北美人参馏分的制备方法、含有它们的产物以及作为免疫调节剂的用途技术

本发明专利技术涉及制备北美人参（西洋参）馏分的化学方法和含有这些馏分的组合物。本发明专利技术的产物可用于刺激细胞因子和／或抗体的生成，或作为以免疫力低下为特征的疾病如感冒、流行性感冒、慢性疲劳综合征、ＡＩＤＳ和癌症的靶向治疗剂。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及制备北美人参(西洋参)馏分的化学方法和含有这些馏分的组合物。本专利技术的产物可以用于刺激抗体生成，或作为靶向治疗剂用于以免疫力低下为特征的病症，例如感冒、流行性感冒、慢性疲劳综合征、AIDS、癌症等。本专利技术的产物还可以给接受化疗或放射疗法的癌症患者用作补剂，已知这些疗法可引起严重的免疫抑制。
技术介绍
数百年来，某些无毒物质如草药化合物的应用业已在多种生理条件下被广泛接受，尤其是在东方。人参是最为人们所熟知的传统中草药。人参提取物本身或它与其他药物联合使用时的药理学活性包括减轻肾损伤、抑制癌的发生且预防应激反应。另外还有许多关于人参作用于个体免疫反应的报导。迄今有关人参的一些免疫调节性质已见诸报导，其中包括增强宿主对感染的抵抗力、抗炎作用、抑制肿瘤生长和在细胞水平调节某些免疫功能。美洲人参，即西洋参，是另一个种的人参，它作为具有多种有益健康作用的保健补品已被公众接受。数组科学家业已尝试分离并阐明了人参中的多糖类化合物的结构。已证实一些多糖在免疫系统中具有调节活性。日本Kyoritsu药学院的Tomoda小组对人参多糖的分离、鉴定和生物价值进行了一系列研究。在一组实验中，对人参多糖的分馏是基于其酸性不同。已从高丽参(西洋参)的根部分离出两种具有免疫学活性的酸性多糖。用热水提取根切片。该提取物在硫酸钠存在下用溴化十六烷基三甲铵(CTAB)处理。沉淀物被分离、透析并且上样至葡聚糖凝胶(Sephadex)G25色谱柱、DEAE-葡聚糖纤维素(Sephacel)(Parmacial)色谱柱，得到两种纯净多糖，被称作人参烷(ginsenan)PA和人参烷PB。分别在Toyopearl HW-55F上进行凝胶色谱，得到人参烷PA和人参烷PB的分子量各为1.6×105和5.5×104。定量分析显示，人参烷PA含有21.3％阿拉伯糖、53.4％半乳糖、2.0％鼠李糖、16.0％半乳糖醛酸和2.7％葡糖醛酸。这些糖组分的摩尔比为11∶22∶1∶6∶1。人参烷PB含有11.0％阿拉伯糖、32.2％半乳糖、8.1％鼠李糖、39.9％半乳糖醛酸和5.0％葡糖醛酸。这些糖组分的摩尔比为3∶7∶2∶8∶1。这两种多糖在碳清除实验中表现出显著的网状内皮系统增效作用，以及明显的抗补体活性和剂量依赖的碱性磷酸酶诱导活性。在另一个实验中，从上述用CTAB处理的提取物的上清液中，分离出另外两种多糖，其方法是把上清液倾入乙醇中。分离出沉淀物并上样至DEAE-Sephadex A-25和Sephadex G-25色谱柱上，得到另外两种纯净多糖，被称作S-ⅠA和S-ⅡA。分别在Yoyopearl HW-55F上进行凝胶色谱分析，获得S-ⅠA和S-ⅡA的分子量各为5.6×104和1.0×105。人参烷S-ⅠA含有42.3％阿拉伯糖、50.8％半乳糖和16.0％半乳糖醛酸，其摩尔比为8∶8∶1。人参烷S-ⅡA由42.0％L-阿拉伯糖、32.6％半乳糖、6.2％葡萄糖和19.2％半乳糖醛酸组成，其摩尔比为15∶10∶2∶5。日本Kitasato学院东方医学研究中心的Yamada小组已从西洋参的叶和根中分离出若干种多糖馏分。他们研究并比较了这些馏分的化学性质和生物活性。中国人参的根和叶在经过乙醇处理除去其人参皂甙后用水提取，再将残余物用0.5M NaOH提取，得到水溶性多糖馏分和碱性可溶多糖馏分(水溶性馏分分别称作GR-2和GL-2，碱溶性馏分分别称作GRA-2和GLA-2)。基于多糖成分的酸性，经过十六烷基三甲胺处理的上述所有馏分进一步被分为强酸性(称作产物GR-3、GL-3、GRA-3和GLA-3)、弱酸性(称作GR-4、GL-4、GRA-4和GLA-4)和中性(称作GR-5、GL-5、GRA-5和GLA-5)多糖馏分。根的多糖含量大于叶的多糖含量。得自根部的强酸性多糖馏分具有高含量的糖醛酸，甚至超过了50％。从所有馏分中都可以检测出类似的糖组分。它们是鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸。半乳糖醛酸是主要的醛酸组分。具有最高抗补体活性的馏分GL-3被用DEAE-Sephadex、Sepharose(琼脂糖)CL-6B、DEAE Toyopearl色谱柱进一步分馏，由乙醇沉淀获得了被称作GL-PⅠ至GL-PIV的馏分。