对HLA分子结合亲和力提高的肽制造技术

本发明专利技术提供包含ＨＬＡ－Ａ３超基元的免疫原性肽。此肽可用于治疗、诊断或检测许多病理状态。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
对hla分子结合亲和力提高的肽的制作方法
技术介绍
本专利技术涉及预防、治疗或诊断许多病理状态的组合物和方法。特别提供能够结合选择的主要组织相容复合物(MHC)分子并诱导免疫反应的新肽。MHC分子可分成Ⅰ型或Ⅱ型。Ⅱ型MHC分子基本上表达于参与激发和维持免疫反应的细胞，如T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞等。Ⅱ型MHC分子被辅助T淋巴细胞识别，并诱导辅助T淋巴细胞的增殖，和对呈现的特定免疫原性肽的免疫反应的放大。Ⅰ型MHC分子表达于几乎所有的有核细胞上，并被细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)识别，这种T淋巴细胞然后破坏带有抗原的细胞。CTLs在肿瘤排斥和抵抗病毒、真菌和寄生虫的感染中是十分重要的。用两种不同的试验方法已经分析了Ⅰ型MHC分子的结合亲和力与分散的肽表位的免疫原性的关系(Sette等，免疫学杂志.，153:5586-5592(1994))。在第一种方法中，MHC分子结合亲和力在10000倍范围内变化的潜在表位的免疫原性在HLA-A※0201转基因小鼠中进行了分析。在第二种方法中，用急性乙型肝炎病人的PBL评价了大约100种乙型肝炎病毒来源的不同的潜在表位的抗原性，这些表位都带有A※0201结合基元。在这两种方法中，发现结合阈值约为500nM(优选500nM或更低)决定肽表位引起CTL反应的能力。这些结果与天然加工的肽或前面所述的T细胞表位的Ⅰ型结合亲和力的测定值十分相符。这些结果说明，在T细胞反应形成中决定基选择具有重要作用。通常，CTL反应并不直接针对所有可能的表位。而是限于少数几个免疫优势决定基(Zinkernagel等，免疫学进展27,51-59(1979)；Bennink等，实验医学杂志168,1935-1939(1988)；Rawle等，免疫学杂志146,3977-3984(1991))。早就认识到免疫优势(Benacerraf等，科学175,273-279(1972))可以解释为一个给定的表位选择性地结合一个特定的MHC分子的能力(决定基选择理论)(Vitiello等，免疫学杂志131:1635(1983)；Rosenthal等，自然267,156-158(1977))，或被存在的TCR特异性选择性地识别(全能理论)(Klein,J.,Immunology,the Science of Self-Nonself Discrimination,John Wiley&Sons,New York,pp270-310(1982))。已经证实，另外的因素，大多数与处理过程相关，也在诱发严格的免疫原性以外的反应中起关键作用，这些因素中的多数潜在的决定基将以免疫优势的形式存在(Sercarz等，免疫学年评11,729-766(1993))。调节一个特定的免疫原性肽与一个或多个HLA分子结合亲和力的能力，以及由此而调节由此肽引发的免疫反应的能力，将大大提高肽基疫苗和治疗制剂的用途。本专利技术提供这些和其它的优势。专利技术概述本专利技术提供用于疫苗和治疗学的肽和编码这些肽的核酸。本专利技术提供在病人身上诱导对预选的抗原产生细胞毒T细胞反应的方法。此方法包括将细胞毒T细胞与本专利技术的免疫原性肽接触。本专利技术的肽可能来源于许多抗原，包括病毒抗原、肿瘤相关抗原、寄生虫抗原、真菌抗原等。本专利技术的方法可以在体外和体内进行。在优选实施方案中，向病人给予含有编码免疫原性肽序列的核苷酸分子，使肽与细胞毒T细胞接触。在一个实施方案中，肽有约9-15个残基，以小于约500nM的解离常数结合至少2个HLA-A3样分子，并诱导细胞毒T细胞反应。此免疫原性肽具有包含一个结合基元的9残基序列，从N末端到C末端如下位于第2位的第一个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的的第二个初级锚定残基，选自R和K；和一个或多个次级锚定残基，选自位于第3位的Y、F或W，位于第6位的Y、F或W，位于第7位的Y、F或W，位于第8位的P，以及这些的任意组合。本专利技术进一步提供结合HLA-A※0301基因产物的免疫原性肽。