稳定的含TPO的冻干组合物制造技术

一种含血小板生成素（ＴＰＯ）的冻干组合物，其中含有ＴＰＯ蛋白和糖类作为可以药用的添加剂。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术背景1.专利
本专利技术涉及一种含有TPO蛋白的组合物，更具体地讲，涉及一种稳定的含TPO的冻干组合物。2.有关公开技术人TPO(血小板生成素)是一种作为Mpl配体克隆的蛋白，其为细胞因子受体超家族的一员(de Sauvage等，Nature(London)，Vol.369，pp.533-565(1994)；Bartley，T.D.等，Cell，Vol.77，pp.1117-1124(1994))。在患有血小板减少症的动物(包括人、小鼠和犬)的血清和血浆中可检测到Mpl配体，它与巨核细胞和血小板生成之间的关系已被证实。为了开发一种用于血小板减少症的治疗剂，本专利技术人已从血小板减少的大鼠的血浆中纯化了大鼠TPO，以能刺激大鼠骨髓中高度纯化的巨核细胞祖代细胞使之产生巨核细胞的活性为指示，而且，根据大鼠TPO的部分氨基酸顺序已成功地克隆了大鼠TPO cDNA和人TPOcDNA，从而通过重组DNA技术获得了大量的同源人TPO(H.Miyazaki等，Exp.Hematol.，Vol.22，p.838(1994))。由此成功获得的人TPO具有与上述作为人Mpl配体获得的因子相同的氨基酸顺序(见下述序列表的序列1)。本专利技术人业已发现，本专利技术的TPO能有效治疗血小板减少症，因为当给患有血小板减少症的小鼠使用所述人TPO时，观察到血小板的减少受到抑制，血小板生成改善而增多血小板和造血机能得到改善，所述小鼠由于使用抗癌剂或免疫抑制剂或通过辐射或BMT诱发了骨髓抑制症状。TPO是以极小的量使用，因为其活性高。即，通常根据症状、性别和服用途径，以0.05μg-1mg/kg体重至1mg/kg体重，优选0.5μg-50μg/kg体重的剂量，作为活性成分一般每日服用数次。因此，需要生产含有极少量TPO的药物制剂，提供可以完全阻止该活性成分活性降低的稳定的药物制剂。本专利技术人对可长时间保存的稳定TPO蛋白组合物的开发进行了研究。结果发现，在TPO蛋白中加入一种可以药用的糖类，接着进行冷冻干燥，可以显著改善TPO蛋白的稳定性；除所述糖类外，再加入表面活性剂可以进一步有效改善含TPO的冻干组合物之稳定性，并且可以改善该含TPO的冻干组合物在重新配药时的溶解性、进一步加入氨基酸或蛋白可以更有效地改善含TPO的冻干组合物的稳定性。本专利技术概述按照本专利技术，提供一种含TPO的冻干组合物，其中含有TPO蛋白和可以药用的糖类，并选择性地含有至少一种选自表面活性剂、氨基酸和蛋白一类的可以药用的添加剂。附图简介附图说明图1表示当加入糖类(甘露糖醇、乳糖、蔗糖或麦芽糖)时TPO蛋白的稳定性图解，其中，残余TPO％被用作TPO稳定性的指标。图2表示除所述糖类外再加入表面活性剂(多乙氧基醚20或多乙氧基醚80)时TPO蛋白的稳定性图解，其中，残余TPO％被用作TPO稳定性的指标。图3表示除所述糖类和表面活性剂外再加入氨基酸(精氨酸或甘氨酸)或蛋白(明胶)时TPO蛋白的稳定性，其中，残余TPO％被用作TPO稳定性的指标。本专利技术详细描述作为本专利技术中使用的TPO，可以使用一种具有序列1所示氨基酸序列的蛋白。制备TPO的方法没有特别的限制，但TPO制品是高度纯化的蛋白。具有序列1所示氨基酸序列加以部分修饰(通过取代、缺失、插入和/或加成)的氨基酸序列的蛋白也可以采用，只要其保留TPO活性即可。换句话说，也可以采用其氨基酸序列大体上与序列1所示氨基酸序列相同的蛋白。本文所说的“大体上与序列1所示氨基酸序列相同”是指“除序列1所示氨基酸序列外，也包括对序列1所示氨基酸序列进行部分取代、缺失、插入和/或加成而得到的氨基酸序列，只要其保留TPO活性即可”。