防止血小板生成素(TPO)吸附的方法及含TPO的稳定组合物技术

一种含血小板生成素（ＴＰＯ）的组合物，它包含不具有糖链部分的ＴＰＯ蛋白和至少一种选自蛋白、纤维素衍生物、硫酸化多糖、表面活性剂、聚乙烯醇、聚乙二醇和氨基乙酸的药用添加物。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
1.专利
本专利技术涉及一种稳定组合物，该组合物包含不具有糖链部分的TPO蛋白，更具体地说，本专利技术涉及含TPO的稳定组合物，该组合物可有效地防止作为活性成分的TPO的损失或滴度降低，所述损失或滴定降低是由于容器壁的吸附或TPO间的缔合或聚合等引起的。本专利技术还涉及防止由容器壁吸附所引起的TPO滴度减少的方法，所述容器装有本专利技术的组合物。2.相关技术的公开人类TPO(血小板生成素)是作为细胞因子受体超家族的成员之一Mpl的配体而被克隆的一种蛋白(de Sauvage等，自然(伦敦)，369卷，533-565(1994)；Bartley，T.D.等，细胞，77卷，1117-1124(1994))。在患有血小板减少症的动物(如人，鼠，狗等)的血清和血浆中可检测到Mpl配体，已经证实该配体与巨核细胞和血小板的生成有关。为了开发一种用于治疗血小板减少症的药剂，本专利技术人通过测定其刺激大鼠骨髓中高度纯化的巨核细胞祖细胞生成巨核细胞的活力，从患有血小板减少症的大鼠的血浆中提纯了大鼠TPO，并且成功地克隆了大鼠TPO的cDNA及基于部分氨基酸序列的人类TPO的cDNA，通过重组DNA技术获得了大量的同源人类TPO(H.Miyazaki等，实验血液学，22卷，838(1994))。这样获得的人类TPO的氨基酸序列与上面所提到的以人类Mpl配体得到的因子的序列一致(参见后文描述的SEQ ID NO1)。本专利技术人发现本专利技术的TPO对治疗血小板减少症是有效的，因为当将人类TPO施用给患血小板减少症的小鼠时，观察到抑制血小板减少的效果，增强血小板生成的效果和增加的造血功能，所述小鼠发生骨髓抑制，该抑制是由施用制癌剂或免疫抑制剂或放射线或BMT诱导的。因为TPO的活性高，所以它可以极小量地应用，即它作为活性成分通常每天施用几次，剂量为0.05μg/kg体重-1mg/kg体重，优选0.5μg/kg体重-50μg/kg体重，依病情、性别和施用途径而不同。因此，有必要用极小量的TPO制备包含TPO的药物制剂，但是在这种情况下不可避免地出现因容器(例如小瓶、安瓿等)的吸附而引起TPO的滴度下降，以及滴注时制剂与输注液混合后TPO成分吸附于输注装置(瓶或管)而引起损失。在这种情况下，本专利技术人研制了一种不含TPO的稳定组合物，它可防止具有糖链部分的TPO蛋白的吸附，当制备TPO药物制剂或当它与输注液混合时，可达到防止TPO滴度降低的目的。结果，现在已发现给TPO蛋白添加药用蛋白，纤维素衍生物，硫酸化多糖表面活性剂，聚乙烯醇，聚乙二醇或氨基乙酸(又名甘氨酸)可达到这一效果。专利技术概述因此，依照本专利技术，为防止因容器壁吸附而引起TPO滴度减少提供了一种方法，所述容器装有包含不具有糖链部分的TPO蛋白的组合物，该方法包括给组合物添加至少一种药用添加物，所述添加物选自蛋白，纤维素衍生物，硫酸化多糖表面活性剂，聚乙烯醇聚乙二醇和氨基乙酸。本专利技术还提供一种含TPO的组合物，它包含不具有糖链部分的TPO蛋白及至少一种选自蛋白，纤维素衍生物，硫酸化多糖表面活性剂，聚乙烯醇聚乙二醇和氨基乙酸的药用添加物。附图简述附图说明图1是ELISA测定的表明TPO(1-163)/E.coli浓度与相应吸收值之间(450nm/650nm)关系的标准曲线。图2表明当添加不同浓度的人血清白蛋白(HSA)时，TPO(1163)/E.coli的回收百分率随时间的变化。专利技术详述本专利技术的TPO可以用具有SEQ ID NO1氨基酸序列的蛋白，该蛋白不具有糖链部分，只要产品是高纯度的分离的蛋白，其制备方法没有具体限制。