这些肽含有一个9残基的结合基元，从N末端到C末端如下位于第2位的第一个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第二个初级锚定残基，选自R和K；和一个或多个次级锚定残基，选自位于第1位的R、H或K，位于第3位的Y、F或W，位于第4位的P、R、H、K、Y、F或W，位于第5位的A，位于第6位的Y、F或W，位于第8位的P，以及这些的任意组合。本专利技术也提供结合HLA-A※1101基因产物的免疫原性肽。这些肽含有一个9残基的结合基元，从N末端到C末端如下位于第2位的第一个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第二个初级锚定残基，选自R和K；和一个次级锚定残基，选自位于第1位的A，位于第3位的Y、F或W，位于第4位的Y、F或W，位于第5位的A，位于第6位的Y、F或W，位于第7位的Y、F或W，位于第8位的P，以及这些的任意组合。本专利技术也提供结合HLA-A※3101基因产物的免疫原性肽。这些肽含有一个9残基的基元，从N末端到C末端如下位于第2位的第一个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第二个初级锚定残基，选自R和K；和一个次级锚定残基，选自位于第1位的R、H或K，位于第3位的Y、F或W，位于第4位的P，位于第6位的Y、F或W，位于第7位的Y、F或W，位于第8位的A或P，以及这些的任意组合。本专利技术也提供结合HLA-A※3301基因产物的免疫原性肽。这些肽含有一个9残基的基元，从N末端到C末端如下位于第2位的第一个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第二个初级锚定残基，选自R和K；和一个次级锚定残基，选自位于第3位的Y、F或W，位于第7位的A、Y、F或W，以及这些的任意组合。本专利技术也提供结合HLA-A※6801基因产物的免疫原性肽。这些肽含有一个9残基的基元，从N末端到C末端如下位于第2位的第一个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第二个初级锚定残基，选自R和K；和一个次级锚定残基，选自位于第1位的Y、F、W、S、T或C，位于第5位的Y、F、W、L、I、V或M，位于第7位的Y、F或W，位于第8位的P，以及这些的任意组合。本专利技术也提供鉴定以小于约500nM的解离常数结合HLA-A3样分子的免疫原性肽的方法。此方法包括筛选抗原蛋白中存在本专利技术结合基元的氨基酸序列，在抗原蛋白中选择有结合基元的一个或多个亚序列。制备和检测包含选定亚序列的约8个和11个残基的试验肽。然后鉴定解离常数小于500nM的肽。定义“肽”这个词与“寡肽”在本说明书中交换使用，以指示一系列残基，典型的是L氨基酸，一般是相邻氨基酸的α氨基与羧基之间通过肽键相互连接。本专利技术的寡肽长度小于15个残基，通常包含8个至11个残基，优选9或10个残基。一种“免疫原性肽”是一种含有等位基因特异的基元或超基元的肽，这样此肽能结合一个MHC分子，并诱导CTL反应。本专利技术的免疫原性肽能结合到合适的HLA-A3样分子上，并诱导对产生此免疫原性肽的抗原的细胞毒T细胞反应。“初级锚定残基”是在肽序列上一个特定位置的氨基酸，它可以在免疫原性肽和MHC分子之间提供一个接触点。一个限定长度的肽中1～本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诱导病人对预选的抗原发生细胞毒Ｔ细胞反应的方法，此方法包括将细胞毒Ｔ细胞与约９至１５个残基的免疫原性肽接触，这些肽以小于约５０ｎＭ的解离常数结合至少两种ＨＬＡ－Ａ３样分子，并诱导细胞毒Ｔ细胞反应，免疫原性肽具有含有一个结合基元的９残基序列，从Ｎ末端至Ｃ末端如下：位于第２位的第１个初级锚定残基，选自Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ｓ和Ｔ，位于第９位的第２个初级锚定残基，选自Ｒ和Ｋ；和一个或多个次级锚定残基，选自第３位的Ｙ、Ｆ或Ｗ，第６位的Ｙ、Ｆ或Ｗ，第７位Ｙ、Ｆ或Ｗ，第８位的Ｐ ，和任何这些的组合。

【技术特征摘要】