所有馏分都含有32-44％的醛酸。馏分PI具有最大分子量，为50，000。PⅠ和PⅡ主要由Rha、Gal和GalA组成，而PⅢ还另外含有Fuc，PIV由Gal、Glc和GalA组成。对结构将进行详尽的测定。通过在DEAE Sepharose CL-6B和Sepharose CL-6B上进行层析，在弱酸性多糖馏分GL-4中分离出抗溃疡果胶多糖(GL-BⅢ)。它主要由Rha、Ara、Man、Gal、Glc、GalA和GlcA以摩尔比3∶4∶2∶10∶1∶7∶4组成。对其结构进行详细测定。在DEAE-Sepharose CL-6B上通过阴离子交换色谱法可以从GL-4分离出另一种具有增强巨噬细胞Fc受体表达作用的多糖(GL-4Ⅱb2)。化学分析显示，该样品含有共65％的碳水化合物和33.7％醛酸。对其进行组成分析和结构测定。同一组的技术人员还研究了另一种具有抗补体活性的西洋参提取物G-115。将G-115分馏以鉴定具有抗补体和促有丝分裂活性的活性物质。在该多糖粗馏分G-115G中观察到最强的抗补体活性，而水溶性可透析馏分G-115E表现出最有效的促有丝分裂活性。通过溴化十六烷基三甲铵沉淀、在DEAE-Sepharose上进行阴离子交换层析和在Sepharose CL-4B上进行凝胶过滤，将G-115G进一步提纯，得到一种重要的有效抗补体多糖G-115Ⅰ1-Ⅱa-2-3。此多糖为同型多糖。估计其分子量为3.68×105。其中除了含有少量半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸和鼠李糖以外，主要是由阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖组成。日本Tohoku大学药学院的Hikino小组从韩国、中国和日本人参中分离出人参多糖。他们对人参多糖的降血糖活性进行了试验。已阐明了其组成和一些结构特征。从美国人参中分离出三种多糖，quiquefolans A至C。通过Sephacryl(聚丙烯酰胺葡聚糖)S-S00的凝胶色谱法测出它们的分子量大于2.0×106。quinquefolan A内的中性糖组分是甘露糖和葡萄糖(摩尔比为1.0∶2.3)，quinquefolan B内的是甘露糖和葡萄糖(摩尔比1.0∶5.5)，quinquefolan C是木糖。发现在quinquefolan A至C中酸性糖组分分别占10.8％、11.7％和7.1％。对于quinquefolan A至C来说，上述聚糖中的肽部分含量分别是2.7％、2.9％和2.3％。所有这些多糖在正常和四氧嘧啶减少型低血糖小鼠中均表现出降血糖作用。韩国汉城的韩国癌症中心医院免疫实验室的研究人员从西洋参中分离出分子量为150，000被称作Ginsan的酸性多糖。此多糖是由3.7％蛋白质和47.1％己糖(葡萄糖和半乳糖)和43.1％醛酸(半乳糖醛酸)组成的。Ginsan诱发T细胞和B细胞增生，并且通过产生内源性多细胞因子，从天然杀伤细胞和T细胞繁殖出淋巴因子激活型杀伤细胞。中国东北师范大学的M本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备人参馏分ＰＱ↓［２］的方法，该方法包括： （ａ）将美国人参与含有醇的第一溶剂混合，并将所得溶液在约８０－１００℃的温度下加热约２－４小时，制得第一人参溶液； （ｂ）此后将第一人参溶液分离，得到醇／人参溶液和第一人参残余物； （ｃ）再将上述第一人参残余物和水混合，并将所得溶液在约８０－１００℃的温度下加热约２－４小时，制得人参残余物溶液； （ｄ）进而将上述人参残余物溶液分离，制得第二人参残余物和含有第一人参提取物的第一水提液； （ｅ）制备含有至少部分第一人参提取物的第二水提液，其中在第二水提液中第一人参提取物和水的比例约为１∶１８－１∶２２； （ｆ）此后将上述第二水提液和含有醇的第二溶剂混合，其中第二溶剂和水的比例约为１∶１－３∶５，制得第一沉淀物和第一上清液； （ｇ）随后将步骤（ｆ）获得的第一上清液和含有醇的第三溶剂混合，其中，所述第三溶剂和第一上清液的比例约为３∶２－３∶１，生成第二沉淀物和第二上清液；和 （ｈ）分离上述第二沉淀物，得到人参馏分ＰＱ↓［２］。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：杰奎琳J单，彼得KT庞，黄步汉，凌雷，
申请(专利权)人：CV技术公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]