一种制备恒河猴局灶性脑缺血模型的方法技术

本发明专利技术提供了一种制备恒河猴局灶性脑缺血模型的方法，它是采用弹簧圈栓塞构建动物模型。本发明专利技术还提供了一种筛选治疗局灶性脑缺血的药物的方法，它包括如下步骤：ａ、采用恒河猴局灶性脑缺血模型；ｂ、将候选药物一起施用于恒河猴；ｃ、观察候选药物抑制恒河猴局灶性脑缺血模型的情况，并进行评分，评价潜在的治疗局灶性脑缺血的药物。本发明专利技术采用血管内介入弹簧圈栓塞法构建恒河猴局灶性脑缺血模型，有较高的稳定性，较高的安全性，较好的可重复性，是一种可良好模拟临床的简便易行的恒河猴局灶性脑缺血模型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及恒河猴局灶性脑缺血模型的方法。
技术介绍
脑卒中是严重危害人类生命健康的疾病，是目前导致人类死亡的第二大病因，也 是成年人致残的一个主要原因。世界范围内大约2/3的卒中发生在发展中国家。在我国， 由于人口基数大，人口老龄化问题日益突出，卒中发病率逐年增加。卒中存活者中50%遗留 严重残疾，10%的患者需要长期专人护理，再加上昂贵的治疗费用，给社会和家庭带来沉重 的负担。最常见的卒中类型是缺血性脑卒中，约占所有卒中的80%。多年来人们一直致力 于缺血性卒中的脑损伤机制以及治疗措施的研究。但迄今为止，缺血性脑损伤机制尚未完 全探明，现有治疗的效果亦不尽人意，除卒中单元、抗血小板药物(如阿司匹林)和3小时 内t-PA静脉溶栓治疗有肯定疗效以外，其他治疗均无可靠证据说明其疗效。因此，进一步 探明缺血性脑损伤机制，探索其他有效安全的治疗措施是亟待解决的问题。无论是脑损伤机制的研究还是新治疗措施的探索，都离不开脑缺血动物模型。理 想的脑缺血动物模型应该具备接近临床、可重复性好、操作简便以及避免产生附带效应干 扰实验结果等特征。有文献报道局灶性脑缺血模型的建立方法，多是采用大鼠、家兔建模，如肖育华， 局灶性脑缺血模型的建立，《中国比较医学杂志》，2008年18卷10期，方法随机将26只新 西兰兔分成对照组与缺血组，利用三氯化铁溶液刺激实验组兔大脑中动脉，在缺血24h处 死，测定脑组织邸、Na+、K+、Ca2+含量，并测定脑梗死范围，观察模型建立的效果。李金国， 等，线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型的研究，《泰山医学院学报》，2008年4期，采用线栓 法制备局灶性脑缺血大鼠模型，采用的动物有鼠种和种系制作脑缺血模型选用的实验动物 有小鼠、大鼠、蒙古沙土鼠、猫、狗、猪、羊以及灵长类动物猕猴等，其中最为常用的是大鼠， 使用率超过90%。王晓云，兔大脑中动脉局灶件脑缺血樽型制作和ιΗ电子发射断层显像观 察，《中国脑血管病杂志》,2007年4卷1期，线栓法制作兔大脑中动脉局灶性脑缺血模型的 最适线栓头端直径，并采用正电子发射断层显像技术(PET)检查缺血脑组织葡萄糖代谢水 平的变化。非人灵长目动物在种属上与人类十分接近，其脑血管和脑组织对缺血的反应类似 于人类。用其构建的脑缺血模型最有可能模拟出人类缺血性脑损伤的疾病过程。因此，这 类动物可能是目前制作脑缺血模型的最佳选择。其中，以大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)缺血再灌注模型最为重要。既往的研究通过外科手术暴露MCA然后微血管夹 闭、气囊充气压迫等方式阻塞MCA，但术后并发症较多，限制了该模型的应用；近年来，随着 血管内介入诊疗技术的快速发展，该技术也被用于各种实验研究，目前已有采用血管内介 入法构建的局灶性脑缺血猴模型，但均存在梗死位置不恒定，模型建立后梗死灶大小和瘫 痪症状变化较大等不足，很难将该模型用于药物效果的评估。
技术实现思路
