网地藻目提取物、其制备方法和含有这类提取物的组合物技术

本发明专利技术涉及生物学领域，更精确地说是涉及海洋生物活性物质。本发明专利技术还涉及从网地藻目类植物提取的并且用其分析的特性来表征的新型活性物质。本发明专利技术还涉及制备这些新型物质的方法，以及含这类物质的药物、化妆品和／或者食物的组成。本发明专利技术的生物活性物质使用目的在于获得准备用于改善动物和人组织细胞外基质糖基化成分的合成。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
网地藻目提取物、其制备方法和含有这类提取物的组合物本专利技术涉及生物学领域，更精确地说是涉及来自海洋生物的活性物质。本专利技术涉及从网地藻目类植物提取的新型生物活性物质、其制备方法和含这类提取物的组合物。本专利技术的组合物用于改善动物和人组织细胞外基质(MEC)糖基化组分的合成。网地藻目类植物一词，更具体地说是能够以所谓霰石的的结晶形式，在其叶状体上固定、缩合、沉淀或合成碳酸钙的植物。所述植物一词可以指干燥或新鲜的、粉碎的或未处理的植物。用于提取本专利技术的生物活性物质的植物是褐藻类，岩藻纲，网地藻目，网地藻科类。只有一些属是属于网地藻目类，它们是团扇藻属、圈扇藻属或网地藻属。团扇藻属包括大多数常见的种。例如，可以在地中海沿岸发现的种pavomca、boyana(P.tenuis)和boergesenii，在太平洋沿岸的(不包括已经提到的)：树状团扇藻、南方团扇藻、boryana、caulens、三层团扇藻、concrescens、大团扇藻、durvillei、elegans、fernandeziana、fraseri和gymnospora，以及在大西洋沿岸的：glabra、haitensis、distromatica和dubia。还有印度洋的典型种。这些植物的特征之一是在其叶状体上固定一层碳酸钙霰石或在叶状体表面有正交晶型碳酸钙。该特征通过从这些植物得到的粉末的X-射线衍射分析来检测。X-射线衍射表明在2θ角，这些植物有明显的强峰：-3.393°，-3.268°，-2.699°，-2.682°，-2.371°，-2.336 °(双重峰)，-1.976 °和-1.877°(双重峰)。这些衍射角是霰石的特征。本专利技术涉及新型生物活性物质，它们改善动物和人组织细胞外基质糖基化组成的合成，而且是从网地藻目类植物中提取的。这些新型生物活性物质的特征在于是多环结构，所述多环具有直链或支链的含有4-10个碳原子的侧链，且该侧链具有一个或两个双键。还将进一步用更精确的分析数据表征所述新型物质。-->本专利技术还涉及从网地藻目类植物中提取所述生物活性物质的方法。第一步，在收集后，干燥网地藻目类植物，如果可能的话，荫干以保持其药理学特性。通过日晒缓慢干燥会导致物质的活性不高，而且也不稳定。因此优选使用更适宜的方法来干燥，其主要条件是可以得到活性物质。出于该原因，通过通风而不是加热来干燥粉碎的或未处理的植物，由此得到深栗色的植物原料，在其上白色碳酸钙粉层对比强烈。另一种方法，尽管不太经济，但令人满意：该方法包括高度沥干植物中的水分，然后真空干燥。冻干粉碎的或未粉碎的植物，以有利的方式得到无水产物。后两种技术可以得到很脆并易还原成粉末的深棕绿色物质，有利于用溶剂提取以得到生物活性物质。高度干燥的植物的优点是可以得到保持很好的植物原料(不含水)，从中可以提取一种或多种稳定的或不稳定的活性物质，而不会因极性溶剂的存在而受到影响。此外，更容易将完全干燥的植物粉碎成粉末。制备生物活性物质的方法的特征在于使网地藻目类植物干燥和/或冻干，然后粉碎，接着用选自下列的有机溶剂将植物原料提取一次或多次以得到植物的有机提取物：低级链烷醇(乙醇……)、脂肪酮(丙酮……)、链烷烃(戊烷、己烷，庚烷……)、环烷烃(环己烷……)、卤代溶剂(氯仿、二氯甲烷……)、芳族溶剂、酯(乙酸乙酯……)、醚等，通过蒸发掉溶剂来干燥有机提取物，通过液/液接触、通过低压或高压柱色谱或高效液相色谱，连续完成一个或多个纯化步骤，从而纯化干燥的有机提取物以得到网地藻目类植物的活性物质。可以单独或组合使用有机溶剂。通常，可以使用可与水混溶的有机溶剂，以及所有能够从植物叶状体中提取活性物质的溶剂。优先选用挥发性溶剂，因为可以得到不含溶剂的生物活性物质。事实上，可以从载体，如纤维素或其衍生物，硅胶，高分子量链烷烃如石蜡，两性溶剂如聚乙二醇(PEG)，丙二醇或惰性产物如甘油等上蒸发掉溶解生物活性物质的挥发性溶剂。优选的有机溶剂是丙酮或乙醇。所用的比例优选为每5ml溶剂溶解1g干燥的植物原料，植物原料和有机溶剂的接触时间优选为4-5天。-->但是，在浸渍过程中，干燥原料与溶剂的比例很不同会得到良好的结果。对于相同量干燥原料所用的总量可以从1到50。此外，有机溶剂与植物原料的接触时间为12小时到5天。另外，尽管使用更困难，但用氨介质进行含水提取会得到满意的结果。为了完成生物活性物质的提取，不需用所选的溶剂浸渍植物原料，可以使溶剂连续在粉末上通过(渗流)。调节流速并浓缩提取物足以得到具有所选活性的溶液。在本专利技术中，在干燥和/或冻干并粉碎后，通过使植物与丙酮以每5ml丙酮1g原料的比例与丙酮接触，可以一次或多次提取网地藻目类植物。通过蒸发掉溶剂来干燥丙酮提取物，然后通过下列纯化步骤来纯化。第一个纯化步骤是通过液/液接触而完成的。将在甲醇/水混合物中的干燥丙酮残留物或提取物与己烷接触。在第二步，在浓缩和用水稀释后，使水-甲醇相与醚接触。用该方法，最后的醚相是有生物活性的。第二个纯化步骤是用低压柱色谱表征的。所用的载体是Sephadex LH20型凝胶。用氯仿/甲醇进行梯度洗脱。用97/3(体积/体积)的氯仿甲醇洗脱生物活性组分。在用氯仿/甲醇70/30混合物柱洗的过程中，洗脱了残留的第二活性组分。用半制备性高效液相色谱(HPLC)完成下列纯化步骤。柱的大小为250mm(长)和10mm(直径)。所用的载体是：C18接枝的二氧化硅和二醇接枝的二氧化硅。流速为8ml/分。在二醇接枝的二氧化硅载体上，洗脱剂为92/8的己烷/异丙醇，在20-25分钟和35-40分钟之间洗脱出活性组分。在C18接枝的二氧化硅载体上，洗脱剂为85/15的乙腈/水，在15-17分钟之间洗脱活性组分，或洗脱剂为85/15/0.05的乙腈/水/乙酸，在17-20分钟和30-40分钟之间洗脱活性组分。在这些纯化步骤结束时，得到黄绿色的生物活性物质。用各种分析方法(UV，IR，NMR谱，薄层色谱……)来表征从网地藻目类植物提取的一种或多种生物活性物质。在甲醇中记录的最终活性组分的UV谱的特征在于有数个吸收带，-->分别位于202nm(在228nm有一肩峰)，在260-270nm之间，400-460nm之间和630nm。在这些纯化步骤结束时，还进行了带有化学显色的薄层色谱(TLC)(所用的显色剂为硫酸茴香醛、硫酸香草醛、磷钼酸盐和硫酸乙醇溶液)。显色后，出现了数个斑点。前沿的保留时间为Rf＝0.15和0.90，0.95，相当于源自在相同条件下完成的制备性TLC的生物活性区，即用二醇接枝的二氧化硅，用85/15己烷/异丙醇洗脱的TLC板。质谱、IR谱及质子NMR谱或13CNMR谱同样可以完全提供根据本专利技术从网地藻目类植物提取的新型生物活性物质的结构信息。13CNMR谱分析特别表明：该多环结构带有含4-10个碳原子的侧链，该侧链为直链或支链形式且带有一个双键。通过在5ml纯乙醇中将1g干燥的植物原料浸渍或浸提12小时，同样可以从网地藻目类植物中提取生物活性物质。乙醇是很容易被细胞接受的溶剂，而且与细胞浸没在其中的含水营养液容易完全可混溶。然后完成下列纯化步骤。在正常二氧化硅柱上完成高压色谱。将20本文档来自技高网...

