用自身反应性物质产生一种用于诊断细胞介导的疾病或细胞介导的疾病的体质的物质的应用，其中该物质被皮内给药，诊断的根据是在给药部位是否出现阳性反应。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用自身反应性物质产生一种用于诊断影响免疫系统的细胞介导的疾病或细胞介导的疾病的体质的物质。近年来，对诸如类风湿性关节炎和少年糖尿病(IDDM)这类自身免疫性疾病的产生过程中的分子关系的解释已有了迅速的进展，而且已经出现了对这类疾病的早期诊断和随后的治疗的具体的应用。目前已经证实，在这类疾病的产生过程中，除了遗传的疾病体质外，环境因素也起了一定的作用。在遗传的危险因素方面，例如在IDDM中，只有MHC II型抗原的一些等位基因与这类疾病密切相关。因此可以通过分析这些等位基因而为IDDM定义一个易感人群(如参见Thomson等人，J.Hum.Genet.43(1988)，799-816或Todd等人，Nature 329(1987)，599-604)。在IDDM产生过程中的环境因素可能是外源的免疫原性的活性肽序列。在这方面已经对病毒抗原进行了讨论，它们与内源性结构有部分同源性。在特殊情况下，尤其是在出生后的一段时间，通过食物而被吸收的抗原如牛血清白蛋白能够引起免疫反应，由于与内源性结构的同源性，这种反应会引起一个自身攻击性的过程。在IDDM中的发病过程中，典型的现象就是由细胞毒性淋巴细胞引起的胰脏β细胞的逐渐破坏。这一过程远远早于葡萄糖代谢被破坏这一现象变得明显之时。当糖尿病的症状可被检测到时，80％以上的β细胞已经被破坏了。因此，在较早的时期在易感人群中检测到这些自身攻击性T细胞就显得十分地重要，这样就能够为被感染的人提供及时的治疗。目前已经证实，在自身免疾性疾病中，内源性组织的破坏在开始时进行得十分缓慢。在这一过程的开始阶段，自身攻击性T细胞可能只识别一种或几种自身抗原。在Kaufman等人(Nature 368(1993)，69-72)和Tisch等人(Nature 368(1993)，72-78)的报道中，I型糖尿病的动物模型(NOD小鼠)显示，当这种小鼠自然发生糖尿病时，初始的T细胞介导的自身免疫反应是针对谷氨酸脱羧酶的。在该过程的初始阶段，在NOD小鼠体内只在谷氨酸脱羧酶(GAD)的C-末端识别1至2个表位。上面已经提到，葡萄糖代谢的改变在这一阶段还不能被检测到，而此时perinsulitis已经能够被检测到了。只有当疾病进一步发展时，通过自身攻击性T细胞来识别的GAD的肽的谱才能变得更宽。一旦糖尿病已经明显，也就可以检测到预先活化的T细胞，它们对抗其它的岛细胞抗原，例如外周蛋白、热激蛋白HSP65和羧肽酶H。有证据表明，在人中针对GAD的免疫反应也与I型糖尿病的产生有因果关系。因此举例来说，在大约80％的前期糖尿病中可以检测到针对GAD的自身抗体，尽管人们估计这些自身抗体不是主要的病原。而且有人推测在I型糖尿病中T淋巴细胞对胰脏β-细胞有逐步破坏。已经有一些研究小组(Harrison等.，J.Clin.Invest.89(1992)，1161；Honeyman等.，J.Exp.Med.177，(1993)，535)检测到了针对GAD的上述T淋巴细胞。这些小组发现的T淋巴细胞与GAD 67kd分子的肽片段反应，该片断含有氨基酸208至404。EP-A-0 519 469公开了得自人GAD 65kd分子的自身免疫反应多肽。这些多肽的氨基酸序列如下X-P-E-V-K-(T或E)-K-Z其中X是从1至10个氨基酸中选出的一个任选序列，Z是从1至8个氨基酸中选出的一个任选序列。欧洲专利申请号95 100 764.0中也提出了得自人GAD 65的自身反应肽序列以及一种含有这些肽的药物组合物。该申请还描述了使用这种药物组合物来产生一种物质，该物质被用来诊断影响免疫系统的疾病或疾病体质，或用来诊断肿瘤疾病或肿瘤疾病的体质。