描述了阻滞酪氨酸酶合成的试剂的用途，用来防止由药物治疗或代谢失调诱发产生的黑色素沉积引起的永久性虹膜色素沉着。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及阻滞酪氨酸酶合成的试剂的用途，用来防止由药物治疗或代谢失调诱发产生的黑色素沉积引起的永久性虹膜色素沉着。
技术介绍
拉坦前列素(13，14-二氢-17-苯基-18，19，20-三去甲PGF2α异丙基酯)是一种合成的前列腺素类似物(EP-A-0364317)，它以及天然来源的前列腺素、如PGF2α和PGE2，已被显示在慢性治疗过程中诱发猴虹膜的色素沉着增加(Selen G.，Stjernschantz J.，Resul B.“前列腺素诱发的灵长目虹膜色素沉着”，《眼科学调查》(Surv.Ophthalmol)1997；41，增刊2S125-S128)。应答该前列腺素治疗的确切机制是未知的，不过，眼睛颜色变暗必然伴发黑色素合成增加(黑素生成)。而且，在用拉坦前列素治疗(Wistrand PJ，Stjernschantz J.，Olsson K.“作为眼睛颜色的函数，拉坦前列素诱发的虹膜色素沉着的发生率和时间过程”，《眼科学调查》1997；41，增刊2S129-S138)或用异丙基乌诺前列酮(13，14-二氢-15-酮基-20-乙基PGF2α异丙基酯)治疗(Yamamoto T.，Kitazawa Y.“局部异丙基乌诺前列酮治疗后形成的虹膜颜色改变”，《青光眼杂志》(J.Glaucoma)1997；6430-432)的患者中，虹膜颜色变深有时在慢性疗法过程中是引人注意的。特别是虹膜异色的患者、也就是眼睛颜色为蓝棕色、灰棕色、绿棕色或淡褐色的患者，似乎更易患这种副作用。由于该副作用可能不利于美容，特别是患有单侧青光眼的患者，只对一只眼进行治疗，并且由于该副作用是不可逆的和相当频繁的，因此避免其发生会是有利的，尽管它似乎不会对该患者造成健康上的危害。黑色素是一种大量天然来源的聚合物，它是从酪氨酸这种氨基酸生成的。在生成黑色素的最初步骤，酪氨酸被羟基化为L-多巴，后者进一步被氧化为多巴醌。催化这两种反应的酶叫作酪氨酸酶。多巴醌是一种不稳定化合物，它转化为多巴色素，这是一种生成DHICA(二羟基吲哚羧酸)低聚物所必需的黑色化合物，该低聚物又是最终的聚合反应得到真黑色素(黑色或棕色黑色素)所必需的。另外，多巴醌也能与半胱氨酸反应，生成含有硫的低聚物，最终生成pheomelanin(微黄色或微红色黑色素)。重要的是认识到，在黑色素产生过程中的速率限制步骤是由酪氨酸酶催化的反应。例如由于酪氨酸酶基因突变而引起的功能性酪氨酸酶的缺乏总是导致白化病，这是因为体内没有色素可供生成。有趣的是，交感神经元和肾上腺髓质也需要相同的酪氨酸酶来产生去甲肾上腺素、这是一种神经递质，和肾上腺素、这是一种激素，这又是因为这些化合物是从酪氨酸经过生物合成得到的。因此，阻滞酪氨酸酶的化合物将不仅对黑素原生成有影响，而且对交感神经系统也有影响。专利技术概述现已发现，酪氨酸酶的抑制剂、特别是α-甲基-对-酪氨酸，抑制由PGF2α和PGE2衍生物、如拉坦前列素和乌诺前列酮给药诱发的黑色素产生。因此，在前列腺素衍生物对青光眼患者给药前、给药中或给药后用所述酪氨酸酶抑制剂治疗，抑制虹膜黑素细胞产生黑色素，避免了这些患者的眼睛颜色变异。专利技术的详细说明用于阻滞酪氨酸酶合成的经典试剂是α-甲基-对-酪氨酸，这是一种名为甲基酪氨酸的已知药物(《美国化学会会志》77，700，1958)，它是该酶的假底物。于是不生成L-多巴，所以既不能生成黑色素，也不能生成肾上腺素/去甲肾上腺素。该药物已被用于嗜铬细胞瘤的缓和治疗，这是一种肾上腺髓质肿瘤，导致血液中出现高浓度的儿茶酚胺，从而升高血压。以足够高浓度使用的α-甲基-对-酪氨酸能够显著阻滞肾上腺素/去甲肾上腺素以及黑色素的生物合成。当以临床浓度用于治疗嗜铬细胞瘤时，体内的儿茶酚胺浓度明显降低了(Weiner N.，“抑制肾上腺素能神经和阻滞肾上腺素能受体的药物”，见Goodman GilmanA.，Goodman LS，Rall TW，Murad F.