【技术保护点】
从网地藻目类植物提取的改善动物和人组织细胞外基质糖基化组分合成的生物活性物质。

【技术特征摘要】
FR 1996-1-18 96/005221从网地藻目类植物提取的改善动物和人组织细胞外基质糖基化组分合成的生物活性物质。2根据权利要求1的生物活性物质，其特征在于它们有一多环结构，所述多环结构具有直链或支链侧链，其上携带4-10个碳原子，并具有一个或多个双键。3根据权利要求1或2的生物活性物质，其特征在于它们有下列分析数据：-在二醇接枝的二氧化硅载体半制备性高效液相色谱中的保留时间为20-25分钟和35-40分钟之间，洗脱剂为己烷/异丙醇，比例为92∶8；-在C18接枝的二氧化硅半制备性高效液相色谱中的保留时间为15-17分钟之间，洗脱剂为乙腈/水，比例为85∶15；-在C18接枝的二氧化硅半制备性高压液相色谱中的保留时间为17-20分钟和30-40分钟之间，洗脱剂为乙腈/水/乙酸，比例为85∶15∶0.05；-普通硅胶柱高压色谱中的保留时间为6.9-8.5分钟，洗脱剂为庚烷/醚，比例为90∶10；-在C18-接枝的硅胶柱高压液相色谱柱中的保留时间为16-18分钟，洗脱剂为甲醇/水，比例为80∶20。4根据权利要求1-3之一的生物活性物质，其特征在于其在甲醇中的UV谱有数个吸收带，分别位于202nm，在228nm有一肩峰，在260-270nm之间，400-460nm之间和630nm，在薄层色谱化学显色(硫酸茴香醛、硫酸香草醛、磷钼酸盐、硫酸/乙醇)后，前沿的保留时间为0.15，0.90，0.95。5根据权利要求1-4之一的生物活性物质，其特征在于将它们吸附在惰性矿物质或有机材料上，然后去溶剂化。6  制备权利要求1-4之一的生物活性物质的方法，其特征在于将网地藻目科的植物干燥...

【专利技术属性】
技术研发人员：G古铁雷斯，
申请(专利权)人：特克辛芬尼有限公司，拉法尔实验室，
类型：发明
国别省市：FR[法国]