检测异常上皮细胞脱落的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测温血动物的成熟上皮细胞的异常细胞脱落速率的方法，所述成熟上皮细胞例如是胃或结肠腺的上皮细胞。在上皮细胞上施用包含例如花青染料的标记组合物，然后随时间观察该部位。异常细胞脱落速率说明有疾病存在，如癌症。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及活体检测异常上皮细胞脱落速率的方法，其可用作诊断方法。相关技术的描述已知上皮细胞动力学(称为细胞增殖、迁移、分化、衰老和丧失的现象)的变化与不同的疾病状态有关，包括炎症和癌症(上皮细胞的恶性癌)。因此，建立测定细胞动力学的精确方法对于医学和相关领域是非常重要的。在使用氚化的胸苷(3H-胸苷)的自体放射照相法之前，细胞动力学通常是使用各种方法学来测定，包括检测细胞有丝分裂、测量胃肠腺体的尺寸(例如通过显微计数或测量)、以及在体外细胞培养基中进行简单的细胞计数。分析细胞动力学的常规方法使用与增殖细胞中的DNA合成有关的标记物。增殖细胞可用3H-胸苷或者胸苷类似物—溴代脱氧尿苷(BrdU)来标记，它们在DNA合成期间能够快速地插入在细胞DNA中。但是，该方法仅测量DNA合成的速率，而不是直接测量细胞在体内的生长、迁移或脱落。因为使用与DNA合成有关的标记物的方法易于实施，它们已通常作为评估疑有异常动力学的上皮细胞的首选方法。这些方法的使用受制于以下因素必须用增殖细胞培养3-H胸苷和BrdU固定长度的时间。另外，用3H-胸苷和BrdU标记不能在人体内进行。必须从患者身上提取人上皮细胞样品，然后在包含3H-胸苷或BrdU的培养基中进行组织培养。测定某些酶的水平，如增殖细胞核抗原(PCNA)和胸苷激酶，也被用于测定细胞动力学。虽然这些方法不需要组织培养，但它们也不能用作评估细胞动力学(包括细胞迁移或脱落)的体内方法。花青染料已用于多种生物应用中。二氧羰花青染料已用于进行白细胞分化计数。Gunter Valet，Max Plank Ges Wissensch；Patent Accession No.84-102307/17，通过选择性染色和测量体积及荧光同时定量测定白细胞(Simultaneous Quantitative Determination of Blood Cells by SelectiveStaining and Measuring volume and Fluorescence)。用于这些研究中的染料是短链羰花青染料(低于10个碳原子)，而且对膜电势的变化产生反应。短链羰花青染料进入细胞线粒体中，而且是细胞毒性的。当洗涤细胞时，无论细胞的膜电势是否发生变化，这些染料都容易从细胞中泄漏出来。三羰花青染料(Fox，I.J.等人，Proc.May Clinic，32478-484，1957)和Evans蓝染料(Schad，H.等人，Pfluegers Arch.Eur.J.Physiol.，370(2)139-144，1977)已用于通过稀释法在活体中评估心输出。Dow(Dow，P.，Physiol.Rev.，3677-102，1956)描述了此等方法，其包括在肺的静脉侧注射已知量的血管内指示剂，然后测量指示剂随时间的动脉浓度，以测定注射点和取样点之间的体积。但是这些染料不用于染色细胞。第4,762,701号美国专利公开了用于追踪花青标记之细胞并通过测量给药于宿主之花青染料标记的细胞的消失速率来测定细胞寿命的体内方法，该文献的全部内容在此并入。第4,783,401号美国专利公开了用花青染料标记存活细胞的方法，其目的之一是测量所培养之细胞的生长速率。该文献的全部内容在此并入。第4,859,584号美国专利公开了测定体外和体内生长之花青标记的细胞的生长速率的方法，该文献的全部内容在此并入。在本专利技术之前，尚没有人通过体内检查成熟表面上皮细胞的脱落速率来研究细胞的动力学。因此，已公开的文献包括非常少的有关例如胃肠道或其它粘膜表面上的健康或异常成熟上皮细胞的脱落速率。洗涤胃衬固定长的时间，然后通过测量洗涤溶液中的细胞DNA来测定细胞损失，由此可评估胃中的细胞脱落。该方法已被证明是不精确的，这是因为其程序复杂且难以标准化，洗涤期间获得的细胞不足以进行DNA分析，而且在洗涤期间不小心有可能得到非确定目标位置处的细胞。专利技术简述因此，本专利技术的目的是提供一种体内检测异常上皮细胞脱落速率的方法。本专利技术的再一个目的是提供一种体内诊断以成熟上皮细胞中异常细胞脱落速率为特征的疾病状态的方法，其包括体内测定温血动物的目标位置处的表面上皮细胞的脱落速率是正常还是异常。