编著的《Goodman和Gilman氏治疗学的药理学基础》，Macmillan，纽约，1985，pp 181-214)，在本专利技术的体外实验中，黑色素的产生显著降低了。实质上，任何干扰酪氨酸酶的试剂都将具有同样的有益作用，阻滞黑色素的产生。这样的试剂是例如羟基醌和可与铜离子反应的物质，因为铜是酪氨酸酶必需的辅因子，以及该酶的各种假底物。所以，如果这些试剂是分别给出或者是以混合物方式给出的，该混合物中同时含有拉坦前列素、异丙基乌诺前列酮或任意其他诱发黑素原生成的前列腺素，那么就能够防止、至少能够显著阻碍虹膜中的色素生成。α-甲基-对-酪氨酸的这种活性已被下列实验证实材料和方法细胞培养物从成年供眼者分离眼色素层的黑素细胞，进行培养。切除虹膜，置于皿中，使后表面向上。在37℃的0.25％胰蛋白酶溶液(Gibco，USA)中浸渍2小时后，从基质分离虹膜色素上皮。将剩余的虹膜基质置于4℃的0.25％胰蛋白酶溶液中18小时，随后在37℃下培养1小时。收集被分离的细胞。将胰蛋白酶溶液用胶原酶溶液(400U/ml，在F-12培养基中，Sigma，USA)代替，在37℃下培养。每小时替换胶原酶溶液，收集细胞，离心，再次悬浮，并铺平板，进行3小时。在Falcon培养皿(Becton Dickinson，USA)中，用FIC培养基培养已分离的眼色素层黑素细胞，FIC培养基由F-12培养基组成，其中补充了10％胎牛血清、2mM谷酰胺(均来自Gibco)、10ng/ml霍乱毒素、0.1mM异丁基甲基黄嘌呤、50μg/ml庆大霉素(均来自Sigma)、和20ng/ml基本成纤维细胞生长因子(Promega，USA)。培养皿在湿润的5％CO2大气中进行培养。培养基一周更换三次。必要时加入3至7天的遗传霉素(Sigma，USA)(100μg/ml)，这是一种细胞毒素试剂。用于本项研究的8个细胞系的眼色素层黑素细胞是从具有不同虹膜颜色(棕色和棕蓝色)的供体中分离的。黑色素测量用胰蛋白酶-EDTA溶液分离经过培养的眼色素层黑素细胞，在血细胞计数器中计数，将细胞悬液离心，将沉淀溶于1N NaOH。在475nm下测量光密度，藉此测定黑色素的浓度，并与利用合成黑色素(Sigma)得到的标准曲线进行比较。黑色素含量以ng/细胞表示。黑色素产生量的计算利用下式，在每次产生的开始和结束时测定黑色素的含量和细胞数，藉此计算黑色素的产生量CP＝CtP-C0/1.3D(P-1)其中C0和Ct分别代表在时间为0和时间为t时每个细胞中的黑色素含量；P是时间t过程中的群体增加，D是眼色素层黑素细胞的加倍时间；CP是时间t过程中每天每个细胞的黑色素产生量。酪氨酸酶活性利用Pomerantz法并作适应性改进，在九个细胞系中评价酪氨酸酶的活性，该方法是以3H2O的测量为基础的，3H2O由酶催化的酪氨酸的羟基化反应释放出来的。结果当以最高摩尔浓度加入拉坦前列素时，从5个棕色虹膜的细胞系和3个棕蓝色虹膜的细胞系培养得到的虹膜黑素细胞中的黑色素含量显示出增加了。对黑色素的产生量和酪氨酸酶的活性也发现了同样结果(表1和2)。加入α-甲基-对-酪氨酸(10-5M)后，在含有10-7至10-5M拉坦前列素的从棕色虹膜和棕蓝色虹膜培养得到本文档来自技高网...
【技术保护点】
酪氨酸酶抑制剂在药物制备中的用途，该药物防止由药物治疗或代谢失调诱发的虹膜黑素细胞产生黑色素。
【技术特征摘要】
IT 1997-4-22 MI97A0009391.酪氨酸酶抑制剂在药物制备中的用途，该药物防止由药物治疗或代谢失调诱发的虹膜黑素细胞产生黑色素。2.根据权利要求1的用途，其中黑色素的产生是由PGF2α或PGE2衍生物诱发的。3.根据权利要求2的用途，其中该PGF2α或PGE2衍生物是拉坦前列素或乌诺前列酮。4.根据任意一项前述权利要求的用途，其中该酪氨酸酶抑制剂是α-甲基-...
【专利技术属性】
技术研发人员：F德拉戈，
申请(专利权)人：法玛西雅和厄普约翰公司，
类型：发明
国别省市：SE[瑞典]
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