在疏水性溶剂中增溶亲水性物质(如蛋白质)的方法技术

本发明专利技术提供了制备包含溶解于疏水相中的亲水性物质例如蛋白质的单相制剂的方法，本发明专利技术的方法可用于制备药物、化妆品、营养品、饲料或食物补充组合物。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种将亲水性物质，例如蛋白质溶解在它通常不可溶的疏水性溶剂中的新型方法。将亲水性分子例如蛋白质与疏水性物质例如类脂相结合起来在许多方面是有利的。亲水性分子在类脂环境中时能够具有优点例如稳定性增强。此外，这种亲水性物质穿过类脂性障碍物，例如皮肤的运送将变得更为容易。早期的将疏水性载体用于蛋白质运送的建议包括脂质体的应用。后来的系统是非脂质体的，但仍然依赖于携带蛋白质或其它亲水性分子的亲水相前提，此亲水相与疏水相形成一种乳化液。这些系统的实例揭示在EP-A-0366277和EP-A-0521994。WO-A-95/13795揭示了一种系统，靠它获得一种真正的单相制剂是可能的，此处亲水性物质真正“溶解”在疏水相中。在其中揭示的方法中，亲水性物质首先与一种两亲物在液体介质中相结合，在这种液体介质中，两亲物和亲水物之间没有化学相互作用。液体介质然后被去除，留下两亲物分子和亲水性物质的一个系统。最后，向系统中加入一种疏水性溶剂会产生一种单相制剂，此处亲水性物质溶解在疏水性溶剂中。现在令人惊奇地发现通过一种改进后的通常更快速的方法生成一种亲水性物质在疏水性溶剂中的单相制剂是可能的。因此，一方面，本专利技术提供了一种在疏水性溶剂中含有亲水性物质的单相疏水制剂的制备方法，该方法包括(ⅰ)在疏水相存在的情况下，将亲水性物质与一种两亲物相结合；及(ⅱ)去除存在的所有亲水性溶剂；其中亲水性溶剂去除步骤在保持疏水相为固态的条件下进行。在一个优选的实施例中，亲水性物质和两亲物首先溶解在一种亲水性溶剂中，例如含水溶剂，通常只有水，然后将此溶液与疏水性溶剂相结合。亲水性溶剂的去除步骤通过冻干法便利地实现，这种方法在确保疏水性溶剂一直保持在固态直至所有水都被去除的温度下进行。在某些情况下，油在冻干期间可能变成液态，这是由于固体块的某些部分(通常在表面和边缘)局部温度升高的结果，在这些地方亲水性溶剂已经被去除。这儿由亲水性溶剂的升华产生的冷却效应不再存在，在这些区域油将熔化。这种状态将导致一种令人满意的终产物的生成，只要油一出现就将其从固体块的剩余部分中排去(否则，积聚的油将形成层而阻止亲水性溶剂的进一步去除)。或者，维持冻干期间的温度以致即使在亲水性溶剂已被去除后油仍保持固态。在这种情况下，冻干之后，接着将制剂的温度升高以生成单相制剂。通过将冻干后的制剂升高到室温，这通常能够得以简单地实现，它也将导致疏水相回到液态。也可以应用去除亲水性溶剂的其它方法，例如喷雾干燥。在本专利技术的上下文中，术语“亲水性物质”涉及任何通常在亲水性溶剂，例如含水溶剂中可溶，而在疏水性溶剂中不可溶的物质。在本专利技术中应用的亲水性物质是各种各样的，但亲水性高分子代表了可以应用的物质的一种实例。本专利技术的方法提供了一种便利的和比较快速的生成所述的单相制剂的方法。当涉及油、亲水性物质或两者的稳定性时，尤其当两亲物的浓度高时，方法的快速是一个特别的优点。此外，即使当应用例如甘油三酯作为疏水相时，也能获得两亲物与亲水性物质之间的低比率，例如低至7∶1，这允许制剂有较高的装载容量。正如上面提及的，在一个优选的实施方案中，两亲物“出现”在亲水相中。但是，如果适当的话，两亲物可以首先溶解或分散在油中。当应用在水中分散不好的两亲物时，这尤其适合。本专利技术的方法的另一个优点是它允许不能很好地冻干的两亲物的应用，例如那些在实施冻干法通常采取的温度下为液态的两亲物。各种各样的高分子适合于应用在本专利技术中。总的来说，高分子化合物将是亲水性的或至少具有亲水区域，因为将疏水性高分子溶解在油性溶液中通常很少有困难。合适的高分子的实例包括蛋白质和糖蛋白，低核酸和聚核酸，例如DNA和RNA，聚糖和任何这些物质的超分子组合，包括在某些情况下为整个细胞或小器官。也可以很便利地共溶解一个小分子例如维他命与一个高分子例如聚糖如环糊精结合而成的复合物。