一种ＤＣＣ基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种ＤＣＣ基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示。本发明专利技术还提供了一种ＤＣＣ基因原位杂交检测方法。另外，本发明专利技术还提供了试剂盒在制备检测胃癌或胰腺癌疾病药物中的应用。本发明专利技术优点在于：本发明专利技术提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点。本发明专利技术的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍使用和推广。

【技术实现步骤摘要】
一种DCC基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用
本专利技术涉及一种试剂盒，具体地说关于一种DCC基因的原位杂交检测试剂盒及其 检测方法和应用
技术介绍
胰腺癌已成为我国人口死亡的十大恶性肿瘤之一。年轻的胰腺癌病人也较10年 前有明显增加的趋势，而且恶性度更高，预后更差。就胰腺癌的发生部位而言，仍以胰头部 位最多见，约占70%左右，胰体次之，胰尾部更次之，有的头体尾部均有，属于弥漫性病变或 多中心性病变。目前，胰腺癌的发病原因尚不清楚，已发现一些环境因素与胰腺癌的发生有 关。其中已定的首要危险因素为吸烟。吸烟者发生胰腺癌相对危险度是非吸烟者的1. 5倍， 而且随着吸烟数量增加而增加。其他高危险因素还有糖尿病、胆石病、饮酒(包括啤酒)以 及慢性胰腺炎等。进食高脂肪、高蛋白饮食和精制的面粉食品，胃切除术后20年者，也是发 生胰腺癌的危险因素。胰腺癌致死性特高，可能由于它发病诡秘隐匿，确诊时多已进入晚期 之故。胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率居各类肿瘤的首位。中国的胃 癌发病率以西北最高东北及内蒙古次之华东及沿海又次之中南及西南最低每年约有17万 人死于胃癌，几乎接近全部恶性肿瘤死亡人数的1/4，且每年还有2万以上新的胃癌病人产 生出来，胃癌确实是一种严重威胁人民身体健康的疾病。DCC 基因(deleted in colorectal cancer)位于染色体 18q21. 3，它存在于大多 数正常组织中，其产物为一组糖蛋白，具有表面受体的作用，其结构与细胞黏着分子相似， 可能是细胞信号转导受体，它的缺失可使肿瘤细胞迅速增值，有人认为它是癌症抑制基因。 DCC基因的异常大多数发生在肿瘤的较晚阶段，DCC基因缺失可能通过影响细胞间黏着机 制导致肿瘤的侵袭和转移。在胃癌的研究中，Bamias等发现DCC基因缺失缺失多见于分化 差异及印戒细胞癌者，认为DCC基因缺失是胃癌的独立侵袭转移预测因子。Hohne等研究表 明在低分化或未分化胰腺癌中DCC表达极度减少或缺失随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至 今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆 时)就能做到基因水平的早期预测诊断。本专利技术采用核酸原位杂交技术检测DCC基因，对胰 腺癌和胃癌等早期基因水平的诊断有非常重要的临床意义。DCC基因序列号NM_005215， 5690bp, mRNA,18q21. 3，cds :588…4931bp。本专利技术的原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技 术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原 理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补 核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测， 从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种DCC基因的原位杂交检测试剂 盒的用途。本专利技术的再一的目的是，提供一种DCC基因的原位杂交检测试剂盒。本专利技术的另一的目的是，提供一种DCC基因的原位杂交检测方法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是一种DCC基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测胃癌或胰腺癌疾病药物中的应 用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1所示。所述的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1所示的RNA序列。所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。所述的放射性核素选自3H、35S、125I或32P中的一种。所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素 中的一种。所述的非放射性标记物优选自地高辛。所述的试剂盒还包括增效剂，所述的增效剂是碱性磷酸酶抗体。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是一种DCC基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，其中所述的杂交探 针序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是一种DCC基因的原位杂交检测方法，该方法包括以下步骤a、将试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接触，形成杂交复合体；b、检测a步骤得到的杂交复合体。所述的a步骤中形成杂交复合体的条件为核酸杂交的温度为42°C ；核酸杂交的 时间为16-24小时，所述的底物选用血液细胞标本或组织细胞标本。本专利技术的诊断试剂盒的组份是由杂交探针，杂交液，显色剂，增效剂等组成。本试 剂盒的核酸杂交原理是分子生物学业内人士均熟知，具体操作步骤是标本处理、预杂交、杂 交、免疫组化染色、镜下进行定量分析、结果报告，其中杂交的具体步骤包括仪器操作1).将待测标本放入反应槽中；2).仪器自动弃去液体，自动加消化液；3).仪器自动弃去液体，自动后固定；4).仪器自动弃去液体，自动预杂交(42°C )；5).仪器自动弃去液体，自动清洗；6).仪器自动弃去液体，自动杂交(420C )；7).仪器自动弃去液体，自动清洗；8).仪器自动弃去液体，自动与DIG抗体培养(室温)9).仪器自动弃去液体，自动清洗，显色；10).取出封片镜检。本专利技术优点在于1、本专利技术提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点。2、本专利技术的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍使用和推广。3、本专利技术的临床意义是更早期跟踪检测胃癌或胰腺癌发生动态过程，以及用于胃 癌或胰腺癌预防医学的检测和筛选工具。本专利技术的诊断试剂盒与临床上其它检测癌胚蛋白 标志物，以及影像医学检查有显著不同。本专利技术可以在基因水平上检测DCC异常表达，在影 像医学检查及其它检查未发现占位性胃癌或胰腺癌病灶之前，癌症生化指标未产生异常之 前，亦未形成肿块之前，能及早做到以上基因表达异常的信息采集，给临床胃癌或胰腺癌病 患一个真正的预后早期诊断。这样才有可能实施胃癌或胰腺癌的早期诊断、早期预防、早期 治疗，有可能从源头上彻底根治胃癌或胰腺癌恶疾。附图说明图1是本专利技术实施例中胰腺癌病人DCC基因表达图片。图2是本专利技术实施例中胃癌病人DCC基因表达图片。图3是本专利技术实施例中正常人DCC基因表达图片。具体实施方式下面结合附图对本专利技术具体实施方式作详细说明。实施例1—种DCC基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物、增效剂，其中，所述 的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1所示。杂交探针用地高辛标记。试剂盒中的其它液体和标 本组成如下消化液100 μ 1/管1管/盒无色透明液体保护液100 μ 1/管1管/盒无色透明液体预杂交液1300 μ 1/ 管2管/盒无色透明液体正义杂交液10μ 1/管1管/盒无色透明液体反义杂交液10μ 1/管1管/盒无色透明液体封闭液1000 μ 1/ 管1管/盒无色透明液体碱性磷酸酶抗体ι μ 1/管1管/盒无色透明液体显色剂A175 μ 1/ 管1管/盒黄色液体显色剂B320 μ 1/ 管1管/盒无色透明液体缓冲液IlOx90ml/ 瓶1瓶/盒浅黄色或无色透明液体缓冲液II IOx80ml/ 瓶1瓶/盒浅黄色或无色透明液体缓冲液III IOx20m/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＤＣＣ基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测胃癌或胰腺癌疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示。

【技术特征摘要】
一种DCC基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测胃癌或胰腺癌疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1所 示的RNA序列。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的标记物选自放射性核素或非 放射性标记物。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的放射性核素选自3H、35S、125I或32P 中的一种。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的非放射性标记物选自生物素、地高 辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述的非放射性标记物优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：张云福，裘建英，
申请(专利权)人：芮屈生物技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]