US 1996-3-11 60/013,1131．一种诱导病人对预选的抗原发生细胞毒T细胞反应的方法，此方法包括将细胞毒T细胞与约9至15个残基的免疫原性肽接触，这些肽以小于约500nM的解离常数结合至少两种HLA-A3样分子，并诱导细胞毒T细胞反应，免疫原性肽具有含有一个结合基元的9残基序列，从N末端至C末端如下位于第2位的第1个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第2个初级锚定残基，选自R和K；和一个或多个次级锚定残基，选自第3位的Y、F或W，第6位的Y、F或W，第7位Y、F或W，第8位的P，和任何这些的组合。2．权利要求1的方法，其中肽由9至10个残基组成。3．权利要求1的方法，其中肽来自病毒抗原、肿瘤相关抗原、寄生虫抗原，或真菌抗原。4．权利要求1的方法，其中接触步骤在体外进行。5．权利要求1的方法，其中接触步骤通过向病人给予包含编码此免疫原性肽的序列的核酸分子而进行。6．一种诱导病人对预选的抗原发生细胞毒T细胞反应的方法，此方法包括将细胞毒T细胞与约9至15个残基的免疫原性肽接触，这些肽以小于约500nM的解离常数结合HLA-A*0301基因产物，并诱导细胞毒T细胞反应，免疫原性肽具有含有一个结合基元的9残基序列，从N末端至C末端如下位于第2位的第1个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第2个初级锚定残基，选自R和K；和一个或多个次级锚定残基，选自第1位的R、H或K，第3位的Y、F或W，第4位的P、R、H、K、Y、F或W，第5位的A，第6位的Y、F或W，第8位的P，和任何这些的组合。7．权利要求6的方法，其中肽由9至10个残基组成。8．权利要求6的方法，其中肽来自病毒抗原、肿瘤相关抗原、寄生虫抗原，或真菌抗原。9．权利要求6的方法，其中接触步骤在体外进行。10．权利要求6的方法，其中接触步骤通过向病人给予包含编码此免疫原性肽的序列的核酸分子而进行。11．一种诱导病人对预选的抗原发生细胞毒T细胞反应的方法，此方法包括将细胞毒T细胞与约9至15个残基的免疫原性肽接触，这些肽以小于约500nM的解离常数结合HLA-A*1101基因产物，并诱导细胞毒T细胞反应，免疫原性肽具有含有一个结合基元的9残基序列，从N末端至C末端如下位于第2位的第1个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第2个初级锚定残基，选自R和K；一个次级锚定残基，选自第1位的A，第3位的Y、F或W，第4位的Y、F或W，第5位的A，第6位的Y、F或W，第7位的Y、F或W，第8位的P，和任何这些的组合。12．权利要求11的方法，其中肽由9至10个残基组成。13．权利要求11的方法，其中肽来自病毒抗原、肿瘤相关抗原、寄生虫抗原，或真菌抗原。14．权利要求11的方法，其中接触步骤在体外进行。15．权利要求11的方法，其中接触步骤通过向病人给予包含编码此免疫原性肽的序列的核酸分子而进行。16．一种诱导病人对预选的抗原发生细胞毒T细胞反应的方法，此方法包括将细胞毒T细胞与约9至15个残基的免疫原性肽接触，这些肽以小于约500nM的解离常数结合HLA-A*3101基因产物，并诱导细胞毒T细胞反应，免疫原性肽含有9到约15个残基，具有含有一个结合基元的9残基序列，从N末端至C末端如下位于第2位的第1个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第2个初级锚定残基，选自R和K；一个次级锚定残基，选自第1位的R、H或K，第3位的Y、F或W，第4位的P，第6位的Y、F或W，第7位的Y、F或W，或第8位的A或P，和任何这些的组合。17．权利要求16的方法，其中肽由9至10个残基组成。18．权利要求16的方法，其中肽来自病毒抗原、肿瘤相关抗原、寄生虫抗原，或真菌抗原。19．权利要求16的方法，其中接触步骤在体外进行。20．权利要求16的方法，其中接触步骤通过向病人给予包含编码此免疫原性肽的序列的核酸分子而进行。21．一种诱导病人对预选的抗原发生细胞毒T细胞反应的方法，此方法包括将细胞毒T细胞与约9至15个残基的免疫原性肽接触，这些肽以小于约500nM的解离常数结合HLA-A*3301基因产物，并诱导细胞毒T细胞反应，免疫原性肽包括含有一个结合基元的9残基序列，从N末端至C末端如下位于第2位的第1个初级锚定残基，选自A、L、I、V、M、S和T，位于第9位的第2个初级锚定残基，选自R和K；一个次级锚定残基，选自第3位的Y、F或W，第7位的A、Y、F或W，和任何这些的组合。22．权利要求21的方法，其中肽由9至10个残基组成。23．权利要求21的方法，其中肽来自病毒抗原、肿瘤相关抗原、寄生虫抗原，或真菌抗原。24．权利要求21的方法，其中接触步骤在体...

【专利技术属性】
技术研发人员：A瑟特，RW彻斯特鲁特，J悉尼，
申请(专利权)人：埃皮曼尼公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]