本专利技术所应用的TPO也可以是这样一种蛋白，它包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列在SEQ ID NO1列出的氨基酸序列中有部分修改(通过替代、删除、插入和/或添加)，但不具有糖链部分，条件是它保持TPO活性。换言之，也可应用氨基酸序列基本上为SEQ ID NO1中所示但不具有糖链部分的蛋白。术语“氨基酸序列基本上为SEQ ID NO1所示指除SEQ ID NO1中的氨基酸序列外还包括SEQ ID NO1中的氨基酸序列经部分替代，删除，插入和/或添加而形成的氨基酸序列，只要仍保持TPO活性即可。已经发现即使SEQ ID NO1中C末端的氨基酸序列缺失到第152位，或即使N末端的氨基酸残基缺失到第6位，重组的人TPO蛋白还保留TPO活性。具体数据如表1所示。表1衍生物 活性位置1-231 +位置1-211 +位置1-191 +位置1-171 +位置1-163 +位置1-157 +位置1-156 +位置1-155 +位置1-154 +位置1-153 +位置1-151 +位置1-150 -位置7-163 +位置8-163 -位置13-231-因此，本专利技术的TPO蛋白是这样一种不具有糖链部分的蛋白，它所包含的氨基酸序列与SEQ ID NO1中所示的7-151位的一致并且具有TPO活性。更具体而言，该蛋白包括不具有糖链部分但具有SEQ ID NO1中所示氨基酸序列中1-231，1-211，1-191，1-171，1-163，1-157，1-156，1-155，1-154，1-153，1-151或7-163位的多肽链的蛋白。本专利技术的TPO蛋白还包括这样一种不具有糖链部分的蛋白，其多肽链中至少有一种上述SEQ ID NO1中7-151序列内或外的氨基酸残基经过替代，删除，插入和/或添加，而TPO活性并没受到破坏。本专利技术的TPO蛋白可包括这样的蛋白，其中SEQ ID NO1中所示人类TPO氨基酸序列中，至少Ser1和Ala3被Ala和Val替代；或其中Arg25被Asn替代；或其中His33被Thr替代；或其中Arg25被Asn替代；Glu231被Lys替代；并且包括这样的蛋白，其中多肽Thr Ser Ile Gly Tyr Pro Tyr AspVal Pro Asp Tyr Ala Gly Val His His His His His His被加到上述蛋白的C末端。本专利技术还包括这样的不具有糖链部分的蛋白，它们在SEQ ID NO1的序列中至少有下列氨基酸残基的缺失和/或添加，即，其中的His33被删除；或其中Gly116被删除；或其中Arg117被删除；或其中苏氨酸残基插在His33和Pro34间；或其中丙氨酸残基插在His33和Pro34间；或其中甘氨酸残基插在His33和Pro34间；或其中甘氨酸残基插在His33和Pro34间，且Pro38被Ser替代；或其中天冬酰胺残基插在Gly116和Arg117间；或其中丙氨酸残基插在Gly116和Arg117间；或其中甘氨酸残基插在Gly116和Arg117间。本专利技术TPO蛋白的实例还包括这样的蛋白，其中至少Leu129被Arg替代；或其中His133被Arg替代；或其中Met143被Arg替代；或其中Gly82被Leu代替；或其中Gly146被Leu替代；或其中Ser148被Pro替代；或其中Lys59被Arg替代；或其中Gln115被Arg替代。本专利技术的不具有糖链部分的TPO蛋白还包括这样的非糖基化蛋白，其中甲硫氨酸和赖氨酸残基分别被加到具有SEQ ID NO1中所示氨基酸序列的人类TPO蛋白和上述衍生物的-2和-1位置本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：大直树，
申请(专利权)人：麒麟麦酒株式会社，
类型：发明
国别省市：