘤的免疫应答，由此抑制肿瘤的增殖。

【技术特征摘要】
US 1994-9-30 08/315,8921.一种抑制哺乳动物体内肿瘤增殖的方法，该方法包括：给荷瘤哺乳动物施用一种组合物，该组合物包含：(a)从肿瘤细胞分离出的免疫原性应激蛋白-肽复合物，该复合物可以有效地在哺乳动物体内起始对肿瘤的免疫应答，和(b)药用载体，所用的量足以在哺乳动物体内引发对肿瘤的免疫应答，由此抑制肿瘤的增殖。2.权利要求1的方法，其中复合物中的应激蛋白是Hsp70、Hsp90或gp96。3.权利要求1的方法，其中复合物中的肽与应激蛋白非共价结合。4.权利要求1的方法，其中施用复合物起始T细胞介导的免疫应答。5.权利要求4的方法，其中施用复合物起始细胞毒T细胞介导的免疫应答。6.权利要求1的方法，其中施用给哺乳动物的复合物的剂量范围是大约1-1000微克复合物/公斤哺乳动物体重/次施用。7.权利要求6的方法，其中所说的剂量范围是大约100-250微克复合物/公斤哺乳动物体重/次施用。8.权利要求1的方法，其中复合物被重复地施用给哺乳动物。9.权利要求1的方法，其中组合物与细胞因子一起施用给哺...

【专利技术属性】
技术研发人员：PK斯里瓦斯塔瓦，
申请(专利权)人：纽约城市大学辛乃山医科学校，
类型：发明
国别省市：US[美国]