本专利技术的目的之一是提供一种用于免疫系统的细胞介导的疾病，特别是自身免疫性疾病的诊断方法，该方法一方面尽可能地减少病人的不适感，另一方面能够进行快速和可靠的诊断。该目的是通过用自身反应性物质产生一种用于诊断细胞介导的疾病或细胞介导的疾病的体质的物质实现的，其中该物质被皮内给药，诊断依据是在给药部位是否出现阳性反应。本专利技术的诊断方法与目前市场上可得到的方法不同，目前使用的方法被用于细胞介导免疫的一般性检测，不同之处在于，这些检测使用了病人已经接触过的外源性抗原，例如纯化的蛋白质衍生物(PPD)、破伤风类毒素、念珠菌属(Candida)等。这些检测被用于确定被检测者的免疫系统的一般状态。免疫系统的细胞介导病没有被检测。在另一个被广泛用来确定变应性反应的检测，例如穿刺(prick)检测中，抗原不是在皮内给药。不是由T细胞介导的阳性反应可以在四小时内被检测到，其特征是表面出现肿胀，而不是出现结节。本专利技术提供了一种用于在体内检测针对自身反应性物质的细胞介导免疫反应的发生的方法。这种细胞介导免疫反应显示了免疫系统的特定疾病，特别是自身免疫性疾病或这类疾病的体质的存在。另外，细胞介导免疫反应还显示肿瘤疾病或其体质的存在。适合于本专利技术方法的自身反应性物质或自身抗原是天然、合成或重组物质，例如核酸、脂类、糖类、多肽、蛋白质、肽类以及它们的复合物，例如肽与诸如MHC分子或肽结合衍生物这样的多肽所形成的复合物。另外的合适的自身反应物质是特定的免疫原性表位、片断、类似物、拟形物或例如通过化学修饰而产生的衍生物以及上述这些物质的混合物。可将自身反应性物质原样给药或以载体结合形式给药，例如以脂肽形式给药。自身反应性物质可被单独给药或与附加的物质，例如附加的刺激组分或佐剂一同给药。通过重组DNA技术或例如肽的固相合成的合成方法，可以由天然来源制得自身抗原。在内源性抗原方面，除了自身反应物质外，还可以使用那些尽管是外源性抗原但与自身抗原有免疫学关系的自身反应物质。这类外源抗原的例子就是与得自内源性蛋白质的自身反应性肽序列有同源性的肽。具体的例子有具有序列L-V-Y-P-G-P-I-P-N(氨基酸60-68)的得自牛β-酪蛋白A的肽，它与内源性葡萄糖转运蛋白GLUT-2在序列Q-I-G-P-G-P-I-P-W(氨基酸412-420)区域中有同源区的部分；具有序列K-V-K-I-L-P-E-V-K-E-K-H-E(氨基酸33-45)的得自柯萨基病毒蛋白质P2-C的肽，它与谷氨酸脱羧酶在序列R-F-K-M-F-P-E-V-K-E-K-G-M(氨基酸155-167)区域中有同源性。本专利技术的方法包括将不同的自身抗原在皮内给药并确定在给药部位是否发生局部的阳性细胞反应。该阳性反应在T细胞介导的免疫反应所特有的时刻进行确定，其确定时间优选是在给药至少24小时之后，更优选是在给药后的24小时至1周之内，最优选是在给药后的40-80小时之间。阳性反应优选地包括在给药部位出现肿块，可以通过目测或/和触诊对其进行定性确定，也可以通过诸如超声波或照相的方法对其进行定量测定。在另一方面，还可以确定阳性反应的产物，例如诸如γ-干扰素的细胞因子，它是由诸如白细胞的浸润细胞在给药部位释放的。本专利技术的方法尤其适合于诊断自身免疫性疾病或自身免疫性疾病的体质。举例来说，可用本专利技术的方法诊断的自身免疫性疾病有糖尿病，尤其是I型糖尿病(IDDM)、多发性硬化、类风湿性关节炎、巴西多氏病、类风湿性脊柱炎、急性前眼色素层炎、Good-本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：J·安德尔，M·甘兹，P·斯塔尔，R·基恩施恩盖尔，G·G·朱恩格，P·波兹里，F·多尼，
申请(专利权)人：伯伦格曼海姆有限公司，
类型：发明
国别省市：
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