本专利技术人业已证实，即使序列1所示氨基酸序列的C-末端一侧的氨基酸残基缺失直到位置152残基，或其N-末端一侧的氨基酸残基缺失直到位置6，该人TPO仍能保持其活性。举例说明的数据如表1所示。表1衍生物 TPO活性位置1-231+位置1-211+位置1-191+位置1-171+位置1-163+位置1-157+位置1-156+位置1-155+位置1-154+位置1-153+位置1-151+位置1-150位置7-163+位置8-163-位置13-231 -因此，本专利技术所用的TPO还包括具有相当于序列1所示氨基酸序列的位置7-151的氨基酸序列并具有TPO活性的蛋白。更具体地讲，可作为本专利技术TPO的例子包括分别含有序列1所示氨基酸序列的位置1-231、位置1-211、位置1-191、位置1-171、位置1-163、位置1-157、位置1-156、位置1-155、位置1-154、位置1-153、位置-151和位置7-163的各种蛋白。本专利技术的TPO还包括这样的蛋白其含有上述位置7-151序列的里面或外面至少一个氨基酸残基加以取代、缺失、插入和/或加成的氨基酸序列，以不破坏其TPO活性为度。用于本专利技术的TPO的其它例子包括以下蛋白具有序列1氨基酸序列的TPO的至少1位上的丝氨酸残基和3位上的丙氨酸残基分别被丙氨酸残基和缬氨酸残基所取代的蛋白，其25位上的精氨酸残基被天冬氨酸残基所取代的蛋白，其33位上的组氨酸残基被苏氨酸残基所取代的蛋白，其25位上的精氨酸残基被天冬氨酸残基所取代，而且231位上的谷氨酸残基被赖氨酸残基所取代的蛋白，以及在上述各蛋白的C-末端加上多肽ThrSerIleGlyTyrProTyrAspValProAspTyrAlaGlyValHisHisHisHisHisHis后得到的蛋白。还包括在序列1所示序列中至少具有以下氨基酸残基的缺失和/或加成的蛋白，即其33位上的组氨酸残基缺失的蛋白，其116位上的甘氨酸残基缺失的蛋白，其117位上的精氨酸残基缺失的蛋白，在33位的组氨酸残基和34位的脯氨酸残基之间插入一个苏氨酸残基的蛋白，在33位的组氨酸残基和34位的脯氨酸残基之间插入一个丙氨酸残基的蛋白，在33位的组氨酸残基和34位的脯氨酸残基之间插入一个甘氨酸残基的蛋白，在33位的组氨酸残基和34位的脯氨酸残基之间插入一个甘氨酸残基，而且其38位的脯氨酸残基被一个丝氨酸残基取代的蛋白，在116位的甘氨酸残基和117位的精氨酸残基之间插入一个天冬氨酸残基的蛋白，在116位的甘氨酸残基和117位的精氨酸残基之间插入一个丙氨酸残基的蛋白，以及在116位的甘氨酸残基和117位的精氨酸残基之间插入一个甘氨酸残基的蛋白。本专利技术TPO蛋白的其它例子还有至少其129位上的亮氨酸残基被一个精氨酸残基所取代的蛋白，其133位上的组氨酸残基被一个精氨酸残基所取代的蛋白，其143位上的蛋氨酸残基被一个精氨酸残基所取代的蛋白，其82位上的甘氨酸残基被一个亮氨酸残基所取代的蛋白，146位上的甘氨酸残基被一个亮氨酸残基所取代的蛋白，其148位上的丝氨酸残基被一个脯氨酸残基所取代的蛋白，其59位上的赖氨酸残基被一个精氨酸残基所取代的蛋白，以及其115位上的谷氨酰胺残基被一个精氨酸残基所取代的蛋白。本专利技术的TPO蛋白还包括在具有序列1所示氨基酸序列的人TPO蛋白或其上述衍生物的位置-2和-1上分别增加蛋氨酸和赖氨酸残基的蛋白；以及在具有序列1所示氨基酸序列的人TPO蛋白或其上述衍生物的位置-1上接合一个蛋氨酸残基的蛋白。优选用于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：野村英昭，
申请(专利权)人：麒麟麦酒株式会社，
类型：发明
国别省市：