本专利技术的技术方案是提供了 。本专利技术提供了，它采用弹簧圈栓塞构建 动物模型。具体地，它包括如下步骤a、动物麻醉将恒河猴进行药物麻醉；b、脑缺血再灌注模型的建立采用Seldinger技术行经皮股动脉穿刺；成功后以 4F造影导管行主动脉弓上血管和脑血管造影了解颅内动脉走形情况；造影结束后，导管尾 端接Y型带阀接头，其侧臂带三通软连接管并与加压输液袋相连，持续滴入生理盐水以防 血栓形成；选择走形平直的一侧大脑中动脉，将微导管引至MCA Ml段中远端后释放出弹 簧圈，完全阻断一侧大脑中动脉中远端血流，之后退出支撑导丝；栓塞Ih后，撤出弹簧圈， 再次行超选择造影，证实MCA血流恢复，然后拔出微导管、动脉血管鞘，股动脉区局部压迫 20mino其中，b步骤是在DSA直视下进行血管内介入操作。本专利技术还提供了一种筛选治疗局灶性脑缺血的药物的方法，它包括如下步骤a、采用权利要求1-3的方法制备恒河猴局灶性脑缺血模型；b、将候选药物一起施用于恒河猴；C、观察候选药物抑制恒河猴局灶性脑缺血模型的情况，并进行评分，评价潜在的 治疗局灶性脑缺血的药物。本专利技术采用血管内介入弹簧圈栓塞法构建恒河猴局灶性脑缺血模型，有较高的稳 定性，较高的安全性，较好的可重复性，是一种可良好模拟临床的简便易行的恒河猴局灶性 脑缺血模型。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容 所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1.恒河猴脑缺血再灌注后不同时间神经功能评分结果图2-1为右MCA栓塞前经4F导管行右侧颈内动脉造影结果，可见右MCA显影良好 (图中白色箭头所示)图2-2为右MCA栓塞后经4F导管行右侧颈内动脉造影结果，可见右MCA的Ml中 远端未显影(图中黑色箭头所示)图2-3为弹簧圈退出后行超选择造影结果，显示Ml段中远端血供情况，可见M2段 及其远端血管显影良好(图中白色箭头所示)，证实血流再通。图3为缺血再灌注后，动物MCA0-004的3个连续扫描层面图像(轴位)。A图为 T2 FLAIR，可见异常高信号病灶，其分布与栓塞血管供血区一致；B图为DTI，仍可见右MCA 的Ml段中远端供血区内异常高信号病灶；图4 脑组织切片HE染色结果，其中，图4-1假手术组(HE染色，X 400)，图4_2模 型组(HE染色，X 400)，图4-3模型组(HE染色，X 400)，图4_4模型组(HE染色，X 400)具体实施例方式实施例1本专利技术动物模型的制备一、材料与方法(一 )实验动物成年恒河猴3只(雄性，4. 2 5. 6kg，3 4岁)，动物随机分为2组模型组(η =2)及假手术组(η = 1)。假手术组除不进行血管堵塞外，其余所有过程同模型组一致。( 二)实验试剂1.麻醉用药(1)速眠新⑵戊巴比妥钠(3%)(3)阿托品(Iml 0. 5mg)(4)麻黄素(30mg)；肾上腺素(Img)；氯化琥珀胆碱(IOOmg)；氯胺酮(IOOmg)；咪 唑安定(IOmg)；芬太尼(0. Img)；异丙酚(200mg)；菲克雪浓或贺斯1瓶(500ml/瓶)2.介入手术用药(1)欧乃派克(100ml 30g)(2)罂粟碱(30mg/lml)(3)肝素钠(1. 25 万 U)(4)尼莫地平(2Oml 4mg)(三)实验仪器设备1.介入手术设备(I)Philip Allura Xper FD20 血管造影系统(2)4F 导管(Cordis, a Johnson&Johnson Company)(3)微导管(Cordis, a Johnson&Johnson Company)(4)弹簧圈(Boston Scientific)2.磁共振检查设备GE Signa-excite 3. OT超导型磁共振成像系统3.动物监护仪器(1)心电监护仪(RM6240BD，成都仪器厂)(2)耳温计(IR1DA1，Microlife)(3)腕式血压计(EW3012，欧姆龙，日本)(4)麻醉机、监护仪(含心率、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备恒河猴局灶性脑缺血模型的方法，其特征在于：它是采用弹簧圈栓塞构建动物模型。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何俐，王莉，李宏霞，郑洪波，周沐科，郭建，陈宁，杨觅，曹文英，肖力，周东，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，成都华西海圻医药科技有限公司，国家成都中药安全性评价中心，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]