小分子例如维他命B12也可以与高分子化学共轭，并且可以因此包含在组合物中。可以成功地用本专利技术的方法溶解的具体的蛋白质的实例包括胰岛素、降钙素、血红蛋白、细胞色素C、辣根过氧化物酶、抑肽酶、蕈状酪氨酸酶(mushroom tyrosinase)、红细胞生成素、生长激素(somatotropin)、生长激素(growth hormone)、生长激素释放因子、galanin、尿激酶、因子Ⅸ、组织血纤维蛋白溶酶原活化剂、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、铁蛋白、干扰素、因子Ⅷ、微生物毒素、肽和蛋白抗原及它们的片段(所有上述蛋白质能来自任何合适的来源)。其它可以应用的高分子是FITC标记的葡聚糖和从串酵母(Torulla yeast)中提取出来的RNA。看来高分子化合物的分子量没有上限，因为分子量为约1,000,000的葡聚糖能够用本专利技术的方法轻易地溶解。除高分子外，本专利技术的方法也可用于溶解更小的有机分子。小有机分子的实例包括葡萄糖、羧基荧光素和许多药物制剂，例如抗癌制剂，但是，当然本方法同样能够应用于其它的小有机分子，例如维他命或者药物上或生物上的活性试剂。此外，化合物例如氯化钙和磷酸钠也能用此方法溶解。实际上，本专利技术对药物上和生物上的活性试剂尤其有利，因为无水溶液的应用可以使分子进入体内的方法得以改变，例如用以提高生物利用率。另一种可以包含在本专利技术的疏水性组合物中的物质是无机物例如小无机分子或胶体物质例如胶态金属。本专利技术的方法使胶态金属例如胶态金、钯、铂或铑的一些性质，即使在疏水性溶剂中也能够被保持，而通常情况下微粒在其中会聚集。这对于在有机溶剂中进行的反应的催化作用尤其有用。有许多两亲物可以应用于本专利技术，两性离子两亲物例如磷脂就属于那些已经被发现是尤其适合的两亲物。带卵磷脂首基的磷脂已经被特别成功地应用，这些磷脂的实例包括卵磷脂(PC)本身、溶血卵磷脂(lyso-PC)、神经鞘磷脂、任何这些物质的衍生物，例如十六烷基胆碱磷酸或含有磷酸胆碱的两亲聚合物。在本申请中，术语卵磷脂(PC)和卵磷脂(lecithin)可互换应用。合适的天然卵磷脂可以来源于任何便利的来源，例如蛋和尤其是大豆。在大多数情况下，优选选择一种化学上类似于被选择的疏水性溶剂的两亲物，这在下面更详细地讨论。疏水性溶剂的选择取决于组合物预定的目的、被溶解的物质类型和两亲物。合适的溶剂包括带不饱和脂肪酸的长链脂肪酸例如优选油酸和亚油酸，醇，尤其是中链醇例如辛醇和带支链的长链醇例如叶绿醇、单酸甘油酯例如甘油单油酸酯(GMO)、甘油二酯和甘油三酯，尤其是中链甘油三酯和它们的混合物。当疏水性溶剂和两亲物恰当地匹配时，通常获得最佳的结果。例如，对一种溶剂例如油酸，溶血卵磷脂相对卵磷脂是两亲物的一种更合适的选择，而当疏水性溶剂是甘油三酯时则相反。或者，在疏水性溶剂具有两亲性质的情况下(例如游离脂肪酸，如油酸，它们在有碱存在的情况下能够离子化而生成油酸钠)，包含一种额外的两亲物就不必要，如果溶剂分子的一部分在混合过程进行之前或期间转化成两亲物的形式。尤其，所应用的碱是一种挥发性的碱例如三乙胺。当溶解降钙素或胰岛素时，这种方法尤其成功。因此，第二方面，本专利技术提供了一种在疏水性溶剂中含有亲水性物质的单相疏水制剂的制备方法，该方法包括(ⅰ)在疏水相存在的情况下，将亲水性物质与碱相结合；及(ⅱ)去本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在疏水性溶剂中含有亲水性物质的单相疏水制剂的制备方法，该方法包括：（ｉ）在疏水相存在的情况下，将亲水性物质与一种两亲物相结合；及（ｉｉ）去除存在的所有亲水性溶剂；其中亲水性溶剂的去除步骤在保持疏水相为固态的条件下进行。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：RRC纽，
申请(专利权)人：科特克斯英国有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]