本专利技术的又一个目的是提供一种诊断癌症的改进方法，所述癌症例如是胃癌和结肠癌、以及其它以异常上皮细胞脱落速率为特征的疾病。为实现上述及其它目的，本专利技术提供一种体内检测温血动物之成熟上皮细胞如粘膜表面的上皮细胞中异常细胞脱落速率的方法，其包括以下步骤标记目标位置处的成熟表面上皮细胞，然后监测该位置是否存在标记物。在该方法的优选实施方案中，已标记的细胞存留在粘膜表面上，其中胃肠道的粘膜表面提供特别优选的目标。本专利技术还提供一种诊断以温血动物的成熟上皮细胞中异常细胞脱落速率为特征的疾病状态的方法，其包括标记成熟的上皮细胞，测定标记细胞的脱落速率，然后对比标记细胞的脱落速率和处于相似位置处的健康上皮细胞的已知脱落速率。附图简述图l是胃粘膜的部分示意图。图2是结肠粘膜的部分示意图。优选实施方案的描述以下将详细描述本专利技术的优选实施方案。本专利技术提供体内检测温血动物的成熟上皮细胞的异常细胞脱落速率的改进方法，所述温血动物包括人。目标位置如粘膜表面处的成熟表面上皮细胞用标记组合物进行标记。适合于体内标记上皮细胞的标记组合物是已知的，其包括花青染料，其它化学染料如乙酸结晶紫、Hoechsdye H33342、曙红和Floxyn，以及抗体基标记物(即、可检测并共价键连接在抗体上的部分，如荧光分子、放射性同位素、不透X射线的化合物)。在此优选包含花青染料部分的标记组合物。花青染料部分可在标记组合物中起到可检测的单独物质的作用。另外，其它可检测的物质如其它化学染料或者不透X射线的化合物(X射线显影剂)也可存在于标记组合物中。该其它可检测的物质可化学偶联在花青染料部分上，或者也可简单地存在于与花青染料或其它标记化合物的混合物中。根据本专利技术靶向标记的细胞群优选主要(如果不是完全的话)由成熟上皮细胞组成。成熟上皮细胞是那些有丝分裂已经完成而且已失去增殖能力的细胞。因此，在目标位置处丢失可检测的标记物是由于已标记的细胞从上皮脱落，这不同于标记细胞之间的细胞分裂导致的标记物稀释。标记细胞从目标位置处脱落的速率，以在预定长的时间内丢失的可检测标记物表示，可用多种方法来测定。目前优选由医生直接目视检测目标位置，但也可使用测定是否存在标记物的其它方法(例如，使用X射线或者结合使用X射线显影剂标记物的其它放射性成象法)。在此所用术语“异常细胞脱落速率”是指较正常细胞脱落速率更高或更低的脱落速率。本专利技术的独特之处在于，成熟表面上皮细胞的脱落速率可直接在体内评估，以评价细胞动力学并有助于确定疾病状态的存在。没有细胞更新就不能维持组织功能和形态学的完整性。人胃粘膜和结肠粘膜是连续进行快速细胞丢失(通过管腔内表皮脱落和细胞死亡)和更新的组织的例子。在进行恒定细胞更新以维持特定数量的细胞的器官中，细胞产生和细胞丢失在健康的组织中几乎是以相同的速率进行。在胃粘膜中，具有固定寿命的胃粘膜上皮细胞在位于胃窝底部和腺体的连续上部分处的增殖区域中产生。这些细胞向上迁移至上皮的表面，以补充粘膜细胞，而且在该过程中分本文档来自技高网...

【技术保护点】
体内检测温血动物之成熟表面上皮细胞的异常细胞脱落速率的方法，其包括以下步骤：标记所述动物之目标部位处的成熟表面上皮细胞，然后在上述标记步骤后监测该部位是否存在标记物。

【技术特征摘要】
1.体内检测温血动物之成熟表面上皮细胞的异常细胞脱落速率的方法，其包括以下步骤标记所述动物之目标部位处的成熟表面上皮细胞，然后在上述标记步骤后监测该部位是否存在标记物。2.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞用花青染料标记。3.如权利要求2所述的方法，其中，所述花青染料为下式者其中Y是氧、硫、亚甲基或烷基取代的亚甲基；m是0-3；及n是12-22。4.如权利要求2所述的方法，其中，所述花青染料是下式者或5.如权利要求1所述的方法，其中，所述部位是粘膜表面。6.如权利要求1所述的方法，其中，所述部位是胃的粘膜表面。7.如权利要求1所述的方法，其中，所述部位是结肠的粘膜表面。8.如权利要求1所述的方法，其中，在所述标记步骤后在预选的时间处观察所述部位处的标记物浓度变化，由此检测细胞脱落。9.如权利要求8所述的方法，其中，所述标记物是花青染料，并将所述部位暴露于激发光，然后检测由此得到的荧光强度，由此观察标记物浓度的变化。10.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：多田正弘，
申请(专利权)人：法诺斯技术公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]